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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
V01106.1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
别名：pCDNA3.1-H1N1-ORF1病毒基因质粒
别称:V01106.1
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：病毒
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.1-H1N1-ORF1是一个甲型流感病毒基因哺乳细胞表达质粒。Influenza A virus (A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)) ORF1, genomic RNA；GenBank: V01106.1
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7562 bp ds-DNA circular SYN 14-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7562
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 202..581
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 582..785
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 830..848
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
regulatory 890..899
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
misc_feature 896..3043
/label=PDB
CDS 3059..3082
/codon_start=1
/product="8xHis affinity tag"
/label=8xHis
/translation="HHHHHHHH"
polyA_signal 3129..3353
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 3399..3827
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3841..4170
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4021..4156
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4237..5031
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 5205..5326
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(5777..6362)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6533..7393)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7394..7498)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
61 gtgtgttgga ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct
121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
241 cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg
301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
361 ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa
421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
481 atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta
541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
721 actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca
781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
841 actataggga gacccaagct ggctagcgtt taaacttaag cttggtaccg ccaccatgga
901 agattttgtg cgacaatgct tcaatccgat gattgtcgag cttgcggaaa aaacaatgaa
961 agagtatggg gaggacctga aaatcgaaac aaacaaattt gcagcaatat gcactcactt
1021 ggaagtatgc ttcatgtatt cagatttcca cttcatcaat gagcaaggcg agtcaataat
1081 cgtagaactt ggtgatccta atgcactttt gaagcacaga tttgaaataa tcgagggaag
1141 agatcgcaca atggcctgga cagtagtaaa cagtatttgc aacactacag gggctgagaa
1201 accaaagttt ctaccagatt tgtatgatta caaggaaaat agattcatcg aaattggagt
1261 aacaaggaga gaagttcaca tatactatct ggaaaaggcc aataaaatta aatctgagaa
1321 aacacacatc cacattttct cgttcactgg ggaagaaatg gccacaaagg ccgactacac
1381 tctcgatgaa gaaagcaggg ctaggatcaa aaccaggcta ttcaccataa gacaagaaat
1441 ggccagcaga ggcctctggg attcctttcg tcagtccgag agaggagaag agacaattga
1501 agaaaggttt gaaatcacag gaacaatgcg caagcttgcc gaccaaagtc tcccgccgaa
1561 cttctccagc cttgaaaatt ttagagccta tgtggatgga ttcgaaccga acggctacat
1621 tgagggcaag ctgtctcaaa tgtccaaaga agtaaatgct agaattgaac cttttttgaa
1681 aacaacacca cgaccactta gacttccgaa tgggcctccc tgttctcagc ggtccaaatt
1741 cctgctgatg gatgccttaa aattaagcat tgaggaccca agtcatgaag gagagggaat
1801 accgctatat gatgcaatca aatgcatgag aacattcttt ggatggaagg aacccaatgt
1861 tgttaaacca cacgaaaagg gaataaatcc aaattatctt ctgtcatgga agcaagtact
1921 ggcagaactg caggacattg agaatgagga gaaaattcca aagactaaaa atatgaaaaa
1981 aacaagtcag ctaaagtggg cacttggtga gaacatggca ccagaaaagg tagactttga
2041 cgactgtaaa gatgtaggtg atttgaagca atatgatagt gatgaaccag aattgaggtc
2101 gcttgcaagt tggattcaga atgagttcaa caaggcatgc gaactgacag attcaagctg
2161 gatagagctt gatgagattg gagaagatgt ggctccaatt gaacacattg caagcatgag
2221 aaggaattat ttcacatcag aggtgtctca ctgcagagcc acagaataca taatgaaggg
2281 ggtgtacatc aatactgcct tacttaatgc atcttgtgca gcaatggatg atttccaatt
2341 aattccaatg ataagcaagt gtagaactaa ggagggaagg cgaaagacca acttgtatgg
2401 tttcatcata aaaggaagat cccacttaag gaatgacacc gacgtggtaa actttgtgag
2461 catggagttt tctctcactg acccaagact tgaaccacac aaatgggaga agtactgtgt
2521 tcttgagata ggagatatgc ttctaagaag tgccataggc caggtttcaa ggcccatgtt
2581 cttgtatgtg aggacaaatg gaacctcaaa aattaaaatg aaatggggaa tggagatgag
2641 gcgttgtctc ctccagtcac ttcaacaaat tgagagtatg attgaagctg agtcctctgt
2701 caaagagaaa gacatgacca aagagttctt tgagaacaaa tcagaaacat ggcccattgg
2761 agagtctccc aaaggagtgg aggaaagttc cattgggaag gtctgcagga ctttattagc
2821 aaagtcggta tttaacagct tgtatgcatc tccacaacta gaaggatttt cagctgaatc
2881 aagaaaactg cttcttatcg ttcaggctct tagggacaat ctggaacctg ggacctttga
2941 tcttgggggg ctatatgaag caattgagga gtgcctaatt aatgatccct gggttttgct
3001 taatgcttct tggttcaact ccttccttac acatgcattg agtggaggcg gcggttccca
3061 tcaccaccat caccaccatc attgactcga gtctagaggg cccgtttaaa cccgctgatc
