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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pET11a
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pET-11a大肠表达质粒
别称: pET11a
质粒属性
质粒简介
pET11a-d系列的载体含有一个N端的T7标签和BamHI限制性内切酶位点。该系列载体是很多pET家族其他载体的来源质粒。pET21a-d系列载体对应于pET11a-d载体，但是包含有额外的其他载体特征。pET11a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列的作用下终止蛋白翻译。
pET-11a质粒是一种原核表达载体，含有一个N端的T7标签和BamHI限制性内切酶位点。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导，目的基因被克隆到质粒载体上，受噬菌体强转录及翻译信号控制。pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下，可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5677 bp ds-DNA circular SYN 15-JUN-2017
DEFINITION synthetic circular DNA.
KEYWORDS pET-11a
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5677)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, July 11, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5677
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 1..19
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 20..44
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 89..121
/codon_start=1
/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/note="T7 tag (gene 10 leader)"
/note="promotes efficient translation in E. coli"
/translation="MASMTGGQQMG"
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/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
promoter 411..439
/note="tet promoter"
/note="promoter for tetracycline efflux protein gene"
promoter 552..656
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 657..1517
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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replication"
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DELYRSCLARFGDDGENL"
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/product="lac repressor"
/note="lacI"
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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ORIGIN
1 taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa ttcccctcta gaaataattt
61 tgtttaactt taagaaggag atatacatat ggctagcatg actggtggac agcaaatggg
121 tcgcggatcc ggctgctaac aaagcccgaa aggaagctga gttggctgct gccaccgctg
181 agcaataact agcataaccc cttggggcct ctaaacgggt cttgaggggt tttttgctga
241 aaggaggaac tatatccgga tatcccgcaa gaggcccggc agtaccggca taaccaagcc
301 tatgcctaca gcatccaggg tgacggtgcc gaggatgacg atgagcgcat tgttagattt
361 catacacggt gcctgactgc gttagcaatt taactgtgat aaactaccgc attaaagctt
421 atcgatgata agctgtcaaa catgagaatt cttgaagacg aaagggcctc gtgatacgcc
481 tatttttata ggttaatgtc atgataataa tggtttctta gacgtcaggt ggcacttttc
541 ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc
601 cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga
661 gtattcaaca tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt
721 ttgctcaccc agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag
781 tgggttacat cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag
841 aacgttttcc aatgatgagc acttttaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgtg
901 ttgacgccgg gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg
961 agtactcacc agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca
1021 gtgctgccat aaccatgagt gataacactg cggccaactt acttctgaca acgatcggag
1081 gaccgaagga gctaaccgct tttttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc
1141 gttgggaacc ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg
1201 cagcaatggc aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc
1261 ggcaacaatt aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg
1321 cccttccggc tggctggttt attgctgata aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg
1381 gtatcattgc agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga
1441 cggggagtca ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac
1501 tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag tttactcata tatactttag attgatttaa
1561 aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct ttttgataat ctcatgacca
1621 aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag
1681 gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac
1741 cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa
1801 ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg tagttaggcc
1861 accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag
1921 tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac
1981 cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc
2041 gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc
2101 ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca
2161 cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc
2221 tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg
2281 ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct
2341 ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata
2401 ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc
2461 gcctgatgcg gtattttctc cttacgcatc tgtgcggtat ttcacaccgc atatatggtg
2521 cactctcagt acaatctgct ctgatgccgc atagttaagc cagtatacac tccgctatcg
2581 ctacgtgact gggtcatggc tgcgccccga cacccgccaa cacccgctga cgcgccctga
2641 cgggcttgtc tgctcccggc atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc cgggagctgc
2701 atgtgtcaga ggttttcacc gtcatcaccg aaacgcgcga ggcagctgcg gtaaagctca
2761 tcagcgtggt cgtgaagcga ttcacagatg tctgcctgtt catccgcgtc cagctcgttg
2821 agtttctcca gaagcgttaa tgtctggctt ctgataaagc gggccatgtt aagggcggtt
2881 ttttcctgtt tggtcactga tgcctccgtg taagggggat ttctgttcat gggggtaatg
2941 ataccgatga aacgagagag gatgctcacg atacgggtta ctgatgatga acatgcccgg
3001 ttactggaac gttgtgaggg taaacaactg gcggtatgga tgcggcggga ccagagaaaa
3061 atcactcagg gtcaatgcca gcgcttcgtt aatacagatg taggtgttcc acagggtagc
3121 cagcagcatc ctgcgatgca gatccggaac ataatggtgc agggcgctga cttccgcgtt
3181 tccagacttt acgaaacacg gaaaccgaag accattcatg ttgttgctca ggtcgcagac
3241 gttttgcagc agcagtcgct tcacgttcgc tcgcgtatcg gtgattcatt ctgctaacca
3301 gtaaggcaac cccgccagcc tagccgggtc ctcaacgaca ggagcacgat catgcgcacc
3361 cgtggccagg acccaacgct gcccgagatg cgccgcgtgc ggctgctgga gatggcggac
3421 gcgatggata tgttctgcca agggttggtt tgcgcattca cagttctccg caagaattga
3481 ttggctccaa ttcttggagt ggtgaatccg ttagcgaggt gccgccggct tccattcagg
3541 tcgaggtggc ccggctccat gcaccgcgac gcaacgcggg gaggcagaca aggtataggg
3601 cggcgcctac aatccatgcc aacccgttcc atgtgctcgc cgaggcggca taaatcgccg
3661 tgacgatcag cggtccagtg atcgaagtta ggctggtaag agccgcgagc gatccttgaa
3721 gctgtccctg atggtcgtca tctacctgcc tggacagcat ggcctgcaac gcgggcatcc
3781 cgatgccgcc ggaagcgaga agaatcataa tggggaaggc catccagcct cgcgtcgcga
3841 acgccagcaa gacgtagccc agcgcgtcgg ccgccatgcc ggcgataatg gcctgcttct
3901 cgccgaaacg tttggtggcg ggaccagtga cgaaggcttg agcgagggcg tgcaagattc
3961 cgaataccgc aagcgacagg ccgatcatcg tcgcgctcca gcgaaagcgg tcctcgccga
4021 aaatgaccca gagcgctgcc ggcacctgtc ctacgagttg catgataaag aagacagtca
4081 taagtgcggc gacgatagtc atgccccgcg cccaccggaa ggagctgact gggttgaagg
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4261 tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ccagggtggt ttttcttttc
4321 accagtgaga cgggcaacag ctgattgccc ttcaccgcct ggccctgaga gagttgcagc
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4441 gggatataac atgagctgtc ttcggtatcg tcgtatccca ctaccgagat atccgcacca
4501 acgcgcagcc cggactcggt aatggcgcgc attgcgccca gcgccatctg atcgttggca
4561 accagcatcg cagtgggaac gatgccctca ttcagcattt gcatggtttg ttgaaaaccg
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//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pET-11a大肠表达质粒
别称: pET11a
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠系列质粒；大肠表达质粒；pET系列质粒 |
| 质粒大小: | 5677bp |
| 质粒标签: | N-T7 |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | BL21(DE3) 等大肠杆菌 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | T7（TAATACGACTCACTATAGGG） |
| 3'测序引物: | T7-ter（TGCTAGTTATTGCTCAGCGG） |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pET11a-d系列的载体含有一个N端的T7标签和BamHI限制性内切酶位点。该系列载体是很多pET家族其他载体的来源质粒。pET21a-d系列载体对应于pET11a-d载体，但是包含有额外的其他载体特征。pET11a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列的作用下终止蛋白翻译。
pET-11a质粒是一种原核表达载体，含有一个N端的T7标签和BamHI限制性内切酶位点。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导，目的基因被克隆到质粒载体上，受噬菌体强转录及翻译信号控制。pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下，可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5677 bp ds-DNA circular SYN 15-JUN-2017
DEFINITION synthetic circular DNA.
