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pET-20b大肠表达质粒

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  • 上海
  • P0489
  • 2025年07月12日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20

    • 保质期

      2年

    • 英文名

      pET20b+

    • 库存

      100

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 规格

      干粉/液体

    基本信息
    名称:pET-20b大肠表达质粒
    别称: pET20b+
    启动子: T7
    复制子: pBR322
    终止子: T7 terminator
    质粒分类: 大肠杆菌载体;PET系列表达质粒
    质粒大小: 3716bp
    质粒标签: N-pelB, C-His
    原核抗性: Amp
    克隆菌株: DH5a
    培养条件: 37度
    表达宿主: 大肠杆菌BL21(DE3)
    培养条件: 37℃,有氧,LB
    5'测序引物: T7:TAATACGACTCACTATAGGG
    3'测序引物: T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG
    备注: 分泌表达


    质粒属性
    载体宿主: 大肠杆菌
    载体用途: 蛋白表达
    基因种属: 空载体
    基因类型: ORF
    原核抗性: Amp
    真核抗性:  
    荧光蛋白:

    质粒简介
     pET-20b质粒是一个大肠杆菌蛋白表达载体,T7启动子驱动目的基因和6×HIS标签融合表达,并在pelB信号肽的作用下分泌至细胞周质。The pET-20b vector carries an N-terminal pelB signal sequence for potential periplasmic localization, plus optional C-terminal His•Tag® sequence. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single-stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer.

    质粒图谱
    产品细节图片1 产品细节图片2

    质粒序列
    LOCUS       Exported                3716 bp ds-DNA     circular SYN 30-7-2015
    DEFINITION  synthetic circular DNA
    SOURCE      synthetic DNA construct
      ORGANISM  synthetic DNA construct
    REFERENCE   1  (bases 1 to 3716)
                http://www.miaolingbio.com
    FEATURES             Location/Qualifiers
         source          1..3716
                         /organism="synthetic DNA construct"
                         /mol_type="other DNA"
         source          297..319
                         /organism="Enterobacteria phage T7"
                         /mol_type="genomic DNA"
                         /db_xref="taxon:10760"
         terminator      26..73
                         /note="T7 terminator"
                         /note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
                         polymerase"
         CDS             complement(140..157)
                         /codon_start=1
                         /product="6xHis affinity tag"
                         /note="6xHis"
                         /translation="HHHHHH"
         CDS             complement(224..289)
                         /codon_start=1
                         /gene="pelB (fragment)"
                         /product="leader peptide for secretion"
                         /note="pelB signal sequence"
                         /translation="MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMA"
         RBS             297..319
                         /note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
                         T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
         promoter        complement(351..369)
                         /note="T7 promoter"
                         /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
         CDS             878..1069
                         /codon_start=1
                         /gene="rop"
                         /product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
                         number"
                         /note="rop"
                         /translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
                         DELYRSCLARFGDDGENL"
         misc_feature    1171..1313
                         /note="bom"
                         /note="basis of mobility region from pBR322"
         rep_origin      complement(1499..2087)
                         /direction=LEFT
                         /note="ori"
                         /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                         replication"
         CDS             complement(2258..3118)
                         /codon_start=1
                         /gene="bla"
                         /product="beta-lactamase"
                         /note="AmpR"
                         /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                         related antibiotics"
                         /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                         ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                         PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                         EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                         LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                         LIKHW"
         promoter        complement(3119..3223)
                         /gene="bla"
                         /note="AmpR promoter"
         rep_origin      complement(3250..3705)
                         /direction=LEFT
                         /note="f1 ori"
                         /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                         indicates direction of (+) strand synthesis"
    ORIGIN
            1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
           61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
          121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
          181 cgacggagct cgaattcgga tccgaattaa ttccgatatc catggccatc gccggctggg
          241 cagcgaggag cagcagacca gcagcagcgg tcggcagcag gtatttcata tgtatatctc
          301 cttcttaaag ttaaacaaaa ttatttctag agggaaaccg ttgtggtctc cctatagtga
          361 gtcgtattaa tttcgcggga tcgagatctc gggcagcgtt gggtcctggc cacgggtgcg
          421 catgatcgtg ctcctgtcgt tgaggacccg gctaggctgg cggggttgcc ttactggtta
          481 gcagaatgaa tcaccgatac gcgagcgaac gtgaagcgac tgctgctgca aaacgtctgc
          541 gacctgagca acaacatgaa tggtcttcgg tttccgtgtt tcgtaaagtc tggaaacgcg
          601 gaagtcagcg ccctgcacca ttatgttccg gatctgcatc gcaggatgct gctggctacc
          661 ctgtggaaca cctacatctg tattaacgaa gcgctggcat tgaccctgag tgatttttct
          721 ctggtcccgc cgcatccata ccgccagttg tttaccctca caacgttcca gtaaccgggc
          781 atgttcatca tcagtaaccc gtatcgtgag catcctctct cgtttcatcg gtatcattac
          841 ccccatgaac agaaatcccc cttacacgga ggcatcagtg accaaacagg aaaaaaccgc
          901 ccttaacatg gcccgcttta tcagaagcca gacattaacg cttctggaga aactcaacga
          961 gctggacgcg gatgaacagg cagacatctg tgaatcgctt cacgaccacg ctgatgagct
         1021 ttaccgcagc tgcctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct
         1081 cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg
         1141 cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg cgcagccatg acccagtcac gtagcgatag
         1201 cggagtgtat actggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat
         1261 atatgcggtg tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa ataccgcatc aggcgctctt
         1321 ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag
         1381 ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca
         1441 tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt
         1501 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc
         1561 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct
         1621 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg
         1681 tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca
         1741 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact
         1801 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta
         1861 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta
         1921 actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct
         1981 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt
         2041 tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga
         2101 tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca
         2161 tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat
         2221 caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg
         2281 cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt
         2341 agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag
         2401 acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc
         2461 gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag
         2521 ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctgcaggca
         2581 tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa
         2641 ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga
         2701 tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata
         2761 attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca
         2821 agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg
         2881 ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg
         2941 ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg
         3001 cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag
         3061 gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac
         3121 tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca
         3181 tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag
         3241 tgccacctga aattgtaaac gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa
         3301 tcagctcatt ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat
         3361 agaccgagat agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg
         3421 tggactccaa cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac
         3481 catcacccta atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta
         3541 aagggagccc ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag
         3601 ggaagaaagc gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg
         3661 taaccaccac acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcccat tcgcca
    //

