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- P0058
- 上海
- 2025年11月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
pMBPP
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
- 规格：
0.5ug
基本信息
名称：pMBP-P大肠表达质粒
别称: pMBPP
质粒属性
质粒简介
pMBP-P载体需要被IPTG诱导才能在BL21(DE3)中表达，质粒大小为6741bp，复制子是ColE1 ori，是一个高拷贝质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6741 bp ds-DNA circular SYN 05-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pMBP-P
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6741)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, September 6, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6741
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 3..80
/gene="lacI (mutant)"
/note="lacIq promoter"
/note="In the lacIq allele, a single base change in the
promoter boosts expression of the lacI gene about 10-fold."
CDS 81..1163
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
misc_feature 1406..1434
/note="tac promoter"
/note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and
lac UV5 promoters"
protein_bind 1442..1458
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 1528..2703
/codon_start=1
/gene="malE"
/product="maltose binding protein from E. coli"
/note="MBP"
/note="This gene encodes a signal sequence that can direct
MBP to the bacterial periplasm."
/translation="MKIKTGARILALSALTTMMFSASALAKIEEGKLVIWINGDKGYNG
LAEVGKKFEKDTGIKVTVEHPDKLEEKFPQVAATGDGPDIIFWAHDRFGGYAQSGLLAE
ITPDKAFQDKLYPFTWDAVRYNGKLIAYPIAVEALSLIYNKDLLPNPPKTWEEIPALDK
ELKAKGKSALMFNLQEPYFTWPLIAADGGYAFKYENGKYDIKDVGVDNAGAKAGLTFLV
DLIKNKHMNADTDYSIAEAAFNKGETAMTINGPWAWSNIDTSKVNYGVTVLPTFKGQPS
KPFVGVLSAGINAASPNKELAKEFLENYLLTDEGLEAVNKDKPLGAVALKSYEEELAKD
PRIAATMENAQKGEIMPNIPQMSAFWYAVRTAVINAASGRQTVDEALKDAQT"
CDS 2803..2820
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
primer_bind complement(2831..2847)
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
terminator 3196..3282
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 3374..3401
/note="rrnB T2 terminator"
/note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
gene"
promoter 3421..3512
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 3513..4373
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERSPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin complement(4415..4928)
/direction=LEFT
/note="M13 ori"
/note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
rep_origin 5039..5627
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 5813..5955
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
CDS complement(6057..6248)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
ORIGIN
1 ccgacaccat cgaatggtgc aaaacctttc gcggtatggc atgatagcgc ccggaagaga
61 gtcaattcag ggtggtgaat gtgaaaccag taacgttata cgatgtcgca gagtatgccg
121 gtgtctctta tcagaccgtt tcccgcgtgg tgaaccaggc cagccacgtt tctgcgaaaa
181 cgcgggaaaa agtggaagcg gcgatggcgg agctgaatta cattcccaac cgcgtggcac
241 aacaactggc gggcaaacag tcgttgctga ttggcgttgc cacctccagt ctggccctgc
301 acgcgccgtc gcaaattgtc gcggcgatta aatctcgcgc cgatcaactg ggtgccagcg
361 tggtggtgtc gatggtagaa cgaagcggcg tcgaagcctg taaagcggcg gtgcacaatc
421 ttctcgcgca acgcgtcagt gggctgatca ttaactatcc gctggatgac caggatgcca