KEYWORDS pET-11a
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5677)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, July 11, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5677
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/product="Rop protein"
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
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isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
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ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
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ORIGIN
1 taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa ttcccctcta gaaataattt
61 tgtttaactt taagaaggag atatacatat ggctagcatg actggtggac agcaaatggg
121 tcgcggatcc ggctgctaac aaagcccgaa aggaagctga gttggctgct gccaccgctg
181 agcaataact agcataaccc cttggggcct ctaaacgggt cttgaggggt tttttgctga
241 aaggaggaac tatatccgga tatcccgcaa gaggcccggc agtaccggca taaccaagcc
301 tatgcctaca gcatccaggg tgacggtgcc gaggatgacg atgagcgcat tgttagattt
361 catacacggt gcctgactgc gttagcaatt taactgtgat aaactaccgc attaaagctt
421 atcgatgata agctgtcaaa catgagaatt cttgaagacg aaagggcctc gtgatacgcc
481 tatttttata ggttaatgtc atgataataa tggtttctta gacgtcaggt ggcacttttc
541 ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc
601 cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga
661 gtattcaaca tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt
721 ttgctcaccc agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag
781 tgggttacat cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag
841 aacgttttcc aatgatgagc acttttaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgtg
901 ttgacgccgg gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg
961 agtactcacc agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca
1021 gtgctgccat aaccatgagt gataacactg cggccaactt acttctgaca acgatcggag
1081 gaccgaagga gctaaccgct tttttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc
1141 gttgggaacc ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg
1201 cagcaatggc aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc
1261 ggcaacaatt aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg
1321 cccttccggc tggctggttt attgctgata aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg
1381 gtatcattgc agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga
1441 cggggagtca ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac
1501 tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag tttactcata tatactttag attgatttaa
1561 aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct ttttgataat ctcatgacca
1621 aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag
1681 gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac
1741 cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa
1801 ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg tagttaggcc
1861 accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag
1921 tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac
1981 cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc
2041 gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc
2101 ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca
2161 cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc
2221 tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg
2281 ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct
2341 ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata
2401 ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc
2461 gcctgatgcg gtattttctc cttacgcatc tgtgcggtat ttcacaccgc atatatggtg
2521 cactctcagt acaatctgct ctgatgccgc atagttaagc cagtatacac tccgctatcg
2581 ctacgtgact gggtcatggc tgcgccccga cacccgccaa cacccgctga cgcgccctga
2641 cgggcttgtc tgctcccggc atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc cgggagctgc
2701 atgtgtcaga ggttttcacc gtcatcaccg aaacgcgcga ggcagctgcg gtaaagctca
2761 tcagcgtggt cgtgaagcga ttcacagatg tctgcctgtt catccgcgtc cagctcgttg
2821 agtttctcca gaagcgttaa tgtctggctt ctgataaagc gggccatgtt aagggcggtt
