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- 详细信息
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_016849.4;C920001K05Rik;IRF-3
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pEGFP-IRF3-m（1同义突变）小鼠基因质粒
别称: NM_016849.4;C920001K05Rik;IRF-3
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pEGFP-IRF3-m（1个同义突变）小鼠基因质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5988 bp ds-DNA circular SYN 11-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pEGFP-IRF3-m
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5988)
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5988
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
regulatory 635..644
/regulatory_class="other"
/note="Kozak"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
misc_feature 641..1897
/note="Irf3-m"
CDS 1934..2653
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
polyA_signal 2776..2897
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2904..3359)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3386..3490
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 3492..3849
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3700..3835
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3884..4678
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4910..4957
/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 5286..5874
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgagct caagcttcga attcgccacc atggaaaccc cgaaaccgcg
661 gattttgccc tggctggtgt cacagctgga cctggggcag ctggaaggcg tggcctggct
721 ggacgagagc cgaacgaggt tcaggatccc gtggaagcat ggcctacggc aggacgcaca
781 gatggctgac tttggcatct tccaggcctg ggcagaagcc agtggtgcct acaccccggg
841 gaaggataag ccggacgtgt caacctggaa gaggaatttc cggtcagccc tgaaccggaa
901 agaagtgttg cggttagctg ctgacaatag caaggaccct tatgaccctc ataaagtgta
961 tgagtttgtg actccagggg cgcgggactt cgtacatctg ggtgcctctc ctgacaccaa
1021 tggcaaaagc agcctgcctc actcccagga aaacctaccg aagttatttg atggcctgat
1081 cttggggccc ctcaaagatg aggggtcctc agatctggct attgtttctg atccttctca
1141 acaactgcca agccccaatg tgaacaactt cctaaaccct gcaccccaag aaaatccact
1201 gaagcagctg ctagctgagg aacaatggga gttcgaggtg accgccttct accgaggccg
1261 ccaggtcttc cagcagacac tcttttgccc ggggggcctg cggctggtgg gcagcacagc
1321 tgacatgaca ctgccctggc agccagtcac cctgcccgat cctgaggggt ttctgacgga
1381 caagcttgtg aaggagtacg tggggcaggt gctcaaaggg ctgggcaatg ggctggcact
1441 gtggcaggct gggcagtgcc tctgggccca gcgcctaggc cactcccacg ccttctgggc
1501 tctgggggag gagctgcttc cagacagtgg gcgagggcct gatggagagg tccacaagga
1561 caaggacgga gccgtgttcg acctcaggcc cttcgtggca gatctgattg ccttcatgga
1621 aggaagtgga cactccccac gctacactct gtggttctgc atgggggaaa tgtggcccca
1681 ggaccagcca tgggtcaaga ggcttgtgat ggtcaaggtt gttcctacat gtcttaagga
1741 gctgttagag atggcccggg aagggggagc ctcttcactg aaaaccgtgg acttgcacat
1801 ctccaacagc cagcctatct cccttacctc tgaccagtac aaggcctacc tccaggactt
1861 ggtggaggac atggacttcc aggccactgg aaatatctcg gtaccgcggg cccgggatcc
1921 accggtcgcc accatggtga gcaagggcga ggagctgttc accggggtgg tgcccatcct
1981 ggtcgagctg gacggcgacg taaacggcca caagttcagc gtgtccggcg agggcgaggg
2041 cgatgccacc tacggcaagc tgaccctgaa gttcatctgc accaccggca agctgcccgt
2101 gccctggccc accctcgtga ccaccctgac ctacggcgtg cagtgcttca gccgctaccc
2161 cgaccacatg aagcagcacg acttcttcaa gtccgccatg cccgaaggct acgtccagga
2221 gcgcaccatc ttcttcaagg acgacggcaa ctacaagacc cgcgccgagg tgaagttcga
2281 gggcgacacc ctggtgaacc gcatcgagct gaagggcatc gacttcaagg aggacggcaa
2341 catcctgggg cacaagctgg agtacaacta caacagccac aacgtctata tcatggccga
2401 caagcagaag aacggcatca aggtgaactt caagatccgc cacaacatcg aggacggcag
2461 cgtgcagctc gccgaccact accagcagaa cacccccatc ggcgacggcc ccgtgctgct
2521 gcccgacaac cactacctga gcacccagtc cgccctgagc aaagacccca acgagaagcg
2581 cgatcacatg gtcctgctgg agttcgtgac cgccgccggg atcactctcg gcatggacga
2641 gctgtacaag taaagcggcc gcgactctag atcataatca gccataccac atttgtagag
2701 gttttacttg ctttaaaaaa cctcccacac ctccccctga acctgaaaca taaaatgaat
2761 gcaattgttg ttgttaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc
2821 atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa
2881 ctcatcaatg tatcttaagg cgtaaattgt aagcgttaat attttgttaa aattcgcgtt
2941 aaatttttgt taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca aaatccctta
3001 taaatcaaaa gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga acaagagtcc
3061 actattaaag aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc agggcgatgg
3121 cccactacgt gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcact
3181 aaatcggaac cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt
3241 ggcgagaaag gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg caagtgtagc
3301 ggtcacgctg cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac agggcgcgtc
3361 aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca
3421 ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa
3481 aaggaagagt cctgaggcgg aaagaaccag ctgtggaatg tgtgtcagtt agggtgtgga