481 ttgctgtgga agctgcctgc actaatgttc cggcgttatt tcttgatgtc tctgaccaga
541 cacccatcaa cagtattatt ttctcccatg aagacggtac gcgactgggc gtggagcatc
601 tggtcgcatt gggtcaccag caaatcgcgc tgttagcggg cccattaagt tctgtctcgg
661 cgcgtctgcg tctggctggc tggcataaat atctcactcg caatcaaatt cagccgatag
721 cggaacggga aggcgactgg agtgccatgt ccggttttca acaaaccatg caaatgctga
781 atgagggcat cgttcccact gcgatgctgg ttgccaacga tcagatggcg ctgggcgcaa
841 tgcgcgccat taccgagtcc gggctgcgcg ttggtgcgga tatctcggta gtgggatacg
901 acgataccga agacagctca tgttatatcc cgccgttaac caccatcaaa caggattttc
961 gcctgctggg gcaaaccagc gtggaccgct tgctgcaact ctctcagggc caggcggtga
1021 agggcaatca gctgttgccc gtctcactgg tgaaaagaaa aaccaccctg gcgcccaata
1081 cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt
1141 cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg taagttagct cactcattag
1201 gcacaattct catgtttgac agcttatcat cgactgcacg gtgcaccaat gcttctggcg
1261 tcaggcagcc atcggaagct gtggtatggc tgtgcaggtc gtaaatcact gcataattcg
1321 tgtcgctcaa ggcgcactcc cgttctggat aatgtttttt gcgccgacat cataacggtt
1381 ctggcaaata ttctgaaatg agctgttgac aattaatcat cggctcgtat aatgtgtgga
1441 attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagccagt ccgtttaggt gttttcacga
1501 gcacttcacc aacaaggacc atagcatatg aaaataaaaa caggtgcacg catcctcgca
1561 ttatccgcat taacgacgat gatgttttcc gcctcggctc tcgccaaaat cgaagaaggt
1621 aaactggtaa tctggattaa cggcgataaa ggctataacg gtctcgctga agtcggtaag
1681 aaattcgaga aagataccgg aattaaagtc accgttgagc atccggataa actggaagag
1741 aaattcccac aggttgcggc aactggcgat ggccctgaca ttatcttctg ggcacacgac
1801 cgctttggtg gctacgctca atctggcctg ttggctgaaa tcaccccgga caaagcgttc
1861 caggacaagc tgtatccgtt tacctgggat gccgtacgtt acaacggcaa gctgattgct
1921 tacccgatcg ctgttgaagc gttatcgctg atttataaca aagatctgct gccgaacccg
1981 ccaaaaacct gggaagagat cccggcgctg gataaagaac tgaaagcgaa aggtaagagc
2041 gcgctgatgt tcaacctgca agaaccgtac ttcacctggc cgctgattgc tgctgacggg
2101 ggttatgcgt tcaagtatga aaacggcaag tacgacatta aagacgtggg cgtggataac
2161 gctggcgcga aagcgggtct gaccttcctg gttgacctga ttaaaaacaa acacatgaat
2221 gcagacaccg attactccat cgcagaagct gcctttaata aaggcgaaac agcgatgacc
2281 atcaacggcc cgtgggcatg gtccaacatc gacaccagca aagtgaatta tggtgtaacg
2341 gtactgccga ccttcaaggg tcaaccatcc aaaccgttcg ttggcgtgct gagcgcaggt
2401 attaacgccg ccagtccgaa caaagagctg gcaaaagagt tcctcgaaaa ctatctgctg
2461 actgatgaag gtctggaagc ggttaataaa gacaaaccgc tgggtgccgt agcgctgaag
2521 tcttacgagg aagagttggc gaaagatcca cgtattgccg ccaccatgga aaacgcccag
2581 aaaggtgaaa tcatgccgaa catcccgcag atgtccgctt tctggtatgc cgtgcgtact
2641 gcggtgatca acgccgccag cggtcgtcag actgtcgatg aagccctgaa agacgcgcag
2701 actaattcga gctctaacaa caacaacaac aacaacaata acaacctggg tatcgatact
2761 actgagaact atccgcgtgg atccgcagaa ttcagcgcta gccaccatca tcatcatcat
2821 taagcttggc actggccgtc gttttacaac gtcgtgactg ggaaaaccct ggcgttaccc
2881 aacttaatcg ccttgcagca catccccctt tcgccagctg gcgtaatagc gaagaggccc
2941 gcaccgatcg cccttcccaa cagttgcgca gcctgaatgg cgaatggcag cttggctgtt
3001 ttggcggatg agataagatt ttcagcctga tacagattaa atcagaacgc agaagcggtc
3061 tgataaaaca gaatttgcct ggcggcagta gcgcggtggt cccacctgac cccatgccga
3121 actcagaagt gaaacgccgt agcgccgatg gtagtgtggg gtctccccat gcgagagtag