3121 agcctcgact gtgccttcta gttgccagcc atctgttgtt tgcccctccc ccgtgccttc
3181 cttgaccctg gaaggtgcca ctcccactgt cctttcctaa taaaatgagg aaattgcatc
3241 gcattgtctg agtaggtgtc attctattct ggggggtggg gtggggcagg acagcaaggg
3301 ggaggattgg gaagacaata gcaggcatgc tggggatgcg gtgggctcta tggcttctga
3361 ggcggaaaga accagctggg gctctagggg gtatccccac gcgccctgta gcggcgcatt
3421 aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag cgtgaccgct acacttgcca gcgccctagc
3481 gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt tctcgccacg ttcgccggct ttccccgtca
3541 agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt ccgatttagt gctttacggc acctcgaccc
3601 caaaaaactt gattagggtg atggttcacg tagtgggcca tcgccctgat agacggtttt
3661 tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt taatagtgga ctcttgttcc aaactggaac
3721 aacactcaac cctatctcgg tctattcttt tgatttataa gggattttgc cgatttcggc
3781 ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaac gcgaattaat tctgtggaat
3841 gtgtgtcagt tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc
3901 atgcatctca attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga
3961 agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc
4021 atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc cattctccgc cccatggctg actaattttt
4081 tttatttatg cagaggccga ggccgcctct gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga
4141 ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa aagctcccgg gagcttgtat atccattttc
4201 ggatctgatc aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac
4261 gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca
4321 atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt
4381 gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat gaactgcagg acgaggcagc gcggctatcg
4441 tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga
4501 agggactggc tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct
4561 cctgccgaga aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg
4621 gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg
4681 gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc
4741 gaactgttcg ccaggctcaa ggcgcgcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat
4801 ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac
4861 tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt
4921 gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct
4981 cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg agcgggactc
5041 tggggttcga aatgaccgac caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca
5101 ccgccgcctt ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga
5161 tcctccagcg cggggatctc atgctggagt tcttcgccca ccccaacttg tttattgcag
5221 cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt
5281 cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat gtctgtatac
5341 cgtcgacctc tagctagagc ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct gtgtgaaatt
5401 gttatccgct cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg
5461 gtgcctaatg agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt
5521 cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt
5581 tgcgtattgg gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc
5641 tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg
5701 ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg
5761 ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac
5821 gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg
5881 gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct
5941 ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg
6001 tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct
6061 gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac
6121 tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt
6181 tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc
6241 tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca
6301 ccgctggtag cggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc
6361 aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt
6421 aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa
6481 aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat
6541 gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct
6601 gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg
6661 caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag
6721 ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta
6781 attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg
6841 ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg
6901 gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct
6961 ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta
7021 tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg
7081 gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc
7141 cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg
7201 gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga
7261 tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg
