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pE6c荧光基因质粒

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  • Xybio
  • 上海
  • P1265
  • 2025年07月12日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20

    • 保质期

      2年

    • 英文名

      Plasmid#17466

    • 库存

      100

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 规格

      干粉/液体

    基本信息
    名称:pE6c荧光基因质粒
    别称:  Plasmid#17466
    复制子: pUC
    质粒分类:  基因文库质粒;其它基因质粒;其它种源质粒
    质粒大小:3023bp
    质粒标签:N-HA
    原核抗性: Kan
    克隆菌株: DH5a
    培养条件: 37度

    质粒属性
    载体宿主:大肠杆菌
    载体用途:
    基因种属:空载体
    基因类型:ORF,GateWay
    原核抗性:Kan
    真核抗性:Neo/G418
    荧光蛋白:

    质粒简介
       pE6c质粒可以为GateWay反应提供EYFP基因模板,还可以通过BamHI和NotI酶切位点连入目的基因,进而和EYFP荧光基因一起导入到最终的表达载体,modified pENTR vector for C-terminal EYFP tag fusion with your gene of interest.

    质粒图谱
    产品细节图片1

    质粒序列
    LOCUS       Exported                3023 bp ds-DNA    circular SYN 14-八月-2017
    KEYWORDS    pE6c
    SOURCE      synthetic DNA construct
      ORGANISM  synthetic DNA construct
    REFERENCE   1  (bases 1 to 3023)
      TITLE     Direct Submission
      JOURNAL   Exported 2017年8月14日 from MiaoLingPlasmid
                http://www.miaolingbio.com
    FEATURES             Location/Qualifiers
         source          1..3023
                         /organism="synthetic DNA construct"
                         /mol_type="other DNA"
         terminator      103..189
                         /gene="Escherichia coli rrnB"
                         /note="rrnB T1 term"
                         /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB 
                         gene"
         terminator      281..308
                         /note="rrnB T2 term"
                         /note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB 
                         gene"
         protein_bind    358..457
                         /gene="mutant version of attL"
                         /bound_moiety="LR Clonase(TM)"
                         /note="attL1"
                         /note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
         misc_feature    488..505
                         /note="stuffer"
         CDS             518..1237
                         /codon_start=1
                         /product="enhanced YFP"
                         /note="EYFP"
                         /note="mammalian codon-optimized"
                         /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                         KFICTTGKLPVPWPTLVTTFGYGLQCFARYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                         GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
                         VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSYQSALSKDPNEKRDHMVLL
                         EFVTAAGITLGMDELYK"
         protein_bind    complement(1252..1351)
                         /gene="mutant version of attL"
                         /bound_moiety="LR Clonase(TM)"
                         /note="attL2"
                         /note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
         CDS             1474..2283
                         /codon_start=1
                         /gene="aph(3')-Ia"
                         /product="aminoglycoside phosphotransferase"
                         /note="KanR"
                         /note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418 
                         (Geneticin(R)) in eukaryotes"
                         /translation="MSHIQRETSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYGKP
                         DAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGKTA
                         FQVLEEYPDSGENIVDALAVSLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDASD
                         FDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGIAD
                         RYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
         rep_origin      2373..2961
                         /direction=RIGHT
                         /note="ori"
                         /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                         replication"
    ORIGIN
            1 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgctagca tggatctcgg
           61 ggacgtctaa ctactaagcg agagtaggga actgccaggc atcaaataaa acgaaaggct
          121 cagtcggaag actgggcctt tcgttttatc tgttgtttgt cggtgaacgc tctcctgagt
          181 aggacaaatc cgccgggagc ggatttgaac gttgtgaagc aacggcccgg agggtggcgg
          241 gcaggacgcc cgccataaac tgccaggcat caaactaagc agaaggccat cctgacggat
          301 ggcctttttg cgtttctaca aactcttcct gttagttagt tacttaagct cgggccccaa
          361 ataatgattt tattttgact gatagtgacc tgttcgttgc aacaaattga taagcaatgc
          421 ttttttataa tgccaacttt gtacaaaaaa gcaggcttta aaggaaccaa ttcagtcgac
