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- Xybio
- P0792
- 上海
- 2025年11月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
pETTrx
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
- 规格：
0.5ug
名称：pET-Trx大肠表达质粒
别称: pETTrx
| 别称: | pETTrx |
|---|---|
| 启动子: | T7 |
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；PET系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 3.3kb |
| 质粒标签: | N-TRX,N-P3C |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | BL21(DE3) |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3'测序引物: | T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pET-Trx是一个大肠杆菌pET系列表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
基因克隆表达功能区序列如下，经DNA双向测序验证：
ORIGIN
1 tctagaaata attttgttta actttaagaa ggagatatac atatgtctga taaaattatt
61 catctgactg atgattcttt tgatactgat gtacttaagg cagatggtgc aatcctggtt
121 gatttctggg cacactggtg cggtccgtgc aaaatgatcg ctccgattct ggatgaaatc
181 gctgacgaat atcagggcaa actgaccgtt gcaaaactga acatcgatca caacccgggc
241 actgcgccga aatatggcat ccgtggtatc ccgactctgc tgctgttcaa aaacggtgaa
301 gtggcggcaa ccaaagtggg tgcactgtct aaaggtcagt tgaaagagtt cctcgacgct
361 aacctggctg gctctagcat gccagactct ctcgaagttc tgtttcaggg tccagcagga
421 tccgcagaat tcagcgctag ctaacatcat catcatcatt aagctt
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2274/pWJ68大肠基因编辑质粒 |
| P1104/p2CT-His-MBP-Lbu_C2c2_WT大肠敲除质粒 |
| P3014/p2CT-His-MBP-Lbu_C2c2_R1079A_K1080A大肠编辑质粒 |
| P1869/pCAS9-CR4大肠敲除质粒 |
| P1119/p2CT-His-MBP-Lbu_C2c2_R472A_H477A_R1048A_H1053A大肠敲除质粒 |
| P2838/pREDCas9大肠敲除质粒 |
| P3064/pET-28b-Cas9-His大肠编辑质粒 |
| P0705/pBPK2101-saCas9-gRNA大肠编辑质粒 |
| P1183/pY001 (pFnCpf1_full)大肠敲除质粒 |
| P1736/6-His-MBP-TEV-FnCpf1大肠敲除质粒 |
| P2440/pJYS1Ptac大肠敲除质粒 |
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文献和实验晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction system（pET系列质粒）的发明者。 T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了，但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统
，或者可以表达以产生重组蛋白。pET-32α（+）载体系列用于表达与109 aa Trx•Tag™硫氧还蛋白融合的肽序列。它属于一种表达系统，可在其激活后产生所需的蛋白质。插入原核宿主细胞。原核细胞如大肠杆菌因为它们廉价，快速的生物量积累和简单的工艺规模扩大，因此是外源蛋白表达的首选宿主。在本文中，我们将重点总结这种在我们的实验室中使用的有用技术。表达后pET-32α（+）载体的构建，蛋白质表达和蛋白质纯化将在本文中详细描述。获得用于构建载体的外源DNA片段插入载体的DNA通常可以使用聚合酶链式反应（PCR
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