7321 ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat
7381 gttgaatact catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc
7441 tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca
7501 catttccccg aaaagtgcca cctgacgtcg acggatcggg agatctcccg atcccctatg
7561 gt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
别名：pCDNA3.1-H1N1-ORF1病毒基因质粒
别称:V01106.1
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：病毒
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.1-H1N1-ORF1是一个甲型流感病毒基因哺乳细胞表达质粒。Influenza A virus (A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)) ORF1, genomic RNA；GenBank: V01106.1
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7562 bp ds-DNA circular SYN 14-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7562
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 202..581
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 582..785
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 830..848
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
regulatory 890..899
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
misc_feature 896..3043
/label=PDB
CDS 3059..3082
/codon_start=1
/product="8xHis affinity tag"
/label=8xHis
/translation="HHHHHHHH"
polyA_signal 3129..3353
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 3399..3827
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3841..4170
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4021..4156
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4237..5031
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 5205..5326
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(5777..6362)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6533..7393)
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/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
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promoter complement(7394..7498)
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/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
61 gtgtgttgga ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct
121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
241 cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg
301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
361 ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa
421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
481 atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta
541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
721 actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca
781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
841 actataggga gacccaagct ggctagcgtt taaacttaag cttggtaccg ccaccatgga
901 agattttgtg cgacaatgct tcaatccgat gattgtcgag cttgcggaaa aaacaatgaa
961 agagtatggg gaggacctga aaatcgaaac aaacaaattt gcagcaatat gcactcactt
1021 ggaagtatgc ttcatgtatt cagatttcca cttcatcaat gagcaaggcg agtcaataat
1081 cgtagaactt ggtgatccta atgcactttt gaagcacaga tttgaaataa tcgagggaag
1141 agatcgcaca atggcctgga cagtagtaaa cagtatttgc aacactacag gggctgagaa
1201 accaaagttt ctaccagatt tgtatgatta caaggaaaat agattcatcg aaattggagt
1261 aacaaggaga gaagttcaca tatactatct ggaaaaggcc aataaaatta aatctgagaa
1321 aacacacatc cacattttct cgttcactgg ggaagaaatg gccacaaagg ccgactacac
1381 tctcgatgaa gaaagcaggg ctaggatcaa aaccaggcta ttcaccataa gacaagaaat
1441 ggccagcaga ggcctctggg attcctttcg tcagtccgag agaggagaag agacaattga
1501 agaaaggttt gaaatcacag gaacaatgcg caagcttgcc gaccaaagtc tcccgccgaa
1561 cttctccagc cttgaaaatt ttagagccta tgtggatgga ttcgaaccga acggctacat
1621 tgagggcaag ctgtctcaaa tgtccaaaga agtaaatgct agaattgaac cttttttgaa
1681 aacaacacca cgaccactta gacttccgaa tgggcctccc tgttctcagc ggtccaaatt
1741 cctgctgatg gatgccttaa aattaagcat tgaggaccca agtcatgaag gagagggaat
1801 accgctatat gatgcaatca aatgcatgag aacattcttt ggatggaagg aacccaatgt
1861 tgttaaacca cacgaaaagg gaataaatcc aaattatctt ctgtcatgga agcaagtact
1921 ggcagaactg caggacattg agaatgagga gaaaattcca aagactaaaa atatgaaaaa
1981 aacaagtcag ctaaagtggg cacttggtga gaacatggca ccagaaaagg tagactttga
2041 cgactgtaaa gatgtaggtg atttgaagca atatgatagt gatgaaccag aattgaggtc
2101 gcttgcaagt tggattcaga atgagttcaa caaggcatgc gaactgacag attcaagctg
2161 gatagagctt gatgagattg gagaagatgt ggctccaatt gaacacattg caagcatgag
2221 aaggaattat ttcacatcag aggtgtctca ctgcagagcc acagaataca taatgaaggg
2281 ggtgtacatc aatactgcct tacttaatgc atcttgtgca gcaatggatg atttccaatt
2341 aattccaatg ataagcaagt gtagaactaa ggagggaagg cgaaagacca acttgtatgg
2401 tttcatcata aaaggaagat cccacttaag gaatgacacc gacgtggtaa actttgtgag
2461 catggagttt tctctcactg acccaagact tgaaccacac aaatgggaga agtactgtgt
2521 tcttgagata ggagatatgc ttctaagaag tgccataggc caggtttcaa ggcccatgtt
2581 cttgtatgtg aggacaaatg gaacctcaaa aattaaaatg aaatggggaa tggagatgag
2641 gcgttgtctc ctccagtcac ttcaacaaat tgagagtatg attgaagctg agtcctctgt
2701 caaagagaaa gacatgacca aagagttctt tgagaacaaa tcagaaacat ggcccattgg
2761 agagtctccc aaaggagtgg aggaaagttc cattgggaag gtctgcagga ctttattagc