3181 ggaactgcca ggcatcaaat aaaacgaaag gctcagtcga aagactgggc ctttcgtttt
3241 atctgttgtt tgtcggtgaa cgctctcctg agtaggacaa atccgccggg agcggatttg
3301 aacgttgcga agcaacggcc cggagggtgg cgggcaggac gcccgccata aactgccagg
3361 catcaaatta agcagaaggc catcctgacg gatggccttt ttgcgtttct acaaactctt
3421 tttgtttatt tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa taaccctgat
3481 aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga gtatgagtat tcaacatttc cgtgtcgccc
3541 ttattccctt ttttgcggca ttttgccttc ctgtttttgc tcacccagaa acgctggtga
3601 aagtaaaaga tgctgaagat cagttgggtg cacgagtggg ttacatcgaa ctggatctca
3661 acagcggtaa gatccttgag agttttcgcc ccgaagaacg ttctccaatg atgagcactt
3721 ttaaagttct gctatgtggc gcggtattat cccgtgttga cgccgggcaa gagcaactcg
3781 gtcgccgcat acactattct cagaatgact tggttgagta ctcaccagtc acagaaaagc
3841 atcttacgga tggcatgaca gtaagagaat tatgcagtgc tgccataacc atgagtgata
3901 acactgcggc caacttactt ctgacaacga tcggaggacc gaaggagcta accgcttttt
3961 tgcacaacat gggggatcat gtaactcgcc ttgatcgttg ggaaccggag ctgaatgaag
4021 ccataccaaa cgacgagcgt gacaccacga tgcctgtagc aatggcaaca acgttgcgca
4081 aactattaac tggcgaacta cttactctag cttcccggca acaattaata gactggatgg
4141 aggcggataa agttgcagga ccacttctgc gctcggccct tccggctggc tggtttattg
4201 ctgataaatc tggagccggt gagcgtgggt ctcgcggtat cattgcagca ctggggccag
4261 atggtaagcc ctcccgtatc gtagttatct acacgacggg gagtcaggca actatggatg
4321 aacgaaatag acagatcgct gagataggtg cctcactgat taagcattgg taactgtcag
4381 accaagttta ctcatatata ctttagattg atttaccccg gttgataatc agaaaagccc
4441 caaaaacagg aagattgtat aagcaaatat ttaaattgta aacgttaata ttttgttaaa
4501 attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa
4561 aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa
4621 caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca
4681 gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc caaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg
4741 taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc
4801 ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc
4861 aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca
4921 gggcgcgtaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt
4981 aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt
5041 gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag
5101 cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca
5161 gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca
5221 agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg
5281 ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg
5341 cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct
5401 acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga
5461 gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc
5521 ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg
5581 agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg
5641 cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt
5701 tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga gtgagctgat accgctcgcc
5761 gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga agcggaagag cgcctgatgc
5821 ggtattttct ccttacgcat ctgtgcggta tttcacaccg catatatggt gcactctcag
