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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_016774.3;Atp5f1b
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pEGFP-Atp5b-m小鼠基因质粒
别称: NM_016774.3;Atp5f1b
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：小鼠
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pEGFP-Atp5b-m小鼠基因质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6311 bp ds-DNA circular SYN 20-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pEGFP-Atp5b-m
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6311)
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6311
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 634..2220
/note="Atp5b-m"
CDS 2257..2976
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
polyA_signal 3099..3220
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(3227..3682)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3709..3813
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 3815..4172
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 4023..4158
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4207..5001
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 5233..5280
/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 5609..6197
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgagct caagcttgcc accatgttga gtcttgtggg gcgtgtggcc
661 tcggcctcgg cctccggggc cttgcgggga ctcagccctt cggcggctct gccacaggcg
721 cagcttctac tgcgagctgc tcccgccggg gttcatcctg ccagagacta tgcggcgcag
781 gcgtctgcgg ccccgaaggc aggcactgcc accgggcgaa tcgtggcagt catcggcgct
841 gtggtggacg tccagttcga tgagggatta ccacccatcc taaatgccct ggaagtgcaa
901 ggcagggaca gcagactggt tttggaggtg gcccagcatt tgggggagag cacggtcaga
961 actattgcta tggatggcac tgaaggcttg gttagaggcc agaaagtact ggattcaggg
1021 gcaccaatca aaattcctgt tggtcctgag accttgggca gaatcatgaa tgtcattgga
1081 gaacctattg atgagagagg tcctatcaaa accaaacaat ttgctcctat tcatgctgag
1141 gctcctgagt tcatagagat gagtgttgag caggagattc tggtgactgg gataaaggtt
1201 gtggatctgc tggccccata cgccaagggt gggaaaatcg gactctttgg aggtgctggc
1261 gttggaaaga cagtactgat catggagcta atcaacaatg tcgccaaagc ccatggtggt
1321 tactctgtat ttgctggtgt tggtgagagg acccgtgagg gcaatgattt ataccatgaa
1381 atgattgaat ctggtgttat caatctaaaa gatgccactt ccaaggtagc gttggtatat
1441 ggacagatga acgaaccacc tggcgctcga gcccgggtag ctctgactgg tttgaccgtt
1501 gctgaatact tcagagacca ggagggccaa gatgtcctgc tgtttattga caacatcttc
1561 cgctttaccc aggctggctc agaggtgtct gccttattgg gcagaatccc ttctgctgta
1621 ggctaccagc ccaccctagc caccgacatg ggcacaatgc aggaaaggat caccaccacc
1681 aagaagggat cgatcacctc ggtgcaggct atctatgtgc ctgctgatga cctgactgac
1741 cctgcccctg caaccacctt tgcccatttg gatgctacca ctgtgttgtc ccgggctatt
1801 gctgagttgg gcatctatcc agctgtggat ccactggact ccacctctcg aattatggat
1861 cccaacattg ttggcaatga gcattatgac gtcgcccgag gagtgcagaa aatcctgcag
1921 gactacaaat ctctccagga catcattgcc atcttgggta tggatgaact ttctgaggaa
1981 gataaattga ctgtgtcccg ggcaagaaag atacagcgct tcttgtctca gccattccaa
2041 gttgctgagg tcttcacggg tcacatgggg aagctggtgc ccttgaagga gaccattaaa
2101 ggattccagc agattttagc aggtgaatat gaccatctcc cagaacaagc cttctacatg
2161 gtgggaccca ttgaagaagc cgtggcaaag gctgataagc tggcagaaga gcacgggtcg
2221 ttggtaccgc gggcccggga tccaccggtc gccaccatgg tgagcaaggg cgaggagctg
2281 ttcaccgggg tggtgcccat cctggtcgag ctggacggcg acgtaaacgg ccacaagttc
2341 agcgtgtccg gcgagggcga gggcgatgcc acctacggca agctgaccct gaagttcatc
2401 tgcaccaccg gcaagctgcc cgtgccctgg cccaccctcg tgaccaccct gacctacggc
2461 gtgcagtgct tcagccgcta ccccgaccac atgaagcagc acgacttctt caagtccgcc
2521 atgcccgaag gctacgtcca ggagcgcacc atcttcttca aggacgacgg caactacaag
2581 acccgcgccg aggtgaagtt cgagggcgac accctggtga accgcatcga gctgaagggc
2641 atcgacttca aggaggacgg caacatcctg gggcacaagc tggagtacaa ctacaacagc
2701 cacaacgtct atatcatggc cgacaagcag aagaacggca tcaaggtgaa cttcaagatc
2761 cgccacaaca tcgaggacgg cagcgtgcag ctcgccgacc actaccagca gaacaccccc
2821 atcggcgacg gccccgtgct gctgcccgac aaccactacc tgagcaccca gtccgccctg
2881 agcaaagacc ccaacgagaa gcgcgatcac atggtcctgc tggagttcgt gaccgccgcc
2941 gggatcactc tcggcatgga cgagctgtac aagtaaagcg gccgcgactc tagatcataa
3001 tcagccatac cacatttgta gaggttttac ttgctttaaa aaacctccca cacctccccc
3061 tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg ttgttgttaa cttgtttatt gcagcttata
3121 atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc
3181 attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta aggcgtaaat tgtaagcgtt
3241 aatattttgt taaaattcgc gttaaatttt tgttaaatca gctcattttt taaccaatag
3301 gccgaaatcg gcaaaatccc ttataaatca aaagaataga ccgagatagg gttgagtgtt
3361 gttccagttt ggaacaagag tccactatta aagaacgtgg actccaacgt caaagggcga
3421 aaaaccgtct atcagggcga tggcccacta cgtgaaccat caccctaatc aagttttttg
3481 gggtcgaggt gccgtaaagc actaaatcgg aaccctaaag ggagcccccg atttagagct
3541 tgacggggaa agccggcgaa cgtggcgaga aaggaaggga agaaagcgaa aggagcgggc
3601 gctagggcgc tggcaagtgt agcggtcacg ctgcgcgtaa ccaccacacc cgccgcgctt
3661 aatgcgccgc tacagggcgc gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct
3721 atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga
3781 taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtcctgagg cggaaagaac cagctgtgga
3841 atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa
3901 gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca
3961 gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc
4021 ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt
4081 tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct cggcctctga gctattccag aagtagtgag
4141 gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aagatcgatc aagagacagg atgaggatcg
4201 tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg
4261 ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg
4321 ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat
4381 gaactgcaag acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca
4441 gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc tgctattggg cgaagtgccg
4501 gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat catggctgat
4561 gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa
4621 catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg
4681 gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa ggcgagcatg
4741 cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg
4801 gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat
4861 caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac
4921 cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc
4981 cttcttgacg agttcttctg agcgggactc tggggttcga aatgaccgac caagcgacgc
5041 ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt ctatgaaagg ttgggcttcg
5101 gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg cggggatctc atgctggagt
5161 tcttcgccca ccctaggggg aggctaactg aaacacggaa ggagacaata ccggaaggaa
5221 cccgcgctat gacggcaata aaaagacaga ataaaacgca cggtgttggg tcgtttgttc
5281 ataaacgcgg ggttcggtcc cagggctggc actctgtcga taccccaccg agaccccatt
5341 ggggccaata cgcccgcgtt tcttcctttt ccccacccca ccccccaagt tcgggtgaag
5401 gcccagggct cgcagccaac gtcggggcgg caggccctgc catagcctca ggttactcat
5461 atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc
5521 tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag
5581 accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct
5641 gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac
5701 caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc
5761 tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg
5821 ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt
5881 tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt
5941 gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc
6001 tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca
6061 gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata
6121 gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg
6181 ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct
6241 ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta
6301 ccgccatgca t
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pEGFP-Atp5b-m小鼠基因质粒
别称: NM_016774.3;Atp5f1b
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：小鼠
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pEGFP-Atp5b-m小鼠基因质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6311 bp ds-DNA circular SYN 20-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pEGFP-Atp5b-m
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6311)
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6311
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
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promoter"
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/product="enhanced GFP"