2881 ttttcctgtt tggtcactga tgcctccgtg taagggggat ttctgttcat gggggtaatg
2941 ataccgatga aacgagagag gatgctcacg atacgggtta ctgatgatga acatgcccgg
3001 ttactggaac gttgtgaggg taaacaactg gcggtatgga tgcggcggga ccagagaaaa
3061 atcactcagg gtcaatgcca gcgcttcgtt aatacagatg taggtgttcc acagggtagc
3121 cagcagcatc ctgcgatgca gatccggaac ataatggtgc agggcgctga cttccgcgtt
3181 tccagacttt acgaaacacg gaaaccgaag accattcatg ttgttgctca ggtcgcagac
3241 gttttgcagc agcagtcgct tcacgttcgc tcgcgtatcg gtgattcatt ctgctaacca
3301 gtaaggcaac cccgccagcc tagccgggtc ctcaacgaca ggagcacgat catgcgcacc
3361 cgtggccagg acccaacgct gcccgagatg cgccgcgtgc ggctgctgga gatggcggac
3421 gcgatggata tgttctgcca agggttggtt tgcgcattca cagttctccg caagaattga
3481 ttggctccaa ttcttggagt ggtgaatccg ttagcgaggt gccgccggct tccattcagg
3541 tcgaggtggc ccggctccat gcaccgcgac gcaacgcggg gaggcagaca aggtataggg
3601 cggcgcctac aatccatgcc aacccgttcc atgtgctcgc cgaggcggca taaatcgccg
3661 tgacgatcag cggtccagtg atcgaagtta ggctggtaag agccgcgagc gatccttgaa
3721 gctgtccctg atggtcgtca tctacctgcc tggacagcat ggcctgcaac gcgggcatcc
3781 cgatgccgcc ggaagcgaga agaatcataa tggggaaggc catccagcct cgcgtcgcga
3841 acgccagcaa gacgtagccc agcgcgtcgg ccgccatgcc ggcgataatg gcctgcttct
3901 cgccgaaacg tttggtggcg ggaccagtga cgaaggcttg agcgagggcg tgcaagattc
3961 cgaataccgc aagcgacagg ccgatcatcg tcgcgctcca gcgaaagcgg tcctcgccga
4021 aaatgaccca gagcgctgcc ggcacctgtc ctacgagttg catgataaag aagacagtca
4081 taagtgcggc gacgatagtc atgccccgcg cccaccggaa ggagctgact gggttgaagg
4141 ctctcaaggg catcggtcga gatcccggtg cctaatgagt gagctaactt acattaattg
4201 cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa
4261 tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ccagggtggt ttttcttttc
4321 accagtgaga cgggcaacag ctgattgccc ttcaccgcct ggccctgaga gagttgcagc
4381 aagcggtcca cgctggtttg ccccagcagg cgaaaatcct gtttgatggt ggttaacggc
4441 gggatataac atgagctgtc ttcggtatcg tcgtatccca ctaccgagat atccgcacca
4501 acgcgcagcc cggactcggt aatggcgcgc attgcgccca gcgccatctg atcgttggca
4561 accagcatcg cagtgggaac gatgccctca ttcagcattt gcatggtttg ttgaaaaccg
4621 gacatggcac tccagtcgcc ttcccgttcc gctatcggct gaatttgatt gcgagtgaga
4681 tatttatgcc agccagccag acgcagacgc gccgagacag aacttaatgg gcccgctaac
4741 agcgcgattt gctggtgacc caatgcgacc agatgctcca cgcccagtcg cgtaccgtct
4801 tcatgggaga aaataatact gttgatgggt gtctggtcag agacatcaag aaataacgcc
4861 ggaacattag tgcaggcagc ttccacagca atggcatcct ggtcatccag cggatagtta
4921 atgatcagcc cactgacgcg ttgcgcgaga agattgtgca ccgccgcttt acaggcttcg
4981 acgccgcttc gttctaccat cgacaccacc acgctggcac ccagttgatc ggcgcgagat
5041 ttaatcgccg cgacaatttg cgacggcgcg tgcagggcca gactggaggt ggcaacgcca
5101 atcagcaacg actgtttgcc cgccagttgt tgtgccacgc ggttgggaat gtaattcagc
5161 tccgccatcg ccgcttccac tttttcccgc gttttcgcag aaacgtggct ggcctggttc
5221 accacgcggg aaacggtctg ataagagaca ccggcatact ctgcgacatc gtataacgtt
5281 actggtttca cattcaccac cctgaattga ctctcttccg ggcgctatca tgccataccg
5341 cgaaaggttt tgcgccattc gatggtgtcc gggatctcga cgctctccct tatgcgactc
5401 ctgcattagg aagcagccca gtagtaggtt gaggccgttg agcaccgccg ccgcaaggaa
5461 tggtgcatgc aaggagatgg cgcccaacag tcccccggcc acggggcctg ccaccatacc
5521 cacgccgaaa caagcgctca tgagcccgaa gtggcgagcc cgatcttccc catcggtgat
5581 gtcggcgata taggcgccag caaccgcacc tgtggcgccg gtgatgccgg ccacgatgcg
5641 tccggcgtag aggatcgaga tctcgatccc gcgaaat
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2477/pENTR223-ZNF432-A1943人源基因质粒 |
| P2478/pENTR223-FES人源基因质粒 |
| P2479/pENTR223-PIGQ人源基因质粒 |
| P2480/pENTR223-RARS人源基因质粒 |
| P2481/pENTR223-MAN1B1人源基因质粒 |
| P2482/pENTR223-HSPA2人源基因质粒 |
| P2483/pENTR223-ARAF人源基因质粒 |
| P2484/pENTR223-PIAS3（28-1887bp）人源基因质粒 |
| P2485/pENTR223-PPM1G-929-931bp(缺失)人源基因质粒 |
| P2486/pENTR223-WBP11人源基因质粒 |
| P2487/pENTR223-LGALS3BP人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction system（pET系列质粒）的发明者。 T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了，但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
5b 大肠杆菌质粒 Amp pET11a 大肠杆菌质粒 Amp pET15b 大肠杆菌质粒 Amp pET16b 大肠杆菌质粒 Amp
pET-11a大肠表达质粒
￥100 - 1000
