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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
2年
- 英文名：
pGEX4T2;pGEX4T-2
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pGEX-4T-2大肠表达质粒
别称: pGEX4T2;pGEX4T-2
质粒属性
质粒简介
pGEX-4T-2是一个大肠杆菌表达质粒，Tac启动GST促溶标签和目的基因的融合表达。
其余类似载体：
pGEX-2T大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0649.html
pGEX-4T-1大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0001.html
pGEX-4T-2大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0002.html
pGEX-4T-3大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0003.html
pGEX-5X-1大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0692.html
pGEX-5X-3大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0004.html
pGEX-6P-1大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0005.html
pGEX-6P-2大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0006.html
pGEX-6P-3大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P1317.html
pGEX-KG大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0007.html
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 4970 bp ds-DNA circular SYN 28-1-2015
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4970)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-1-28 from SnapGene 2.0.1
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4970
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 183..211
/note="tac promoter"
/note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and
lac?UV5 promoters"
protein_bind 219..235
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 258..911
/codon_start=1
/gene="
"
/product="glutathione S-transferase from Schistosoma
japonicum"
/note="GST"
/translation="MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKK
FELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRY
GVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVL
YMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPK"
CDS 918..935
/codon_start=1
/product="thrombin recognition and cleavage site"
/note="thrombin site"
/translation="LVPRGS"
promoter 1273..1377
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 1378..2238
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
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/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
promoter 3241..3318
/gene="lacI (mutant)"
/note="lacIq promoter"
/note="In the lacIq allele, a single base change in the
promoter boosts expression of the lacI gene about 10-fold."
CDS 3319..4401
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
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EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
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ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
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/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
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/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 4488..4504
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
primer_bind 4512..4528
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
primer_bind complement(4544..4560)
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
ORIGIN
1 acgttatcga ctgcacggtg caccaatgct tctggcgtca ggcagccatc ggaagctgtg
61 gtatggctgt gcaggtcgta aatcactgca taattcgtgt cgctcaaggc gcactcccgt
121 tctggataat gttttttgcg ccgacatcat aacggttctg gcaaatattc tgaaatgagc
181 tgttgacaat taatcatcgg ctcgtataat gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca
241 cacaggaaac agtattcatg tcccctatac taggttattg gaaaattaag ggccttgtgc
301 aacccactcg acttcttttg gaatatcttg aagaaaaata tgaagagcat ttgtatgagc
361 gcgatgaagg tgataaatgg cgaaacaaaa agtttgaatt gggtttggag tttcccaatc
421 ttccttatta tattgatggt gatgttaaat taacacagtc tatggccatc atacgttata
481 tagctgacaa gcacaacatg ttgggtggtt gtccaaaaga gcgtgcagag atttcaatgc
541 ttgaaggagc ggttttggat attagatacg gtgtttcgag aattgcatat agtaaagact
601 ttgaaactct caaagttgat tttcttagca agctacctga aatgctgaaa atgttcgaag
661 atcgtttatg tcataaaaca tatttaaatg gtgatcatgt aacccatcct gacttcatgt
721 tgtatgacgc tcttgatgtt gttttataca tggacccaat gtgcctggat gcgttcccaa
781 aattagtttg ttttaaaaaa cgtattgaag ctatcccaca aattgataag tacttgaaat
