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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
pET20b+
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pET-20b大肠表达质粒
别称: pET20b+
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体;PET系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 3716bp |
| 质粒标签: | N-pelB, C-His |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 大肠杆菌BL21(DE3) |
| 培养条件: | 37℃,有氧,LB |
| 5'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3'测序引物: | T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
| 备注: | 分泌表达 |
质粒属性
| 载体宿主: | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途: | 蛋白表达 |
| 基因种属: | 空载体 |
| 基因类型: | ORF |
| 原核抗性: | Amp |
| 真核抗性: | |
| 荧光蛋白: |
质粒简介
pET-20b质粒是一个大肠杆菌蛋白表达载体,T7启动子驱动目的基因和6×HIS标签融合表达,并在pelB信号肽的作用下分泌至细胞周质。The pET-20b vector carries an N-terminal pelB signal sequence for potential periplasmic localization, plus optional C-terminal His•Tag® sequence. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single-stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3716 bp ds-DNA circular SYN 30-7-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3716)
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3716
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
source 297..319
/organism="Enterobacteria phage T7"
/mol_type="genomic DNA"
/db_xref="taxon:10760"
terminator 26..73
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(140..157)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS complement(224..289)
/codon_start=1
/gene="pelB (fragment)"
/product="leader peptide for secretion"
/note="pelB signal sequence"
/translation="MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMA"
RBS 297..319
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
promoter complement(351..369)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 878..1069
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
misc_feature 1171..1313
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(1499..2087)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2258..3118)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(3119..3223)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin complement(3250..3705)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
181 cgacggagct cgaattcgga tccgaattaa ttccgatatc catggccatc gccggctggg
241 cagcgaggag cagcagacca gcagcagcgg tcggcagcag gtatttcata tgtatatctc
301 cttcttaaag ttaaacaaaa ttatttctag agggaaaccg ttgtggtctc cctatagtga
361 gtcgtattaa tttcgcggga tcgagatctc gggcagcgtt gggtcctggc cacgggtgcg
421 catgatcgtg ctcctgtcgt tgaggacccg gctaggctgg cggggttgcc ttactggtta
481 gcagaatgaa tcaccgatac gcgagcgaac gtgaagcgac tgctgctgca aaacgtctgc
541 gacctgagca acaacatgaa tggtcttcgg tttccgtgtt tcgtaaagtc tggaaacgcg
601 gaagtcagcg ccctgcacca ttatgttccg gatctgcatc gcaggatgct gctggctacc
661 ctgtggaaca cctacatctg tattaacgaa gcgctggcat tgaccctgag tgatttttct
721 ctggtcccgc cgcatccata ccgccagttg tttaccctca caacgttcca gtaaccgggc
781 atgttcatca tcagtaaccc gtatcgtgag catcctctct cgtttcatcg gtatcattac
841 ccccatgaac agaaatcccc cttacacgga ggcatcagtg accaaacagg aaaaaaccgc
901 ccttaacatg gcccgcttta tcagaagcca gacattaacg cttctggaga aactcaacga
961 gctggacgcg gatgaacagg cagacatctg tgaatcgctt cacgaccacg ctgatgagct
1021 ttaccgcagc tgcctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct
1081 cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg
1141 cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg cgcagccatg acccagtcac gtagcgatag
1201 cggagtgtat actggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat
1261 atatgcggtg tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa ataccgcatc aggcgctctt
1321 ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag
1381 ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca
1441 tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt
1501 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc
1561 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct
1621 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg
1681 tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca
1741 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact
1801 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta
1861 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta
1921 actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct
1981 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt
2041 tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga
2101 tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca
2161 tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat
2221 caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg
2281 cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt
2341 agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag
2401 acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc
2461 gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag
2521 ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctgcaggca
2581 tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa
2641 ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga
2701 tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata
2761 attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca
2821 agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg
2881 ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg
2941 ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg
3001 cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag
3061 gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac
3121 tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca
3181 tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag
3241 tgccacctga aattgtaaac gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa
3301 tcagctcatt ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat
3361 agaccgagat agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg
3421 tggactccaa cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac
3481 catcacccta atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta
3541 aagggagccc ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag
3601 ggaagaaagc gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg
3661 taaccaccac acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcccat tcgcca
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
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风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验晚上每天都有人做报告,我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的,但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的,我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的,一生研究T7噬菌体,也是T7 RNA polymerase induction system(pET系列质粒)的发明者。 T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了,但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统
-1,pBADHis, pBADHislacZ,pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒:pCDFduet-1 以及pCDNA3.1,pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta(DE3),Rasettagame(DE3),Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒: pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
pET17b 大肠杆菌质粒 Amp pET19b 大肠杆菌质粒 Amp pET20b 大肠杆菌质粒 Amp pET21b 大肠杆菌质粒 Amp










