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- 详细信息
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100
- 英文名：
pQE31
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
- 规格：
0.5ug
基本信息
名称：pQE-31大肠表达质粒
别称: pQE31
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3463 bp ds-DNA circular SYN 08-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS PQE-31
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3463)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Thursday, September 8, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3463
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 10..54
/note="T5 promoter"
/note="bacteriophage T5 promoter for E. coli RNA
polymerase, with embedded lac operator"
protein_bind 30..46
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
protein_bind 62..78
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
RBS 97..108
/note="strong bacterial ribosome binding site (Elowitz and
Leibler, 2000)"
CDS 127..144
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 210..304
/note="lambda t0 terminator"
/note="transcription terminator from phage lambda"
CDS 348..1007
/codon_start=1
/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
/note="CmR"
/note="confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
terminator 1072..1158
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
misc_feature 1313..1453
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(1639..2227)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2398..3258)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(3259..3363)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 ctcgagaaat cataaaaaat ttatttgctt tgtgagcgga taacaattat aatagattca
61 attgtgagcg gataacaatt tcacacagaa ttcattaaag aggagaaatt aactatgaga
121 ggatctcacc atcaccatca ccatacggat ccgcatgcga gctcggtacc ccgggtcgac
181 ctgcagccaa gcttaattag ctgagcttgg actcctgttg atagatccag taatgacctc
241 agaactccat ctggatttgt tcagaacgct cggttgccgc cgggcgtttt ttattggtga
301 gaatccaagc tagcttggcg agattttcag gagctaagga agctaaaatg gagaaaaaaa
361 tcactggata taccaccgtt gatatatccc aatggcatcg taaagaacat tttgaggcat
421 ttcagtcagt tgctcaatgt acctataacc agaccgttca gctggatatt acggcctttt
481 taaagaccgt aaagaaaaat aagcacaagt tttatccggc ctttattcac attcttgccc
541 gcctgatgaa tgctcatccg gaatttcgta tggcaatgaa agacggtgag ctggtgatat
601 gggatagtgt tcacccttgt tacaccgttt tccatgagca aactgaaacg ttttcatcgc
661 tctggagtga ataccacgac gatttccggc agtttctaca catatattcg caagatgtgg
721 cgtgttacgg tgaaaacctg gcctatttcc ctaaagggtt tattgagaat atgtttttcg
781 tctcagccaa tccctgggtg agtttcacca gttttgattt aaacgtggcc aatatggaca
841 acttcttcgc ccccgttttc accatgggca aatattatac gcaaggcgac aaggtgctga
901 tgccgctggc gattcaggtt catcatgccg tttgtgatgg cttccatgtc ggcagaatgc
961 ttaatgaatt acaacagtac tgcgatgagt ggcagggcgg ggcgtaattt ttttaaggca
1021 gttattggtg cccttaaacg cctggggtaa tgactctcta gcttgaggca tcaaataaaa
1081 cgaaaggctc agtcgaaaga ctgggccttt cgttttatct gttgtttgtc ggtgaacgct
1141 ctcctgagta ggacaaatcc gccctctaga gctgcctcgc gcgtttcggt gatgacggtg
1201 aaaacctctg acacatgcag ctcccggaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg
1261 ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggcgcagcca
1321 tgacccagtc acgtagcgat agcggagtgt atactggctt aactatgcgg catcagagca
1381 gattgtactg agagtgcacc atatgcggtg tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa
1441 ataccgcatc aggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
1501 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
1561 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
1621 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
1681 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
1741 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
1801 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
1861 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
1921 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
1981 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
2041 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc
2101 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
2161 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
2221 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
2281 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
2341 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
2401 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
2461 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
2521 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
2581 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
2641 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
2701 tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
2761 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
2821 tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat
2881 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
2941 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
3001 ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat
3061 cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag
3121 ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt
3181 ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg
3241 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta
3301 ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc
3361 gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtctaagaa accattatta tcatgacatt
3421 aacctataaa aataggcgta tcacgaggcc ctttcgtctt cac
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pQE-31大肠表达质粒
别称: pQE31
| 启动子: | T5 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | Lambda t0 |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；pQE系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 3463bp |
| 质粒标签: | N-His |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | M15 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | 无需诱导 |
| 5'测序引物: | pQE30-F: AGCGGATAACAATTTCACACAG |
| 3'测序引物: | pQE30-R: TTCTGAGGTCATTACTGGATC |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3463 bp ds-DNA circular SYN 08-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS PQE-31
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3463)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Thursday, September 8, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3463
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 10..54