    质粒菌株产品操作说明书
    一、扩增流程
             收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
             1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
                  1100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
                  加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37培养45min
                  6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
                  将平板正向培养1h,再倒置37培养14h。如果要求是30度则培养20h
    (菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
                  挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
            2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
                  四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
            3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
            4、菌落平板(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  直接挑取单菌落至液体培养基中。
            5、液体质粒(冰袋运输,存于-20,保质期90天)
                  单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
            6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。

    二、转化图片
    产品细节图片3
    产品细节图片4
    P2604/pENTR223-LEPROTL1人源基因质粒
    P2605/pENTR223-CRB3人源基因质粒
    P2606/pENTR223-TPPP3人源基因质粒
    P2607/pENTR223-FAM241B人源基因质粒
    P2608/pENTR223-IFT27人源基因质粒
    P2609/pENTR223-LINC00260人源基因质粒
    P2610/pENTR223-VAMP2人源基因质粒
    P2611/pENTR223-CPLX1-G12T-G15人源基因质粒
    P2612/pENTR223-CHCHD7人源基因质粒
    P2613/pENTR223-CCL22-A5C人源基因质粒
    P2614/pENTR223-RPP14人源基因质粒
     

     

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    图标文献和实验
    相关实验
    • 【共享】PET重组质粒转化表达质粒中遇到的问题

      晚上每天都有人做报告,我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的,但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的,我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的,一生研究T7噬菌体,也是T7 RNA polymerase induction system(pET系列质粒)的发明者。 T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了,但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统

    • 【求助】BAC文库应用

      -1,pBADHis, pBADHislacZ,pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒:pCDFduet-1 以及pCDNA3.1,pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta(DE3),Rasettagame(DE3),Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒: pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi

    • 【资源】质粒互换

      pET17b 大肠杆菌质粒 Amp pET19b 大肠杆菌质粒 Amp pET20b 大肠杆菌质粒 Amp pET21b 大肠杆菌质粒 Amp

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