2821 aaagtcggta tttaacagct tgtatgcatc tccacaacta gaaggatttt cagctgaatc
2881 aagaaaactg cttcttatcg ttcaggctct tagggacaat ctggaacctg ggacctttga
2941 tcttgggggg ctatatgaag caattgagga gtgcctaatt aatgatccct gggttttgct
3001 taatgcttct tggttcaact ccttccttac acatgcattg agtggaggcg gcggttccca
3061 tcaccaccat caccaccatc attgactcga gtctagaggg cccgtttaaa cccgctgatc
3121 agcctcgact gtgccttcta gttgccagcc atctgttgtt tgcccctccc ccgtgccttc
3181 cttgaccctg gaaggtgcca ctcccactgt cctttcctaa taaaatgagg aaattgcatc
3241 gcattgtctg agtaggtgtc attctattct ggggggtggg gtggggcagg acagcaaggg
3301 ggaggattgg gaagacaata gcaggcatgc tggggatgcg gtgggctcta tggcttctga
3361 ggcggaaaga accagctggg gctctagggg gtatccccac gcgccctgta gcggcgcatt
3421 aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag cgtgaccgct acacttgcca gcgccctagc
3481 gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt tctcgccacg ttcgccggct ttccccgtca
3541 agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt ccgatttagt gctttacggc acctcgaccc
3601 caaaaaactt gattagggtg atggttcacg tagtgggcca tcgccctgat agacggtttt
3661 tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt taatagtgga ctcttgttcc aaactggaac
3721 aacactcaac cctatctcgg tctattcttt tgatttataa gggattttgc cgatttcggc
3781 ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaac gcgaattaat tctgtggaat
3841 gtgtgtcagt tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc
3901 atgcatctca attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga
3961 agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc
4021 atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc cattctccgc cccatggctg actaattttt
4081 tttatttatg cagaggccga ggccgcctct gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga
4141 ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa aagctcccgg gagcttgtat atccattttc
4201 ggatctgatc aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac
4261 gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca
4321 atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt
4381 gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat gaactgcagg acgaggcagc gcggctatcg
4441 tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga
4501 agggactggc tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct
4561 cctgccgaga aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg
4621 gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg
4681 gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc
4741 gaactgttcg ccaggctcaa ggcgcgcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat
4801 ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac
4861 tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt
4921 gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct
4981 cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg agcgggactc
5041 tggggttcga aatgaccgac caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca
5101 ccgccgcctt ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga
5161 tcctccagcg cggggatctc atgctggagt tcttcgccca ccccaacttg tttattgcag
5221 cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt
5281 cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat gtctgtatac
5341 cgtcgacctc tagctagagc ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct gtgtgaaatt
5401 gttatccgct cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg
5461 gtgcctaatg agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt
5521 cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt
5581 tgcgtattgg gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc
5641 tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg
5701 ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg
5761 ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac
5821 gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg
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7501 catttccccg aaaagtgcca cctgacgtcg acggatcggg agatctcccg atcccctatg
7561 gt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4961/pLVML-Myc-KBTBD6-IRES-Puro人源基因质粒 |
| P4955/pCMV-HA-MICALL2(2同义突变）人源基因质粒 |
| P4956/pECMV-3×FLAG-METTL3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P1169/pECMV-3×FLAG-H-FABP人源基因质粒 |
| P1170/pECMV-3×FLAG-TRAF6-S12F人源基因质粒 |
| P1171/pECMV-3×FLAG-GSK3B人源基因质粒 |
| P1172/pECMV-3×FLAG-CD1D人源基因质粒 |
| P1719/pECMV-3×FLAG-CD4人源基因质粒 |
| P1830/pECMV-3×FLAG-CD22人源基因质粒 |
| P1195/pECMV-3×FLAG-AFP人源基因质粒 |
| P4834/pCDNA3.1-AFP人源基因质粒 |
| P4100/pECMV-3×FLAG-CCNE2人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
厂家 载体pCDNA3.1 Transheep 大肠杆菌菌株DH5α Tiangen 限制性内切酶 Fermentas T4连接酶 Fermentas 质粒DNA小,大量抽提试剂盒 Axygen 凝胶
求助者：sunshine046000各位大侠，我最近准备做共转染，用于分析目的基因的蛋白功能改变，查阅文献发现可以用含目的基因的载体和含有报道基因（b-gal）的载体做共转染以控制转染率。..请问师兄师姐们，如果我的研究目的在于分析目的基因（野生型和突变型）的表达情况以及后续的活性变化。是否最好用含相同启动子，增强子，复制起点的两个载体（比如pcDNA-3.0-目的基因与pcDNA3.0-b-gal）????但文献上似乎并没有完全注意这些东西。.性质相同或性质不同的两种载体都有。.求救
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pCDNA3.1-H1N1-ORF1病毒基因质粒
￥100 - 1000
