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- 上海
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- 详细信息
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- 库存：
100
- 英文名：
pET37b
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
- 规格：
0.5ug
基本信息
名称：pET-37b大肠表达质粒
别称: pET37b
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5932 bp ds-DNA circular SYN 10-8-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5932)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-8-1 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5932
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
source 865..887
/organism="Enterobacteria phage T7"
/mol_type="genomic DNA"
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/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
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/product="8xHis affinity tag"
/note="8xHis"
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/codon_start=1
/product="Factor Xa recognition and cleavage site"
/note="Factor Xa site"
/translation="IEGR"
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/codon_start=1
/product="affinity and epitope tag derived from pancreatic
ribonuclease A"
/note="S-Tag"
/translation="KETAAAKFERQHMDS"
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/codon_start=1
/product="thrombin recognition and cleavage site"
/note="thrombin site"
/translation="LVPRGS"
RBS 865..887
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
protein_bind 902..926
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(927..945)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter 1258..1335
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/note="lacI promoter"
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/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
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/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
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DELYRSCLARFGDDGENL"
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/note="ori"
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replication"
CDS 4558..5373
/codon_start=1
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
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/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgtttagcag cctaggtatt aatcaattag tggtggtggt ggtggtggtg gtgctcgagt
181 gcggccgcaa gcttgtcgac ggagctcgaa ttcggatccg atatcgccat ggccagagga
241 gagttagagc gaccctcaat accggagcca ccaccggtac ccagatctgg gctgtccatg
301 tgctggcgtt cgaatttagc agcagcggtt tctttcatac caattgcagt actaccgcgt
361 ggcaccagac ccgcggaacc tggtgccgtg gggctggtcg tcggcacggt gcccgtgcag
421 gtggtgccgt tgagcgagaa cgacgccggc gtcgggttgg acccggccca cgagccgttg
481 aacccgaacg acgccgtgcc gccggtcggg atgctgccgt tccagggcag gctggtgacg
541 gagacctggc cgccgttggt cgaggcggtg ccgttccaca gctgctggat acgctggcct
601 gcggtgtagg tccagtcgag cttccacgac gagacggggt cgccgaggtt ggtgatcgtg
661 acgttggcgc cgaagccgcc gggccactgg ttggtgacgg cgtagtcgac gcggcagccg
721 ggactagcgg cctgggcggg cagcacgacc gtggcgccga cgacgagcgt cgccgccgcg
781 gcggcgagcg tcgtgcgcag agcggtgcgg gcgccgcggg ccgggtggcc gggtgcgggc
841 gtggtacgag ggtccatatg tatatctcct tcttaaagtt aaacaaaatt atttctagag
901 gggaattgtt atccgctcac aattccccta tagtgagtcg tattaatttc gcgggatcga
961 gatcgatctc gatcctctac gccggacgca tcgtggccgg catcaccggc gccacaggtg
1021 cggttgctgg cgcctatatc gccgacatca ccgatgggga agatcgggct cgccacttcg