5881 tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtataca ctccgctatc gctacgtgac
5941 tgggtcatgg ctgcgccccg acacccgcca acacccgctg acgcgccctg acgggcttgt
6001 ctgctcccgg catccgctta cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg catgtgtcag
6061 aggttttcac cgtcatcacc gaaacgcgcg aggcagctgc ggtaaagctc atcagcgtgg
6121 tcgtgcagcg attcacagat gtctgcctgt tcatccgcgt ccagctcgtt gagtttctcc
6181 agaagcgtta atgtctggct tctgataaag cgggccatgt taagggcggt tttttcctgt
6241 ttggtcactg atgcctccgt gtaaggggga tttctgttca tgggggtaat gataccgatg
6301 aaacgagaga ggatgctcac gatacgggtt actgatgatg aacatgcccg gttactggaa
6361 cgttgtgagg gtaaacaact ggcggtatgg atgcggcggg accagagaaa aatcactcag
6421 ggtcaatgcc agcgcttcgt taatacagat gtaggtgttc cacagggtag ccagcagcat
6481 cctgcgatgc agatccggaa cataatggtg cagggcgctg acttccgcgt ttccagactt
6541 tacgaaacac ggaaaccgaa gaccattcat gttgttgctc aggtcgcaga cgttttgcag
6601 cagcagtcgc ttcacgttcg ctcgcgtatc ggtgattcat tctgctaacc agtaaggcaa
6661 ccccgccagc ctagccgggt cctcaacgac aggagcacga tcatgcgcac ccgtggccag
6721 gacccaacgc tgcccgaaat t
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pMBP-P大肠表达质粒
别称: pMBPP
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | rrnB T1 terminator |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；PET系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 6741bp |
| 质粒标签: | N-MBP，N-Thrombin，C-6×His |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | BL21(DE3) |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | M13：PUC 5 CGC CAG GGT TTT CCC AGT CAC GAC 3 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
pMBP-P载体需要被IPTG诱导才能在BL21(DE3)中表达，质粒大小为6741bp，复制子是ColE1 ori，是一个高拷贝质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6741 bp ds-DNA circular SYN 05-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pMBP-P
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6741)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, September 6, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6741
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 3..80
/gene="lacI (mutant)"
/note="lacIq promoter"
/note="In the lacIq allele, a single base change in the
promoter boosts expression of the lacI gene about 10-fold."
CDS 81..1163
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
misc_feature 1406..1434
/note="tac promoter"
/note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and
lac UV5 promoters"
protein_bind 1442..1458
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 1528..2703
/codon_start=1
/gene="malE"
/product="maltose binding protein from E. coli"
/note="MBP"
/note="This gene encodes a signal sequence that can direct
MBP to the bacterial periplasm."
/translation="MKIKTGARILALSALTTMMFSASALAKIEEGKLVIWINGDKGYNG
LAEVGKKFEKDTGIKVTVEHPDKLEEKFPQVAATGDGPDIIFWAHDRFGGYAQSGLLAE
ITPDKAFQDKLYPFTWDAVRYNGKLIAYPIAVEALSLIYNKDLLPNPPKTWEEIPALDK
ELKAKGKSALMFNLQEPYFTWPLIAADGGYAFKYENGKYDIKDVGVDNAGAKAGLTFLV
DLIKNKHMNADTDYSIAEAAFNKGETAMTINGPWAWSNIDTSKVNYGVTVLPTFKGQPS
KPFVGVLSAGINAASPNKELAKEFLENYLLTDEGLEAVNKDKPLGAVALKSYEEELAKD
PRIAATMENAQKGEIMPNIPQMSAFWYAVRTAVINAASGRQTVDEALKDAQT"
CDS 2803..2820
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
primer_bind complement(2831..2847)
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