          481 tggatccggt acagatttcg gacatgcggc cgcacctatg gtgagcaagg gcgaggagct
          541 gttcaccggg gtggtgccca tcctggtcga gctggacggc gacgtaaacg gccacaagtt
          601 cagcgtgtcc ggcgagggcg agggcgatgc cacctacggc aagctgaccc tgaagttcat
          661 ctgcaccacc ggcaagctgc ccgtgccctg gcccaccctc gtgaccacct tcggctacgg
          721 cctgcagtgc ttcgcccgct accccgacca catgaagcag cacgacttct tcaagtccgc
          781 catgcccgaa ggctacgtcc aggagcgcac catcttcttc aaggacgacg gcaactacaa
          841 gacccgcgcc gaggtgaagt tcgagggcga caccctggtg aaccgcatcg agctgaaggg
          901 catcgacttc aaggaggacg gcaacatcct ggggcacaag ctggagtaca actacaacag
          961 ccacaacgtc tatatcatgg ccgacaagca gaagaacggc atcaaggtga acttcaagat
         1021 ccgccacaac atcgaggacg gcagcgtgca gctcgccgac cactaccagc agaacacccc
         1081 catcggcgac ggccccgtgc tgctgcccga caaccactac ctgagctacc agtccgccct
         1141 gagcaaagac cccaacgaga agcgcgatca catggtcctg ctggagttcg tgaccgccgc
         1201 cgggatcact ctcggcatgg acgagctgta caagtaactc gagatatcta gacccagctt
         1261 tcttgtacaa agttggcatt ataagaaagc attgcttatc aatttgttgc aacgaacagg
         1321 tcactatcag tcaaaataaa atcattattt gccatccagc tgcagctctg gcccgtgtct
         1381 caaaatctct gatgttacat tgcacaagat aaaaatatat catcatgaac aataaaactg
         1441 tctgcttaca taaacagtaa tacaaggggt gttatgagcc atattcaacg ggaaacgtcg
         1501 aggccgcgat taaattccaa catggatgct gatttatatg ggtataaatg ggctcgcgat
         1561 aatgtcgggc aatcaggtgc gacaatctat cgcttgtatg ggaagcccga tgcgccagag
         1621 ttgtttctga aacatggcaa aggtagcgtt gccaatgatg ttacagatga gatggtcaga
         1681 ctaaactggc tgacggaatt tatgcctctt ccgaccatca agcattttat ccgtactcct
         1741 gatgatgcat ggttactcac cactgcgatc cccggaaaaa cagcattcca ggtattagaa
         1801 gaatatcctg attcaggtga aaatattgtt gatgcgctgg cagtgtccct gcgccggttg
         1861 cattcgattc ctgtttgtaa ttgtcctttt aacagcgatc gcgtatttcg tctcgctcag
         1921 gcgcaatcac gaatgaataa cggtttggtt gatgcgagtg attttgatga cgagcgtaat
         1981 ggctggcctg ttgaacaagt ctggaaagaa atgcataaac ttttgccatt ctcaccggat
         2041 tcagtcgtca ctcatggtga tttctcactt gataacctta tttttgacga ggggaaatta
         2101 ataggttgta ttgatgttgg acgagtcgga atcgcagacc gataccagga tcttgccatc
         2161 ctatggaact gcctcggtga gttttctcct tcattacaga aacggctttt tcaaaaatat
         2221 ggtattgata atcctgatat gaataaattg cagtttcatt tgatgctcga tgagtttttc
         2281 taatcagaat tggttaattg gttgtaacat tattcagatt gggccccgtt ccactgagcg
         2341 tcagacccgg tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc
         2401 tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag
         2461 ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtt
         2521 cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac
         2581 ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc
         2641 gggttggact caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt
         2701 tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt
         2761 gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc
         2821 ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt
         2881 tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca
         2941 ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt
         3001 tgctggcctt ttgctcacat gtt
    //

    质粒菌株产品操作说明书
    一、扩增流程
             收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
             1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
                  1100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
                  加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37培养45min
                  6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
                  将平板正向培养1h,再倒置37培养14h。如果要求是30度则培养20h
    (菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
                  挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
            2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
                  四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
            3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
            4、菌落平板(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  直接挑取单菌落至液体培养基中。
            5、液体质粒(冰袋运输,存于-20,保质期90天)
                  单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
            6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。

    二、转化图片
    产品细节图片2
    产品细节图片3
    P0537/pET28a-TGFB1人源基因质粒
    P1054/pT7-His-AGK人源基因质粒
    P1055/pT7-His-TNF人源基因质粒
    P1140/pT7-His-IL13人源基因质粒
    P1160/pT7-His-LGALS13人源基因质粒
    P1161/pT7-His-IL4人源基因质粒
    P1162/pT7-His-IL6人源基因质粒
    P1163/pT7-His-TRAF6-S12F人源基因质粒
    P1164/pT7-His-GSK3B人源基因质粒
    P1165/pT7-His-CD1D人源基因质粒
    P1187/pT7-His-LGALS13人源基因质粒

     

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