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/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3709..3813
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/note="AmpR promoter"
promoter 3815..4172
/note="SV40 promoter"
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/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4207..5001
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
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/note="NeoR/KanR"
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(Geneticin(R))"
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GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 5233..5280
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polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
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/direction=RIGHT
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replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgagct caagcttgcc accatgttga gtcttgtggg gcgtgtggcc
661 tcggcctcgg cctccggggc cttgcgggga ctcagccctt cggcggctct gccacaggcg
721 cagcttctac tgcgagctgc tcccgccggg gttcatcctg ccagagacta tgcggcgcag
781 gcgtctgcgg ccccgaaggc aggcactgcc accgggcgaa tcgtggcagt catcggcgct
841 gtggtggacg tccagttcga tgagggatta ccacccatcc taaatgccct ggaagtgcaa
901 ggcagggaca gcagactggt tttggaggtg gcccagcatt tgggggagag cacggtcaga
961 actattgcta tggatggcac tgaaggcttg gttagaggcc agaaagtact ggattcaggg
1021 gcaccaatca aaattcctgt tggtcctgag accttgggca gaatcatgaa tgtcattgga
1081 gaacctattg atgagagagg tcctatcaaa accaaacaat ttgctcctat tcatgctgag
1141 gctcctgagt tcatagagat gagtgttgag caggagattc tggtgactgg gataaaggtt
1201 gtggatctgc tggccccata cgccaagggt gggaaaatcg gactctttgg aggtgctggc
1261 gttggaaaga cagtactgat catggagcta atcaacaatg tcgccaaagc ccatggtggt
1321 tactctgtat ttgctggtgt tggtgagagg acccgtgagg gcaatgattt ataccatgaa
1381 atgattgaat ctggtgttat caatctaaaa gatgccactt ccaaggtagc gttggtatat
1441 ggacagatga acgaaccacc tggcgctcga gcccgggtag ctctgactgg tttgaccgtt
1501 gctgaatact tcagagacca ggagggccaa gatgtcctgc tgtttattga caacatcttc
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1621 ggctaccagc ccaccctagc caccgacatg ggcacaatgc aggaaaggat caccaccacc
1681 aagaagggat cgatcacctc ggtgcaggct atctatgtgc ctgctgatga cctgactgac
1741 cctgcccctg caaccacctt tgcccatttg gatgctacca ctgtgttgtc ccgggctatt
1801 gctgagttgg gcatctatcc agctgtggat ccactggact ccacctctcg aattatggat
1861 cccaacattg ttggcaatga gcattatgac gtcgcccgag gagtgcagaa aatcctgcag
1921 gactacaaat ctctccagga catcattgcc atcttgggta tggatgaact ttctgaggaa
1981 gataaattga ctgtgtcccg ggcaagaaag atacagcgct tcttgtctca gccattccaa
2041 gttgctgagg tcttcacggg tcacatgggg aagctggtgc ccttgaagga gaccattaaa
2101 ggattccagc agattttagc aggtgaatat gaccatctcc cagaacaagc cttctacatg
2161 gtgggaccca ttgaagaagc cgtggcaaag gctgataagc tggcagaaga gcacgggtcg
2221 ttggtaccgc gggcccggga tccaccggtc gccaccatgg tgagcaaggg cgaggagctg
2281 ttcaccgggg tggtgcccat cctggtcgag ctggacggcg acgtaaacgg ccacaagttc
2341 agcgtgtccg gcgagggcga gggcgatgcc acctacggca agctgaccct gaagttcatc
2401 tgcaccaccg gcaagctgcc cgtgccctgg cccaccctcg tgaccaccct gacctacggc
2461 gtgcagtgct tcagccgcta ccccgaccac atgaagcagc acgacttctt caagtccgcc
2521 atgcccgaag gctacgtcca ggagcgcacc atcttcttca aggacgacgg caactacaag
2581 acccgcgccg aggtgaagtt cgagggcgac accctggtga accgcatcga gctgaagggc
2641 atcgacttca aggaggacgg caacatcctg gggcacaagc tggagtacaa ctacaacagc
2701 cacaacgtct atatcatggc cgacaagcag aagaacggca tcaaggtgaa cttcaagatc
2761 cgccacaaca tcgaggacgg cagcgtgcag ctcgccgacc actaccagca gaacaccccc
2821 atcggcgacg gccccgtgct gctgcccgac aaccactacc tgagcaccca gtccgccctg
2881 agcaaagacc ccaacgagaa gcgcgatcac atggtcctgc tggagttcgt gaccgccgcc
2941 gggatcactc tcggcatgga cgagctgtac aagtaaagcg gccgcgactc tagatcataa
3001 tcagccatac cacatttgta gaggttttac ttgctttaaa aaacctccca cacctccccc
3061 tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg ttgttgttaa cttgtttatt gcagcttata
3121 atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc
3181 attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta aggcgtaaat tgtaagcgtt
3241 aatattttgt taaaattcgc gttaaatttt tgttaaatca gctcattttt taaccaatag
3301 gccgaaatcg gcaaaatccc ttataaatca aaagaataga ccgagatagg gttgagtgtt
3361 gttccagttt ggaacaagag tccactatta aagaacgtgg actccaacgt caaagggcga
3421 aaaaccgtct atcagggcga tggcccacta cgtgaaccat caccctaatc aagttttttg