1081 ggctcatgag cgcttgtttc ggcgtgggta tggtggcagg ccccgtggcc gggggactgt
1141 tgggcgccat ctccttgcat gcaccattcc ttgcggcggc ggtgctcaac ggcctcaacc
1201 tactactggg ctgcttccta atgcaggagt cgcataaggg agagcgtcga gatcccggac
1261 accatcgaat ggcgcaaaac ctttcgcggt atggcatgat agcgcccgga agagagtcaa
1321 ttcagggtgg tgaatgtgaa accagtaacg ttatacgatg tcgcagagta tgccggtgtc
1381 tcttatcaga ccgtttcccg cgtggtgaac caggccagcc acgtttctgc gaaaacgcgg
1441 gaaaaagtgg aagcggcgat ggcggagctg aattacattc ccaaccgcgt ggcacaacaa
1501 ctggcgggca aacagtcgtt gctgattggc gttgccacct ccagtctggc cctgcacgcg
1561 ccgtcgcaaa ttgtcgcggc gattaaatct cgcgccgatc aactgggtgc cagcgtggtg
1621 gtgtcgatgg tagaacgaag cggcgtcgaa gcctgtaaag cggcggtgca caatcttctc
1681 gcgcaacgcg tcagtgggct gatcattaac tatccgctgg atgaccagga tgccattgct
1741 gtggaagctg cctgcactaa tgttccggcg ttatttcttg atgtctctga ccagacaccc
1801 atcaacagta ttattttctc ccatgaagac ggtacgcgac tgggcgtgga gcatctggtc
1861 gcattgggtc accagcaaat cgcgctgtta gcgggcccat taagttctgt ctcggcgcgt
1921 ctgcgtctgg ctggctggca taaatatctc actcgcaatc aaattcagcc gatagcggaa
1981 cgggaaggcg actggagtgc catgtccggt tttcaacaaa ccatgcaaat gctgaatgag
2041 ggcatcgttc ccactgcgat gctggttgcc aacgatcaga tggcgctggg cgcaatgcgc
2101 gccattaccg agtccgggct gcgcgttggt gcggacatct cggtagtggg atacgacgat
2161 accgaagaca gctcatgtta tatcccgccg ttaaccacca tcaaacagga ttttcgcctg
2221 ctggggcaaa ccagcgtgga ccgcttgctg caactctctc agggccaggc ggtgaagggc
2281 aatcagctgt tgcccgtctc actggtgaaa agaaaaacca ccctggcgcc caatacgcaa
2341 accgcctctc cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga
2401 ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtaagt tagctcactc attaggcacc
2461 gggatctcga ccgatgccct tgagagcctt caacccagtc agctccttcc ggtgggcgcg
2521 gggcatgact atcgtcgccg cacttatgac tgtcttcttt atcatgcaac tcgtaggaca
2581 ggtgccggca gcgctctggg tcattttcgg cgaggaccgc tttcgctgga gcgcgacgat
2641 gatcggcctg tcgcttgcgg tattcggaat cttgcacgcc ctcgctcaag ccttcgtcac
2701 tggtcccgcc accaaacgtt tcggcgagaa gcaggccatt atcgccggca tggcggcccc
2761 acgggtgcgc atgatcgtgc tcctgtcgtt gaggacccgg ctaggctggc ggggttgcct
2821 tactggttag cagaatgaat caccgatacg cgagcgaacg tgaagcgact gctgctgcaa
2881 aacgtctgcg acctgagcaa caacatgaat ggtcttcggt ttccgtgttt cgtaaagtct
2941 ggaaacgcgg aagtcagcgc cctgcaccat tatgttccgg atctgcatcg caggatgctg
3001 ctggctaccc tgtggaacac ctacatctgt attaacgaag cgctggcatt gaccctgagt
3061 gatttttctc tggtcccgcc gcatccatac cgccagttgt ttaccctcac aacgttccag
3121 taaccgggca tgttcatcat cagtaacccg tatcgtgagc atcctctctc gtttcatcgg
3181 tatcattacc cccatgaaca gaaatccccc ttacacggag gcatcagtga ccaaacagga
3241 aaaaaccgcc cttaacatgg cccgctttat cagaagccag acattaacgc ttctggagaa
3301 actcaacgag ctggacgcgg atgaacaggc agacatctgt gaatcgcttc acgaccacgc
3361 tgatgagctt taccgcagct gcctcgcgcg tttcggtgat gacggtgaaa acctctgaca
3421 catgcagctc ccggagacgg tcacagcttg tctgtaagcg gatgccggga gcagacaagc
3481 ccgtcagggc gcgtcagcgg gtgttggcgg gtgtcggggc gcagccatga cccagtcacg
3541 tagcgatagc ggagtgtata ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga
3601 gtgcaccata tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca
3661 ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag
3721 cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag
3781 gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc
3841 tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc
3901 agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc
3961 tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt
