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- Xybio
- 上海
- P0399
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pGEX-HRV3C
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pGEX-HRV3C②切割酶基因质粒
别称: pGEX-HRV3C
启动子：Tac
复制子: pBR322
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pGEX-HRV3C②质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4012/pCMV-SPORT6-MAP7D1（827-2523bp）人源基因质粒 |
| P4013/pCMV-SPORT6-H3F3B人源基因质粒 |
| P4014/pCMV-SPORT6-C14orf80人源基因质粒 |
| P4015/pCMV-SPORT6-NABP1人源基因质粒 |
| P4016/pCMV-SPORT6-SLC16A5（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4017/pCMV-SPORT6-SLBP人源基因质粒 |
| P4018/pCMV-SPORT6-TM9SF1人源基因质粒 |
| P4019/pCMV-SPORT6-SNAP29（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4020/pCMV-SPORT6-BCOR人源基因质粒 |
| P4021/pCMV-SPORT6-HEBP1人源基因质粒 |
| P4022/pCMV-SPORT6-CALCOCO2人源基因质粒 |
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文献和实验高，预测其很难广泛应用于植物基因组编辑。1.2 TALENs 技术及其应用TALENs 是继 ZFNs 之后的第二代基因组编辑技术。TALEN 结构与 ZFN 类似，也由 DNA 结合域和 FokI 的切割结构域融合而成。TALEN 的 DNA 结合域为天然的或经改造的 TAL 效应子 (TALeffector，TALE) 蛋白结构域。天然的 TALEs 都具有高度统一的结构:即高度保守的 N 端和 C 端、中间部分的重复区。不同 TALEs 之间的差异主要在中间的重复区，其由 33—35 个氨
3、载体MCS中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链 接，不产生阅读框架错位。选用质粒（最常用）做载体的4点要求： ①选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多 （也有大载体）； ②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型 质粒 ③必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地； ④必需有易检测的标记，多是抗生
分为三大类，感染的植物诱导合成这些有机碱，但不能利用它们，其分解酶基因在Ti质粒上，分解产物为氨基酸和糖类，供根癌农杆菌使用作为氮源及碳源。 2.T-DNA 的整合机制： T-DNA 的详细整合机制尚不清楚，但有几个环节是明确的： T-DNA 切除由Vir区编码的特异性内切酶完成，分别在LB和RB的第三个碱基和第四个碱基之间产生缺口，并形成单链T-DNA 。 T-DNA 的LB和RB在整合中的作用是不对称的，RB顺序与整合有关，而LB无关。 T-DNA 的整合可以是单拷贝