841 ccagcaagta tatagcatgg cctttgcagg gctggcaagc cacgtttggt ggtggcgacc
901 atcctccaaa atcggatctg gttccgcgtg gatccccagg aattcccggg tcgactcgag
961 cggccgcatc gtgactgact gacgatctgc ctcgcgcgtt tcggtgatga cggtgaaaac
1021 ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga tgccgggagc
1081 agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt gtcggggcgc agccatgacc
1141 cagtcacgta gcgatagcgg agtgtataat tcttgaagac gaaagggcct cgtgatacgc
1201 ctatttttat aggttaatgt catgataata atggtttctt agacgtcagg tggcactttt
1261 cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat
1321 ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg
1381 agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt
1441 tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga
1501 gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa
1561 gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt
1621 gttgacgccg ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact attctcagaa tgacttggtt
1681 gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt acggatggca tgacagtaag agaattatgc
1741 agtgctgcca taaccatgag tgataacact gcggccaact tacttctgac aacgatcgga
1801 ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac tcgccttgat
1861 cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac cacgatgcct
1921 gcagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac tctagcttcc
1981 cggcaacaat taatagactg gatggaggcg gataaagttg caggaccact tctgcgctcg
2041 gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg tgggtctcgc
2101 ggtatcattg cagcactggg gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt tatctacacg
2161 acggggagtc aggcaactat ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat aggtgcctca
2221 ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa gtttactcat atatacttta gattgattta
2281 aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc
2341 aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa
2401 ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca
2461 ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta
2521 actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc
2581 caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca
2641 gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta
2701 ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag
2761 cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt
2821 cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc
2881 acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac
2941 ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac
3001 gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc
3061 tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga gtgagctgat
3121 accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga agcggaagag
3181 cgcctgatgc ggtattttct ccttacgcat ctgtgcggta tttcacaccg cataaattcc
3241 gacaccatcg aatggtgcaa aacctttcgc ggtatggcat gatagcgccc ggaagagagt
3301 caattcaggg tggtgaatgt gaaaccagta acgttatacg atgtcgcaga gtatgccggt
3361 gtctcttatc agaccgtttc ccgcgtggtg aaccaggcca gccacgtttc tgcgaaaacg
3421 cgggaaaaag tggaagcggc gatggcggag ctgaattaca ttcccaaccg cgtggcacaa
3481 caactggcgg gcaaacagtc gttgctgatt ggcgttgcca cctccagtct ggccctgcac
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//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pGEX-4T-2大肠表达质粒
别称: pGEX4T2;pGEX4T-2
| 启动子: | Tac |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；PGEX系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 4970bp |
| 质粒标签: | N-GST, N-thrombin |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 大肠杆菌BL21(DE3) |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | pGEX5: GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG |
| 3'测序引物: | pGEX3: CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG |
| 备注: | 可用GST亲和柱纯化重组蛋白 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
pGEX-4T-2是一个大肠杆菌表达质粒，Tac启动GST促溶标签和目的基因的融合表达。
其余类似载体：
pGEX-2T大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0649.html
pGEX-4T-1大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0001.html
pGEX-4T-2大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0002.html
pGEX-4T-3大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0003.html