4021 cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg
4081 ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat
4141 ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag
4201 ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt
4261 ggtggcctaa ctacggctac actagaagga cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc
4321 cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta
4381 gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag
4441 atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga
4501 ttttggtcat gaacaataaa actgtctgct tacataaaca gtaatacaag gggtgttatg
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4741 gccaatgatg ttacagatga gatggtcaga ctaaactggc tgacggaatt tatgcctctt
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4921 gatgcgctgg cagtgttcct gcgccggttg cattcgattc ctgtttgtaa ttgtcctttt
4981 aacagcgatc gcgtatttcg tctcgctcag gcgcaatcac gaatgaataa cggtttggtt
5041 gatgcgagtg attttgatga cgagcgtaat ggctggcctg ttgaacaagt ctggaaagaa
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5161 gataacctta tttttgacga ggggaaatta ataggttgta ttgatgttgg acgagtcgga
5221 atcgcagacc gataccagga tcttgccatc ctatggaact gcctcggtga gttttctcct
5281 tcattacaga aacggctttt tcaaaaatat ggtattgata atcctgatat gaataaattg
5341 cagtttcatt tgatgctcga tgagtttttc taagaattaa ttcatgagcg gatacatatt
5401 tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc
5461 acctgaaatt gtaaacgtta atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag
5521 ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa aagaatagac
5581 cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga
5641 ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc
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5761 gagcccccga tttagagctt gacggggaaa gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa
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5881 caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg tcccattcgc ca
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pET-37b大肠表达质粒
别称: pET37b
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；PET系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 5932bp |
| 质粒标签: | N-CBD，N-thrombin，N-S，N-Factor Xa，C-8*His |
| 原核抗性: | Kan |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | BL21(DE3) |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3'测序引物: | T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
| 备注: | 分泌表达，含纤维素结合域 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,分泌表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5932 bp ds-DNA circular SYN 10-8-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5932)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-8-1 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5932
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/mol_type="other DNA"
source 865..887
/organism="Enterobacteria phage T7"
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polymerase"
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
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NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
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indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgtttagcag cctaggtatt aatcaattag tggtggtggt ggtggtggtg gtgctcgagt
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781 gcggcgagcg tcgtgcgcag agcggtgcgg gcgccgcggg ccgggtggcc gggtgcgggc
841 gtggtacgag ggtccatatg tatatctcct tcttaaagtt aaacaaaatt atttctagag
