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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
Plasmid#17466
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pE6c荧光基因质粒
别称: Plasmid#17466
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒;其它基因质粒;其它种源质粒
质粒大小:3023bp
质粒标签:N-HA
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主:大肠杆菌
载体用途:
基因种属:空载体
基因类型:ORF,GateWay
原核抗性:Kan
真核抗性:Neo/G418
荧光蛋白:
质粒简介
pE6c质粒可以为GateWay反应提供EYFP基因模板,还可以通过BamHI和NotI酶切位点连入目的基因,进而和EYFP荧光基因一起导入到最终的表达载体,modified pENTR vector for C-terminal EYFP tag fusion with your gene of interest.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3023 bp ds-DNA circular SYN 14-八月-2017
KEYWORDS pE6c
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3023)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2017年8月14日 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3023
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
terminator 103..189
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 term"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 281..308
/note="rrnB T2 term"
/note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
gene"
protein_bind 358..457
/gene="mutant version of attL"
/bound_moiety="LR Clonase(TM)"
/note="attL1"
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
misc_feature 488..505
/note="stuffer"
CDS 518..1237
/codon_start=1
/product="enhanced YFP"
/note="EYFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTFGYGLQCFARYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSYQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
protein_bind complement(1252..1351)
/gene="mutant version of attL"
/bound_moiety="LR Clonase(TM)"
/note="attL2"
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
CDS 1474..2283
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYGKP
DAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGKTA
FQVLEEYPDSGENIVDALAVSLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDASD
FDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGIAD
RYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin 2373..2961
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgctagca tggatctcgg
61 ggacgtctaa ctactaagcg agagtaggga actgccaggc atcaaataaa acgaaaggct
121 cagtcggaag actgggcctt tcgttttatc tgttgtttgt cggtgaacgc tctcctgagt
181 aggacaaatc cgccgggagc ggatttgaac gttgtgaagc aacggcccgg agggtggcgg
241 gcaggacgcc cgccataaac tgccaggcat caaactaagc agaaggccat cctgacggat
301 ggcctttttg cgtttctaca aactcttcct gttagttagt tacttaagct cgggccccaa
361 ataatgattt tattttgact gatagtgacc tgttcgttgc aacaaattga taagcaatgc
421 ttttttataa tgccaacttt gtacaaaaaa gcaggcttta aaggaaccaa ttcagtcgac
481 tggatccggt acagatttcg gacatgcggc cgcacctatg gtgagcaagg gcgaggagct
541 gttcaccggg gtggtgccca tcctggtcga gctggacggc gacgtaaacg gccacaagtt
601 cagcgtgtcc ggcgagggcg agggcgatgc cacctacggc aagctgaccc tgaagttcat
661 ctgcaccacc ggcaagctgc ccgtgccctg gcccaccctc gtgaccacct tcggctacgg
721 cctgcagtgc ttcgcccgct accccgacca catgaagcag cacgacttct tcaagtccgc
781 catgcccgaa ggctacgtcc aggagcgcac catcttcttc aaggacgacg gcaactacaa
841 gacccgcgcc gaggtgaagt tcgagggcga caccctggtg aaccgcatcg agctgaaggg
901 catcgacttc aaggaggacg gcaacatcct ggggcacaag ctggagtaca actacaacag
961 ccacaacgtc tatatcatgg ccgacaagca gaagaacggc atcaaggtga acttcaagat
1021 ccgccacaac atcgaggacg gcagcgtgca gctcgccgac cactaccagc agaacacccc
