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- Xybio
- 上海
- P1886
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCAG-D1R
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCAG-D1R病毒基因质粒
别称: pCAG-D1R
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：Puro
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：病毒
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光蛋白：
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1745/pActin-EGFP-beta-Actin (Homo)人源基因质粒 |
| P1246/pECMV-3×FLAG-DRD2人源基因质粒 |
| P1247/pECMV-3×FLAG-DRD3人源基因质粒 |
| P1248/pECMV-3×FLAG-PCSK9人源基因质粒 |
| P1249/pECMV-3×FLAG-CD20人源基因质粒 |
| P1250/pECMV-3×FLAG-SGLT1人源基因质粒 |
| P1251/pECMV-3×FLAG-SIRT4人源基因质粒 |
| P1281/pECMV-3×FLAG-LONP2人源基因质粒 |
| P1563/pECMV-3×FLAG-Survium人源基因质粒 |
| P1565/pECMV-3×FLAG-RLN2人源基因质粒 |
| P1853/pECMV-3×FLAG-IL8人源基因质粒 |
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文献和实验Nanobiotechnology. 2020 Jan 9;18(1):10. 二、慢病毒介导 CD63-GFP 表达： 将外泌体的特定蛋白 CD63 和绿色荧光蛋白 GFP 的表达元件构建成质粒再包装到慢病毒中，随后用此慢病毒感染细胞，使细胞分泌的外泌体带有绿色荧光。 图6 用 GFP 标记的外泌体分别与 SH-SY5Y、BV2 和 DRG 细胞共培养 Artif Cells Nanomed Biotechnol. 2019 Dec;47(1):2918-2929. 图7 注射有 CD63-GFP 的外泌体后观察
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，并且 EST12-RACK1 诱导的细胞焦亡在 M.tb 诱导的免疫中起关键作用。 研究内容： 1、RD 区编码蛋白筛选：对 40 种 RD 区（RD1-3、11-14）重组蛋白进行筛选（巨噬细胞焦磷酸相关蛋白），通过 LDH 释放实验细胞毒性分析，发现 EST12 对巨噬细胞有显著焦解作用。 2、菌株构建：构建 M. tb H37Rv ΔEST12（Rv1579c 敲除菌株）、BCG-EST12（Rv1579c 过表达菌株）、M. smeg–EST12（Rv1579c 过表达菌株）。 3、小鼠基因