/note="T5 promoter"
/note="bacteriophage T5 promoter for E. coli RNA
polymerase, with embedded lac operator"
protein_bind 30..46
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
protein_bind 62..78
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
RBS 97..108
/note="strong bacterial ribosome binding site (Elowitz and
Leibler, 2000)"
CDS 127..144
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 210..304
/note="lambda t0 terminator"
/note="transcription terminator from phage lambda"
CDS 348..1007
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/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
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/note="confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
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DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
terminator 1072..1158
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
misc_feature 1313..1453
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(1639..2227)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2398..3258)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
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related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(3259..3363)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 ctcgagaaat cataaaaaat ttatttgctt tgtgagcgga taacaattat aatagattca
61 attgtgagcg gataacaatt tcacacagaa ttcattaaag aggagaaatt aactatgaga
121 ggatctcacc atcaccatca ccatacggat ccgcatgcga gctcggtacc ccgggtcgac
181 ctgcagccaa gcttaattag ctgagcttgg actcctgttg atagatccag taatgacctc
241 agaactccat ctggatttgt tcagaacgct cggttgccgc cgggcgtttt ttattggtga
301 gaatccaagc tagcttggcg agattttcag gagctaagga agctaaaatg gagaaaaaaa
361 tcactggata taccaccgtt gatatatccc aatggcatcg taaagaacat tttgaggcat
421 ttcagtcagt tgctcaatgt acctataacc agaccgttca gctggatatt acggcctttt
481 taaagaccgt aaagaaaaat aagcacaagt tttatccggc ctttattcac attcttgccc
541 gcctgatgaa tgctcatccg gaatttcgta tggcaatgaa agacggtgag ctggtgatat
601 gggatagtgt tcacccttgt tacaccgttt tccatgagca aactgaaacg ttttcatcgc
661 tctggagtga ataccacgac gatttccggc agtttctaca catatattcg caagatgtgg
721 cgtgttacgg tgaaaacctg gcctatttcc ctaaagggtt tattgagaat atgtttttcg
781 tctcagccaa tccctgggtg agtttcacca gttttgattt aaacgtggcc aatatggaca
841 acttcttcgc ccccgttttc accatgggca aatattatac gcaaggcgac aaggtgctga
901 tgccgctggc gattcaggtt catcatgccg tttgtgatgg cttccatgtc ggcagaatgc
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1081 cgaaaggctc agtcgaaaga ctgggccttt cgttttatct gttgtttgtc ggtgaacgct
1141 ctcctgagta ggacaaatcc gccctctaga gctgcctcgc gcgtttcggt gatgacggtg
1201 aaaacctctg acacatgcag ctcccggaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg
1261 ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggcgcagcca
1321 tgacccagtc acgtagcgat agcggagtgt atactggctt aactatgcgg catcagagca
1381 gattgtactg agagtgcacc atatgcggtg tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa
1441 ataccgcatc aggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
1501 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
1561 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
1621 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
1681 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
1741 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
1801 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
1861 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
1921 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
1981 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
2041 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc
2101 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
2161 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
2221 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
2281 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
2341 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
2401 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
2461 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
2521 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
2581 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
2641 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
2701 tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
2761 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
2821 tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat
2881 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
2941 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
3001 ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat
3061 cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag
3121 ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt
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3241 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta
3301 ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc
3361 gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtctaagaa accattatta tcatgacatt
3421 aacctataaa aataggcgta tcacgaggcc ctttcgtctt cac
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3920/pCMV-SPORT6-FAM206A人源基因质粒 |
| P3921/pCMV-SPORT6-CLDN11人源基因质粒 |
| P3922/pCMV-SPORT6-CAST（52-2253bp）人源基因质粒 |
| P3923/pCMV-SPORT6-MFN2人源基因质粒 |
| P3924/pCMV-SPORT6-G0S2人源基因质粒 |
| P3925/pCMV-SPORT6-TUBG2人源基因质粒 |
| P3926/pCMV-SPORT6-UBLCP1人源基因质粒 |
| P3927/pCMV-SPORT6-TADA3人源基因质粒 |
| P3928/pCMV-SPORT6-PTS人源基因质粒 |
| P3929/pCMV-SPORT6-MYD88人源基因质粒 |
| P3930/pCMV-SPORT6-LMF1人源基因质粒 |
| P3931/pCMV-SPORT6-DLX4人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
时有助于保持稳定6×组氨酸DHFR标签在小鼠和大鼠中的免疫原性不高，所以与之融合的重组蛋白不需要把标签切除，可以直接进行免疫或者表位测图QIAexpress系列都是用pQE载体进行的，作为德国出品的东西，它具有德国人一贯的严谨性，各方面都考虑得比较周全。pQE载体都是以T5启动子起始转录－翻译系统的，pQE 是pDS家族的一员，来源于pDS56/RBSII和pDS781/RBSII-DHFRS。这些低拷贝质粒都有以下特征：优化的启动子－操纵元模式，包括来自噬菌体的T5启动子（由大肠杆菌的RNA
在10mL DNA样品中，加T4 DNA连接酶缓冲液1mL，T4 DNA连接酶1mL，14℃（室温）过夜，然后做大肠杆菌的转化。 三、转化感受态细胞 1. 制备的感受态细胞(-20℃保存的)。 2. 在100mL的融化后处于冰浴的感受态细胞中，加入10mL连接产物，混匀，冰上放置30分钟，以后的操作参照实验一进行。同时做未加CAT片段的空白pQE-31载体质粒连接处理后的感受态细胞转化的对照。 实验结果 过夜培养后，实验组和对照组的两个培养皿上都可能会出现一些菌落。如果实
a氨苄抗性带His标签（N端）+DsbA(二硫键形成蛋白A)：氨苄抗性带Gst标签（N端）：pGEX-KG，pGEX4T-1，pGEX-5x-1共表达载体：pET-duet。(含有两个T7启动子)表达宿主菌为M15系列表达载体：pQE31表达宿主菌为DH5a,JM109系列热启动表达载体：pBV220克隆载体pGEM-7Z,pUC19 三，自研发原核表达载体1，带His标签（N端）：PET-DsbA卡那抗性2，带His标签（N端）：PET-DsbA（mutation）卡那抗性说明：DsbA(二硫
pQE-31大肠表达质粒
￥580 - 1280