1081 catcggcgac ggccccgtgc tgctgcccga caaccactac ctgagctacc agtccgccct
1141 gagcaaagac cccaacgaga agcgcgatca catggtcctg ctggagttcg tgaccgccgc
1201 cgggatcact ctcggcatgg acgagctgta caagtaactc gagatatcta gacccagctt
1261 tcttgtacaa agttggcatt ataagaaagc attgcttatc aatttgttgc aacgaacagg
1321 tcactatcag tcaaaataaa atcattattt gccatccagc tgcagctctg gcccgtgtct
1381 caaaatctct gatgttacat tgcacaagat aaaaatatat catcatgaac aataaaactg
1441 tctgcttaca taaacagtaa tacaaggggt gttatgagcc atattcaacg ggaaacgtcg
1501 aggccgcgat taaattccaa catggatgct gatttatatg ggtataaatg ggctcgcgat
1561 aatgtcgggc aatcaggtgc gacaatctat cgcttgtatg ggaagcccga tgcgccagag
1621 ttgtttctga aacatggcaa aggtagcgtt gccaatgatg ttacagatga gatggtcaga
1681 ctaaactggc tgacggaatt tatgcctctt ccgaccatca agcattttat ccgtactcct
1741 gatgatgcat ggttactcac cactgcgatc cccggaaaaa cagcattcca ggtattagaa
1801 gaatatcctg attcaggtga aaatattgtt gatgcgctgg cagtgtccct gcgccggttg
1861 cattcgattc ctgtttgtaa ttgtcctttt aacagcgatc gcgtatttcg tctcgctcag
1921 gcgcaatcac gaatgaataa cggtttggtt gatgcgagtg attttgatga cgagcgtaat
1981 ggctggcctg ttgaacaagt ctggaaagaa atgcataaac ttttgccatt ctcaccggat
2041 tcagtcgtca ctcatggtga tttctcactt gataacctta tttttgacga ggggaaatta
2101 ataggttgta ttgatgttgg acgagtcgga atcgcagacc gataccagga tcttgccatc
2161 ctatggaact gcctcggtga gttttctcct tcattacaga aacggctttt tcaaaaatat
2221 ggtattgata atcctgatat gaataaattg cagtttcatt tgatgctcga tgagtttttc
2281 taatcagaat tggttaattg gttgtaacat tattcagatt gggccccgtt ccactgagcg
2341 tcagacccgg tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc
2401 tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag
2461 ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtt
2521 cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac
2581 ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc
2641 gggttggact caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt
2701 tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt
2761 gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc
2821 ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt
2881 tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca
2941 ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt
3001 tgctggcctt ttgctcacat gtt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P0537/pET28a-TGFB1人源基因质粒 |
| P1054/pT7-His-AGK人源基因质粒 |
| P1055/pT7-His-TNF人源基因质粒 |
| P1140/pT7-His-IL13人源基因质粒 |
| P1160/pT7-His-LGALS13人源基因质粒 |
| P1161/pT7-His-IL4人源基因质粒 |
| P1162/pT7-His-IL6人源基因质粒 |
| P1163/pT7-His-TRAF6-S12F人源基因质粒 |
| P1164/pT7-His-GSK3B人源基因质粒 |
| P1165/pT7-His-CD1D人源基因质粒 |
| P1187/pT7-His-LGALS13人源基因质粒 |
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文献和实验【求助】用于检测双荧光素酶报告基因的细胞究竟是应该同时转染两种质粒呢还是只需一个质粒上面同时含两种荧光素酶报告基因?谢谢
lsdcfhyj 向大家请教关于双荧光素酶报告基因检测系统与单荧光素酶报告基因检测系统的问题,两者的区别我基本清楚了,只是我没弄清楚用于检测的细胞究竟是应该同时转染两种质粒(分别含虫荧光素酶报告基因和海肾荧光素酶报告基因)呢还是只需一个质粒上面同时含两种荧光素酶报告基因?还有一个问题是如果是要转染两种质粒的话,是只需在含虫荧光素酶基因质粒中插入所要检测的调控元件基因,还是两种质粒中的荧光素酶基因前都要插入调控元件?谢谢 msniu
longgyin8341 我想研究细胞在氧化应激损伤过程中核受体NFkB对于下游一些目的基因(如ICAM-1等)转录调控的影响,是不是需要把NFkB在基因组上的特异性结合元件克隆出来,与虫荧光素酶报告基因质粒构建重组质粒,然后转染细胞? 若是如此:NFkb由于可以调控多种下游基因的表达,它在基因组上每个调控基因的结合序列都是特异的吗?或者说这段序列是固定的吗?如何在网上找呢?谢谢 longgyin8341
【求助】关于构建目的基因启动子序列的虫荧光素酶报告基因重组质粒的问题请教
longgyin8341 最近想做虫荧光素酶报告基因,但是从来没有做过,想求院子里高手指教: 我是要观察一种药物是否能作用于细胞内的几种核受体(NFkB,PPAR,ER(目前还不清楚究竟是哪个,需要分别试验))的启动子区域,影响这几个核受体的转录水平,从而影响细胞的一些功能(比如凋亡等)。计划将这三种核受体的启动子区域分别扩增出来,然后与虫荧光素酶(或其他报告基因)构建重组质粒。再分别转染细胞,加入药物处理,观察荧光素酶的活性,以探索药物是否