terminator 3196..3282
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 3374..3401
/note="rrnB T2 terminator"
/note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
gene"
promoter 3421..3512
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 3513..4373
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERSPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin complement(4415..4928)
/direction=LEFT
/note="M13 ori"
/note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
rep_origin 5039..5627
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 5813..5955
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
CDS complement(6057..6248)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
ORIGIN
1 ccgacaccat cgaatggtgc aaaacctttc gcggtatggc atgatagcgc ccggaagaga
61 gtcaattcag ggtggtgaat gtgaaaccag taacgttata cgatgtcgca gagtatgccg
121 gtgtctctta tcagaccgtt tcccgcgtgg tgaaccaggc cagccacgtt tctgcgaaaa
181 cgcgggaaaa agtggaagcg gcgatggcgg agctgaatta cattcccaac cgcgtggcac
241 aacaactggc gggcaaacag tcgttgctga ttggcgttgc cacctccagt ctggccctgc
301 acgcgccgtc gcaaattgtc gcggcgatta aatctcgcgc cgatcaactg ggtgccagcg
361 tggtggtgtc gatggtagaa cgaagcggcg tcgaagcctg taaagcggcg gtgcacaatc
421 ttctcgcgca acgcgtcagt gggctgatca ttaactatcc gctggatgac caggatgcca
481 ttgctgtgga agctgcctgc actaatgttc cggcgttatt tcttgatgtc tctgaccaga
541 cacccatcaa cagtattatt ttctcccatg aagacggtac gcgactgggc gtggagcatc
601 tggtcgcatt gggtcaccag caaatcgcgc tgttagcggg cccattaagt tctgtctcgg
661 cgcgtctgcg tctggctggc tggcataaat atctcactcg caatcaaatt cagccgatag
721 cggaacggga aggcgactgg agtgccatgt ccggttttca acaaaccatg caaatgctga
781 atgagggcat cgttcccact gcgatgctgg ttgccaacga tcagatggcg ctgggcgcaa
841 tgcgcgccat taccgagtcc gggctgcgcg ttggtgcgga tatctcggta gtgggatacg
901 acgataccga agacagctca tgttatatcc cgccgttaac caccatcaaa caggattttc
961 gcctgctggg gcaaaccagc gtggaccgct tgctgcaact ctctcagggc caggcggtga
1021 agggcaatca gctgttgccc gtctcactgg tgaaaagaaa aaccaccctg gcgcccaata
1081 cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt
1141 cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg taagttagct cactcattag
1201 gcacaattct catgtttgac agcttatcat cgactgcacg gtgcaccaat gcttctggcg
1261 tcaggcagcc atcggaagct gtggtatggc tgtgcaggtc gtaaatcact gcataattcg
1321 tgtcgctcaa ggcgcactcc cgttctggat aatgtttttt gcgccgacat cataacggtt
1381 ctggcaaata ttctgaaatg agctgttgac aattaatcat cggctcgtat aatgtgtgga
1441 attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagccagt ccgtttaggt gttttcacga
1501 gcacttcacc aacaaggacc atagcatatg aaaataaaaa caggtgcacg catcctcgca
1561 ttatccgcat taacgacgat gatgttttcc gcctcggctc tcgccaaaat cgaagaaggt
1621 aaactggtaa tctggattaa cggcgataaa ggctataacg gtctcgctga agtcggtaag
1681 aaattcgaga aagataccgg aattaaagtc accgttgagc atccggataa actggaagag
1741 aaattcccac aggttgcggc aactggcgat ggccctgaca ttatcttctg ggcacacgac
1801 cgctttggtg gctacgctca atctggcctg ttggctgaaa tcaccccgga caaagcgttc
1861 caggacaagc tgtatccgtt tacctgggat gccgtacgtt acaacggcaa gctgattgct
1921 tacccgatcg ctgttgaagc gttatcgctg atttataaca aagatctgct gccgaacccg
1981 ccaaaaacct gggaagagat cccggcgctg gataaagaac tgaaagcgaa aggtaagagc