3481 gggtcgaggt gccgtaaagc actaaatcgg aaccctaaag ggagcccccg atttagagct
3541 tgacggggaa agccggcgaa cgtggcgaga aaggaaggga agaaagcgaa aggagcgggc
3601 gctagggcgc tggcaagtgt agcggtcacg ctgcgcgtaa ccaccacacc cgccgcgctt
3661 aatgcgccgc tacagggcgc gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct
3721 atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga
3781 taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtcctgagg cggaaagaac cagctgtgga
3841 atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa
3901 gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca
3961 gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc
4021 ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt
4081 tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct cggcctctga gctattccag aagtagtgag
4141 gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aagatcgatc aagagacagg atgaggatcg
4201 tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg
4261 ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg
4321 ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat
4381 gaactgcaag acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca
4441 gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc tgctattggg cgaagtgccg
4501 gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat catggctgat
4561 gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa
4621 catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg
4681 gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa ggcgagcatg
4741 cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg
4801 gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat
4861 caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac
4921 cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc
4981 cttcttgacg agttcttctg agcgggactc tggggttcga aatgaccgac caagcgacgc
5041 ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt ctatgaaagg ttgggcttcg
5101 gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg cggggatctc atgctggagt
5161 tcttcgccca ccctaggggg aggctaactg aaacacggaa ggagacaata ccggaaggaa
5221 cccgcgctat gacggcaata aaaagacaga ataaaacgca cggtgttggg tcgtttgttc
5281 ataaacgcgg ggttcggtcc cagggctggc actctgtcga taccccaccg agaccccatt
5341 ggggccaata cgcccgcgtt tcttcctttt ccccacccca ccccccaagt tcgggtgaag
5401 gcccagggct cgcagccaac gtcggggcgg caggccctgc catagcctca ggttactcat
5461 atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc
5521 tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag
5581 accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct
5641 gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac
5701 caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc
5761 tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg
5821 ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt
5881 tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt
5941 gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc
6001 tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca
6061 gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata
6121 gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg
6181 ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct
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6301 ccgccatgca t
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4238/pCMV-SPORT6-GPS2人源基因质粒 |
| P4239/pCMV-SPORT6-C7orf42人源基因质粒 |
| P4240/pCMV-SPORT6-MRGPRF人源基因质粒 |
| P4241/pCMV-SPORT6-NECAB2人源基因质粒 |
| P4242/pCMV-SPORT6-INPP1人源基因质粒 |
| P4243/pCMV-SPORT6-UFSP2人源基因质粒 |
| P4244/pCMV-SPORT6-BPGM人源基因质粒 |
| P4245/pCMV-SPORT6-TRIM31（2同义突变1点突变）人源基因质粒 |
| P4246/pCMV-SPORT6-HTATIP2人源基因质粒 |
| P4247/pCMV-SPORT6-CALB2人源基因质粒 |
| P4248/pCMV-SPORT6-CARD14人源基因质粒 |
| P4249/pCMV-SPORT6-SLC17A5(1同义突变）人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
，并且 EST12-RACK1 诱导的细胞焦亡在 M.tb 诱导的免疫中起关键作用。 研究内容： 1、RD 区编码蛋白筛选：对 40 种 RD 区（RD1-3、11-14）重组蛋白进行筛选（巨噬细胞焦磷酸相关蛋白），通过 LDH 释放实验细胞毒性分析，发现 EST12 对巨噬细胞有显著焦解作用。 2、菌株构建：构建 M. tb H37Rv ΔEST12（Rv1579c 敲除菌株）、BCG-EST12（Rv1579c 过表达菌株）、M. smeg–EST12（Rv1579c 过表达菌株）。 3、小鼠基因
，Chl pTALEN_v2 (NN) 基因敲除质粒 Amp，Chl pTALEN_v2 (ND) 基因敲除质粒 Amp，Chl pEGFP-1 哺乳细胞质粒 Kan 真核表达载体,表达
工作设计的一套台式工作站。一次处理10张芯片，采用接触式点样技术，使用标准的CHipMaker或Stealth点样针，可放置1块96/384孔样品板，并配有一套载片真空固定系统和一套针头清洗真空干燥系统。价格低廉，非常适合经费紧缺的研究部门做芯片应用的中小型研究项目使用。 对于中型到大型的用户则可以选择美国Cartesian Technology公司PA系列、SQ系列生物芯片点样制作系统。这家公司在芯片技术刚出现时就致力于开发能将生物芯片变为现实的点样制作系统，并得到生物芯片技术的开创者M
pEGFP-Atp5b-m小鼠基因质粒
￥100 - 1000