pGEX-5X-1大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0692.html
pGEX-5X-3大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0004.html
pGEX-6P-1大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0005.html
pGEX-6P-2大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0006.html
pGEX-6P-3大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P1317.html
pGEX-KG大肠表达质粒： http://www.miaolingbio.com/plasmid/P0007.html
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 4970 bp ds-DNA circular SYN 28-1-2015
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4970)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-1-28 from SnapGene 2.0.1
http://www.miaolingbio.com
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source 1..4970
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CDS 3319..4401
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
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NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
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MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
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/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 4450..4480
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protein_bind 4488..4504
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
primer_bind 4512..4528
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
primer_bind complement(4544..4560)
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
ORIGIN
1 acgttatcga ctgcacggtg caccaatgct tctggcgtca ggcagccatc ggaagctgtg
61 gtatggctgt gcaggtcgta aatcactgca taattcgtgt cgctcaaggc gcactcccgt
121 tctggataat gttttttgcg ccgacatcat aacggttctg gcaaatattc tgaaatgagc
181 tgttgacaat taatcatcgg ctcgtataat gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca
241 cacaggaaac agtattcatg tcccctatac taggttattg gaaaattaag ggccttgtgc
301 aacccactcg acttcttttg gaatatcttg aagaaaaata tgaagagcat ttgtatgagc
361 gcgatgaagg tgataaatgg cgaaacaaaa agtttgaatt gggtttggag tttcccaatc
421 ttccttatta tattgatggt gatgttaaat taacacagtc tatggccatc atacgttata
481 tagctgacaa gcacaacatg ttgggtggtt gtccaaaaga gcgtgcagag atttcaatgc
541 ttgaaggagc ggttttggat attagatacg gtgtttcgag aattgcatat agtaaagact
601 ttgaaactct caaagttgat tttcttagca agctacctga aatgctgaaa atgttcgaag
661 atcgtttatg tcataaaaca tatttaaatg gtgatcatgt aacccatcct gacttcatgt
721 tgtatgacgc tcttgatgtt gttttataca tggacccaat gtgcctggat gcgttcccaa
781 aattagtttg ttttaaaaaa cgtattgaag ctatcccaca aattgataag tacttgaaat
841 ccagcaagta tatagcatgg cctttgcagg gctggcaagc cacgtttggt ggtggcgacc
901 atcctccaaa atcggatctg gttccgcgtg gatccccagg aattcccggg tcgactcgag
961 cggccgcatc gtgactgact gacgatctgc ctcgcgcgtt tcggtgatga cggtgaaaac
1021 ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga tgccgggagc
1081 agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt gtcggggcgc agccatgacc
1141 cagtcacgta gcgatagcgg agtgtataat tcttgaagac gaaagggcct cgtgatacgc
1201 ctatttttat aggttaatgt catgataata atggtttctt agacgtcagg tggcactttt
1261 cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat
1321 ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg
1381 agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt
1441 tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga
1501 gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa
1561 gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt
1621 gttgacgccg ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact attctcagaa tgacttggtt
1681 gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt acggatggca tgacagtaag agaattatgc
1741 agtgctgcca taaccatgag tgataacact gcggccaact tacttctgac aacgatcgga
1801 ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac tcgccttgat
1861 cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac cacgatgcct
1921 gcagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac tctagcttcc
1981 cggcaacaat taatagactg gatggaggcg gataaagttg caggaccact tctgcgctcg
2041 gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg tgggtctcgc
2101 ggtatcattg cagcactggg gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt tatctacacg
2161 acggggagtc aggcaactat ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat aggtgcctca