2041 gcgctgatgt tcaacctgca agaaccgtac ttcacctggc cgctgattgc tgctgacggg
2101 ggttatgcgt tcaagtatga aaacggcaag tacgacatta aagacgtggg cgtggataac
2161 gctggcgcga aagcgggtct gaccttcctg gttgacctga ttaaaaacaa acacatgaat
2221 gcagacaccg attactccat cgcagaagct gcctttaata aaggcgaaac agcgatgacc
2281 atcaacggcc cgtgggcatg gtccaacatc gacaccagca aagtgaatta tggtgtaacg
2341 gtactgccga ccttcaaggg tcaaccatcc aaaccgttcg ttggcgtgct gagcgcaggt
2401 attaacgccg ccagtccgaa caaagagctg gcaaaagagt tcctcgaaaa ctatctgctg
2461 actgatgaag gtctggaagc ggttaataaa gacaaaccgc tgggtgccgt agcgctgaag
2521 tcttacgagg aagagttggc gaaagatcca cgtattgccg ccaccatgga aaacgcccag
2581 aaaggtgaaa tcatgccgaa catcccgcag atgtccgctt tctggtatgc cgtgcgtact
2641 gcggtgatca acgccgccag cggtcgtcag actgtcgatg aagccctgaa agacgcgcag
2701 actaattcga gctctaacaa caacaacaac aacaacaata acaacctggg tatcgatact
2761 actgagaact atccgcgtgg atccgcagaa ttcagcgcta gccaccatca tcatcatcat
2821 taagcttggc actggccgtc gttttacaac gtcgtgactg ggaaaaccct ggcgttaccc
2881 aacttaatcg ccttgcagca catccccctt tcgccagctg gcgtaatagc gaagaggccc
2941 gcaccgatcg cccttcccaa cagttgcgca gcctgaatgg cgaatggcag cttggctgtt
3001 ttggcggatg agataagatt ttcagcctga tacagattaa atcagaacgc agaagcggtc
3061 tgataaaaca gaatttgcct ggcggcagta gcgcggtggt cccacctgac cccatgccga
3121 actcagaagt gaaacgccgt agcgccgatg gtagtgtggg gtctccccat gcgagagtag
3181 ggaactgcca ggcatcaaat aaaacgaaag gctcagtcga aagactgggc ctttcgtttt
3241 atctgttgtt tgtcggtgaa cgctctcctg agtaggacaa atccgccggg agcggatttg
3301 aacgttgcga agcaacggcc cggagggtgg cgggcaggac gcccgccata aactgccagg
3361 catcaaatta agcagaaggc catcctgacg gatggccttt ttgcgtttct acaaactctt
3421 tttgtttatt tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa taaccctgat
3481 aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga gtatgagtat tcaacatttc cgtgtcgccc
3541 ttattccctt ttttgcggca ttttgccttc ctgtttttgc tcacccagaa acgctggtga
3601 aagtaaaaga tgctgaagat cagttgggtg cacgagtggg ttacatcgaa ctggatctca
3661 acagcggtaa gatccttgag agttttcgcc ccgaagaacg ttctccaatg atgagcactt
3721 ttaaagttct gctatgtggc gcggtattat cccgtgttga cgccgggcaa gagcaactcg
3781 gtcgccgcat acactattct cagaatgact tggttgagta ctcaccagtc acagaaaagc
3841 atcttacgga tggcatgaca gtaagagaat tatgcagtgc tgccataacc atgagtgata
3901 acactgcggc caacttactt ctgacaacga tcggaggacc gaaggagcta accgcttttt
3961 tgcacaacat gggggatcat gtaactcgcc ttgatcgttg ggaaccggag ctgaatgaag
4021 ccataccaaa cgacgagcgt gacaccacga tgcctgtagc aatggcaaca acgttgcgca
4081 aactattaac tggcgaacta cttactctag cttcccggca acaattaata gactggatgg
4141 aggcggataa agttgcagga ccacttctgc gctcggccct tccggctggc tggtttattg
4201 ctgataaatc tggagccggt gagcgtgggt ctcgcggtat cattgcagca ctggggccag
4261 atggtaagcc ctcccgtatc gtagttatct acacgacggg gagtcaggca actatggatg
4321 aacgaaatag acagatcgct gagataggtg cctcactgat taagcattgg taactgtcag
4381 accaagttta ctcatatata ctttagattg atttaccccg gttgataatc agaaaagccc
4441 caaaaacagg aagattgtat aagcaaatat ttaaattgta aacgttaata ttttgttaaa
4501 attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa
4561 aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa
4621 caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca
4681 gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc caaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg
4741 taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc
4801 ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc
4861 aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca
4921 gggcgcgtaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt
4981 aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt
5041 gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag
5101 cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca
5161 gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca
5221 agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg
5281 ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg
5341 cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct
5401 acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga
5461 gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc
5521 ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg
5581 agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg
5641 cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt
5701 tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga gtgagctgat accgctcgcc
5761 gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga agcggaagag cgcctgatgc
5821 ggtattttct ccttacgcat ctgtgcggta tttcacaccg catatatggt gcactctcag
5881 tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtataca ctccgctatc gctacgtgac
5941 tgggtcatgg ctgcgccccg acacccgcca acacccgctg acgcgccctg acgggcttgt
6001 ctgctcccgg catccgctta cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg catgtgtcag
6061 aggttttcac cgtcatcacc gaaacgcgcg aggcagctgc ggtaaagctc atcagcgtgg
6121 tcgtgcagcg attcacagat gtctgcctgt tcatccgcgt ccagctcgtt gagtttctcc
6181 agaagcgtta atgtctggct tctgataaag cgggccatgt taagggcggt tttttcctgt
6241 ttggtcactg atgcctccgt gtaaggggga tttctgttca tgggggtaat gataccgatg
6301 aaacgagaga ggatgctcac gatacgggtt actgatgatg aacatgcccg gttactggaa
6361 cgttgtgagg gtaaacaact ggcggtatgg atgcggcggg accagagaaa aatcactcag
6421 ggtcaatgcc agcgcttcgt taatacagat gtaggtgttc cacagggtag ccagcagcat
6481 cctgcgatgc agatccggaa cataatggtg cagggcgctg acttccgcgt ttccagactt
6541 tacgaaacac ggaaaccgaa gaccattcat gttgttgctc aggtcgcaga cgttttgcag
6601 cagcagtcgc ttcacgttcg ctcgcgtatc ggtgattcat tctgctaacc agtaaggcaa
6661 ccccgccagc ctagccgggt cctcaacgac aggagcacga tcatgcgcac ccgtggccag
6721 gacccaacgc tgcccgaaat t
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4951/pMo130-TelR大肠自杀质粒 |
| P2143/pFLP3大肠自杀质粒 |
| P2498/PCMT-flp大肠敲除质粒 |
| P0329/R6K-Box大肠敲除质粒菌种 |
| P3833/R6K-Box质粒菌种 |
| P0330/pCP-Cre大肠敲除质粒菌种 |
| P3834/pCP-Cre质粒菌种 |
| P0095/pKD3大肠敲除质粒菌种 |
| P3835/pKD3质粒菌种 |
| P0096/pKD4大肠敲除质粒菌种 |
| P4538/pKD4质粒菌种 |
| P0097/pKD13大肠敲除质粒菌种 |
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文献和实验相关实验
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
pMBP-P 大肠杆菌质粒 Amp 分泌表达，His和MBP标签，带凝血酶位点 pMal-C2x 大肠杆菌质粒 Amp 表达MBP标签蛋白，原核表达载体 pMal-P2x 大肠杆菌质粒 Amp pMal-P
(一)大肠菌群的定义及范围根据国家1994年颁布的食品卫生检验方法微生物学部分，大肠菌群(coliform bacteria)系指一群在37 ℃、24 h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。大肠菌群主要是由肠杆菌科中四个菌属内的一些细菌所组成，即艾希氏菌届、拘橼酸杆菌属、克雷伯氏菌属及肠杆菌属，其生化特性分类见表5-4。 由上表可以看出，大肠菌群中大肠艾希氏菌I型和Ⅲ型的特点是，对靛基质、甲基红、v-P和拘橼酸盐利用四个生化反应分别为“十十一一”，通常称为
pMBP-P大肠表达质粒
￥580 - 1280