901 gggaattgtt atccgctcac aattccccta tagtgagtcg tattaatttc gcgggatcga
961 gatcgatctc gatcctctac gccggacgca tcgtggccgg catcaccggc gccacaggtg
1021 cggttgctgg cgcctatatc gccgacatca ccgatgggga agatcgggct cgccacttcg
1081 ggctcatgag cgcttgtttc ggcgtgggta tggtggcagg ccccgtggcc gggggactgt
1141 tgggcgccat ctccttgcat gcaccattcc ttgcggcggc ggtgctcaac ggcctcaacc
1201 tactactggg ctgcttccta atgcaggagt cgcataaggg agagcgtcga gatcccggac
1261 accatcgaat ggcgcaaaac ctttcgcggt atggcatgat agcgcccgga agagagtcaa
1321 ttcagggtgg tgaatgtgaa accagtaacg ttatacgatg tcgcagagta tgccggtgtc
1381 tcttatcaga ccgtttcccg cgtggtgaac caggccagcc acgtttctgc gaaaacgcgg
1441 gaaaaagtgg aagcggcgat ggcggagctg aattacattc ccaaccgcgt ggcacaacaa
1501 ctggcgggca aacagtcgtt gctgattggc gttgccacct ccagtctggc cctgcacgcg
1561 ccgtcgcaaa ttgtcgcggc gattaaatct cgcgccgatc aactgggtgc cagcgtggtg
1621 gtgtcgatgg tagaacgaag cggcgtcgaa gcctgtaaag cggcggtgca caatcttctc
1681 gcgcaacgcg tcagtgggct gatcattaac tatccgctgg atgaccagga tgccattgct
1741 gtggaagctg cctgcactaa tgttccggcg ttatttcttg atgtctctga ccagacaccc
1801 atcaacagta ttattttctc ccatgaagac ggtacgcgac tgggcgtgga gcatctggtc
1861 gcattgggtc accagcaaat cgcgctgtta gcgggcccat taagttctgt ctcggcgcgt
1921 ctgcgtctgg ctggctggca taaatatctc actcgcaatc aaattcagcc gatagcggaa
1981 cgggaaggcg actggagtgc catgtccggt tttcaacaaa ccatgcaaat gctgaatgag
2041 ggcatcgttc ccactgcgat gctggttgcc aacgatcaga tggcgctggg cgcaatgcgc
2101 gccattaccg agtccgggct gcgcgttggt gcggacatct cggtagtggg atacgacgat
2161 accgaagaca gctcatgtta tatcccgccg ttaaccacca tcaaacagga ttttcgcctg
2221 ctggggcaaa ccagcgtgga ccgcttgctg caactctctc agggccaggc ggtgaagggc
2281 aatcagctgt tgcccgtctc actggtgaaa agaaaaacca ccctggcgcc caatacgcaa
2341 accgcctctc cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga
2401 ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtaagt tagctcactc attaggcacc
2461 gggatctcga ccgatgccct tgagagcctt caacccagtc agctccttcc ggtgggcgcg
2521 gggcatgact atcgtcgccg cacttatgac tgtcttcttt atcatgcaac tcgtaggaca
2581 ggtgccggca gcgctctggg tcattttcgg cgaggaccgc tttcgctgga gcgcgacgat
2641 gatcggcctg tcgcttgcgg tattcggaat cttgcacgcc ctcgctcaag ccttcgtcac
2701 tggtcccgcc accaaacgtt tcggcgagaa gcaggccatt atcgccggca tggcggcccc
2761 acgggtgcgc atgatcgtgc tcctgtcgtt gaggacccgg ctaggctggc ggggttgcct
2821 tactggttag cagaatgaat caccgatacg cgagcgaacg tgaagcgact gctgctgcaa
2881 aacgtctgcg acctgagcaa caacatgaat ggtcttcggt ttccgtgttt cgtaaagtct
2941 ggaaacgcgg aagtcagcgc cctgcaccat tatgttccgg atctgcatcg caggatgctg
3001 ctggctaccc tgtggaacac ctacatctgt attaacgaag cgctggcatt gaccctgagt
3061 gatttttctc tggtcccgcc gcatccatac cgccagttgt ttaccctcac aacgttccag
3121 taaccgggca tgttcatcat cagtaacccg tatcgtgagc atcctctctc gtttcatcgg
3181 tatcattacc cccatgaaca gaaatccccc ttacacggag gcatcagtga ccaaacagga
3241 aaaaaccgcc cttaacatgg cccgctttat cagaagccag acattaacgc ttctggagaa
3301 actcaacgag ctggacgcgg atgaacaggc agacatctgt gaatcgcttc acgaccacgc
3361 tgatgagctt taccgcagct gcctcgcgcg tttcggtgat gacggtgaaa acctctgaca
3421 catgcagctc ccggagacgg tcacagcttg tctgtaagcg gatgccggga gcagacaagc
3481 ccgtcagggc gcgtcagcgg gtgttggcgg gtgtcggggc gcagccatga cccagtcacg
3541 tagcgatagc ggagtgtata ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga
3601 gtgcaccata tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca
3661 ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag
3721 cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag
3781 gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc
3841 tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc
3901 agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc
3961 tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt
4021 cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg
4081 ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat
4141 ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag
4201 ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt
4261 ggtggcctaa ctacggctac actagaagga cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc
4321 cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta
4381 gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag
4441 atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga
4501 ttttggtcat gaacaataaa actgtctgct tacataaaca gtaatacaag gggtgttatg
4561 agccatattc aacgggaaac gtcttgctct aggccgcgat taaattccaa catggatgct
4621 gatttatatg ggtataaatg ggctcgcgat aatgtcgggc aatcaggtgc gacaatctat
4681 cgattgtatg ggaagcccga tgcgccagag ttgtttctga aacatggcaa aggtagcgtt
4741 gccaatgatg ttacagatga gatggtcaga ctaaactggc tgacggaatt tatgcctctt
4801 ccgaccatca agcattttat ccgtactcct gatgatgcat ggttactcac cactgcgatc
4861 cccgggaaaa cagcattcca ggtattagaa gaatatcctg attcaggtga aaatattgtt
4921 gatgcgctgg cagtgttcct gcgccggttg cattcgattc ctgtttgtaa ttgtcctttt
4981 aacagcgatc gcgtatttcg tctcgctcag gcgcaatcac gaatgaataa cggtttggtt
5041 gatgcgagtg attttgatga cgagcgtaat ggctggcctg ttgaacaagt ctggaaagaa
5101 atgcataaac ttttgccatt ctcaccggat tcagtcgtca ctcatggtga tttctcactt
5161 gataacctta tttttgacga ggggaaatta ataggttgta ttgatgttgg acgagtcgga
5221 atcgcagacc gataccagga tcttgccatc ctatggaact gcctcggtga gttttctcct
5281 tcattacaga aacggctttt tcaaaaatat ggtattgata atcctgatat gaataaattg
5341 cagtttcatt tgatgctcga tgagtttttc taagaattaa ttcatgagcg gatacatatt
5401 tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc
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5521 ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa aagaatagac
5581 cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga
5641 ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc
5701 accctaatca agttttttgg ggtcgaggtg ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg
5761 gagcccccga tttagagctt gacggggaaa gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa
5821 gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct ggcaagtgta gcggtcacgc tgcgcgtaac
5881 caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg tcccattcgc ca
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4522/pMS2-GFP噬菌体基因质粒 |
| P0314/pTrc-Taq聚合酶基因质粒 |
| P1152/pAKTaq聚合酶基因质粒 |
| P1411/pET-KOD聚合酶基因质粒 |
| P0315/pET22b-KOD聚合酶基因质粒 |
| P0776/pKOD-3聚合酶基因质粒 |
| P1407/pET16B.Pfu聚合酶基因质粒 |
| P1758/pECMV-3×FLAG-T7 RNA polymerase聚合酶基因质粒 |
| P1775/T7opt in pCAGGS(T7 RNA polymerase)聚合酶基因质粒 |
| P3218/pCAG-T7pol聚合酶基因质粒 |
| P2140/DCT.VV.Orf170聚合酶基因质粒 |
| P2637/pK19mobSacB-T7 polymerase聚合酶基因质粒 |
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文献和实验相关实验
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
加热灭活酶。通过凝胶提取试剂盒纯化消化的pET-32α（+）载体骨架和从pMD18-T载体切下的基因片段。用T4 DNA连接酶在23℃下用pET-32α（+）载体骨架连接基因片段1小时，载体末端和插入末端的比例为1：3（fmol）。将10μl连接反应与100μl感受态大肠杆菌 BL21（DE3）在冰上混合10分钟，并将混合物在42℃下孵育90秒。加入800μlLB并在37°C下孵育40分钟。涂在含有100μg/ ml氨苄青霉素的LB平板上。在37°C孵育过夜。通过菌落PCR筛选插入物的存在或制备
PET系列载体 pET32b 大肠杆菌质粒 Amp PET系列载体 pET35b 大肠杆菌质粒 Amp PET系列载体 pET37b 大肠杆菌质粒 Kan PET系列载体
pET-37b大肠表达质粒
￥580 - 1280