2221 ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa gtttactcat atatacttta gattgattta
2281 aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc
2341 aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa
2401 ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca
2461 ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta
2521 actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc
2581 caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca
2641 gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta
2701 ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag
2761 cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt
2821 cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc
2881 acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac
2941 ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac
3001 gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc
3061 tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga gtgagctgat
3121 accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga agcggaagag
3181 cgcctgatgc ggtattttct ccttacgcat ctgtgcggta tttcacaccg cataaattcc
3241 gacaccatcg aatggtgcaa aacctttcgc ggtatggcat gatagcgccc ggaagagagt
3301 caattcaggg tggtgaatgt gaaaccagta acgttatacg atgtcgcaga gtatgccggt
3361 gtctcttatc agaccgtttc ccgcgtggtg aaccaggcca gccacgtttc tgcgaaaacg
3421 cgggaaaaag tggaagcggc gatggcggag ctgaattaca ttcccaaccg cgtggcacaa
3481 caactggcgg gcaaacagtc gttgctgatt ggcgttgcca cctccagtct ggccctgcac
3541 gcgccgtcgc aaattgtcgc ggcgattaaa tctcgcgccg atcaactggg tgccagcgtg
3601 gtggtgtcga tggtagaacg aagcggcgtc gaagcctgta aagcggcggt gcacaatctt
3661 ctcgcgcaac gcgtcagtgg gctgatcatt aactatccgc tggatgacca ggatgccatt
3721 gctgtggaag ctgcctgcac taatgttccg gcgttatttc ttgatgtctc tgaccagaca
3781 cccatcaaca gtattatttt ctcccatgaa gacggtacgc gactgggcgt ggagcatctg
3841 gtcgcattgg gtcaccagca aatcgcgctg ttagcgggcc cattaagttc tgtctcggcg
3901 cgtctgcgtc tggctggctg gcataaatat ctcactcgca atcaaattca gccgatagcg
3961 gaacgggaag gcgactggag tgccatgtcc ggttttcaac aaaccatgca aatgctgaat
4021 gagggcatcg ttcccactgc gatgctggtt gccaacgatc agatggcgct gggcgcaatg
4081 cgcgccatta ccgagtccgg gctgcgcgtt ggtgcggata tctcggtagt gggatacgac
4141 gataccgaag acagctcatg ttatatcccg ccgttaacca ccatcaaaca ggattttcgc
4201 ctgctggggc aaaccagcgt ggaccgcttg ctgcaactct ctcagggcca ggcggtgaag
4261 ggcaatcagc tgttgcccgt ctcactggtg aaaagaaaaa ccaccctggc gcccaatacg
4321 caaaccgcct ctccccgcgc gttggccgat tcattaatgc agctggcacg acaggtttcc
4381 cgactggaaa gcgggcagtg agcgcaacgc aattaatgtg agttagctca ctcattaggc
4441 accccaggct ttacacttta tgcttccggc tcgtatgttg tgtggaattg tgagcggata
4501 acaatttcac acaggaaaca gctatgacca tgattacgga ttcactggcc gtcgttttac
4561 aacgtcgtga ctgggaaaac cctggcgtta cccaacttaa tcgccttgca gcacatcccc
4621 ctttcgccag ctggcgtaat agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc
4681 gcagcctgaa tggcgaatgg cgctttgcct ggtttccggc accagaagcg gtgccggaaa
4741 gctggctgga gtgcgatctt cctgaggccg atactgtcgt cgtcccctca aactggcaga
4801 tgcacggtta cgatgcgccc atctacacca acgtaaccta tcccattacg gtcaatccgc
4861 cgtttgttcc cacggagaat ccgacgggtt gttactcgct cacatttaat gttgatgaaa
4921 gctggctaca ggaaggccag acgcgaatta tttttgatgg cgttggaatt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2065/pENTR223-GSTM4人源基因质粒 |
| P2066/pENTR223-FAM119A人源基因质粒 |
| P2067/pENTR223-PRELID1人源基因质粒 |
| P2068/pENTR223-TMED7人源基因质粒 |
| P2069/pENTR223-RNF114人源基因质粒 |
| P2070/pENTR223-NIPAL3-T113C人源基因质粒 |
| P2071/pENTR223-RBCK1人源基因质粒 |
| P2072/pENTR223-C2orf49人源基因质粒 |
| P2073/pENTR223-IMAGE4149333人源基因质粒 |
| P2074/pENTR223-EEF1AKMT3人源基因质粒 |
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查、基因筛选及图位克隆有益基因的最好材料，也是永久保存基因资源的最好方法之一。 至于作用就太多了，你自己google一下，发现的是你好多做不了，而不是不知道怎么做？ huangyuan62 楼主,请问能交换你的BAC质粒吗？pBACe3.6,pBeloBAC11等都可以。 本人有以下质粒和菌种,可全部用于交换 pET28a,pET32a,pETDsb,pETGST,pETTrx，pTrc—CKS, pGEX4T
a氨苄抗性带His标签（N端）+DsbA(二硫键形成蛋白A)：氨苄抗性带Gst标签（N端）：pGEX-KG，pGEX4T-1，pGEX-5x-1共表达载体：pET-duet。(含有两个T7启动子)表达宿主菌为M15系列表达载体：pQE31表达宿主菌为DH5a,JM109系列热启动表达载体：pBV220克隆载体pGEM-7Z,pUC19 三，自研发原核表达载体1，带His标签（N端）：PET-DsbA卡那抗性2，带His标签（N端）：PET-DsbA（mutation）卡那抗性说明：DsbA(二硫
pGEX-4T-2大肠表达质粒
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