3541 aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca
3601 accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc
3661 aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct aactccgccc
3721 agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag
3781 gccgcctcgg cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc
3841 ttttgcaaag atcgatcaag agacaggatg aggatcgttt cgcatgattg aacaagatgg
3901 attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg actgggcaca
3961 acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg ggcgcccggt
4021 tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaagacg aggcagcgcg
4081 gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg ttgtcactga
4141 agcgggaagg gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc tgtcatctca
4201 ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc tgcatacgct
4261 tgatccggct acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc gagcacgtac
4321 tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc aggggctcgc
4381 gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc gagcatgccc gacggcgagg atctcgtcgt
4441 gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct tttctggatt
4501 catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt tggctacccg
4561 tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc tttacggtat
4621 cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt tcttctgagc
4681 gggactctgg ggttcgaaat gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc acgagatttc
4741 gattccaccg ccgccttcta tgaaaggttg ggcttcggaa tcgttttccg ggacgccggc
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4861 ctaactgaaa cacggaagga gacaataccg gaaggaaccc gcgctatgac ggcaataaaa
4921 agacagaata aaacgcacgg tgttgggtcg tttgttcata aacgcggggt tcggtcccag
4981 ggctggcact ctgtcgatac cccaccgaga ccccattggg gccaatacgc ccgcgtttct
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5161 cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa
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5821 tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc
5881 agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt
5941 cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtattaccg ccatgcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pEGFP-IRF3-m（1同义突变）小鼠基因质粒
别称: NM_016849.4;C920001K05Rik;IRF-3
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pEGFP-IRF3-m（1个同义突变）小鼠基因质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5988 bp ds-DNA circular SYN 11-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pEGFP-IRF3-m
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5988)
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5988
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
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polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
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replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
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361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
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601 ccggactcag atctcgagct caagcttcga attcgccacc atggaaaccc cgaaaccgcg
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721 ggacgagagc cgaacgaggt tcaggatccc gtggaagcat ggcctacggc aggacgcaca
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961 tgagtttgtg actccagggg cgcgggactt cgtacatctg ggtgcctctc ctgacaccaa
1021 tggcaaaagc agcctgcctc actcccagga aaacctaccg aagttatttg atggcctgat
1081 cttggggccc ctcaaagatg aggggtcctc agatctggct attgtttctg atccttctca
1141 acaactgcca agccccaatg tgaacaactt cctaaaccct gcaccccaag aaaatccact
1201 gaagcagctg ctagctgagg aacaatggga gttcgaggtg accgccttct accgaggccg
1261 ccaggtcttc cagcagacac tcttttgccc ggggggcctg cggctggtgg gcagcacagc
1321 tgacatgaca ctgccctggc agccagtcac cctgcccgat cctgaggggt ttctgacgga
1381 caagcttgtg aaggagtacg tggggcaggt gctcaaaggg ctgggcaatg ggctggcact
1441 gtggcaggct gggcagtgcc tctgggccca gcgcctaggc cactcccacg ccttctgggc
1501 tctgggggag gagctgcttc cagacagtgg gcgagggcct gatggagagg tccacaagga
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1741 gctgttagag atggcccggg aagggggagc ctcttcactg aaaaccgtgg acttgcacat
1801 ctccaacagc cagcctatct cccttacctc tgaccagtac aaggcctacc tccaggactt
1861 ggtggaggac atggacttcc aggccactgg aaatatctcg gtaccgcggg cccgggatcc
1921 accggtcgcc accatggtga gcaagggcga ggagctgttc accggggtgg tgcccatcct
1981 ggtcgagctg gacggcgacg taaacggcca caagttcagc gtgtccggcg agggcgaggg
2041 cgatgccacc tacggcaagc tgaccctgaa gttcatctgc accaccggca agctgcccgt
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2221 gcgcaccatc ttcttcaagg acgacggcaa ctacaagacc cgcgccgagg tgaagttcga
2281 gggcgacacc ctggtgaacc gcatcgagct gaagggcatc gacttcaagg aggacggcaa
2341 catcctgggg cacaagctgg agtacaacta caacagccac aacgtctata tcatggccga
2401 caagcagaag aacggcatca aggtgaactt caagatccgc cacaacatcg aggacggcag
2461 cgtgcagctc gccgaccact accagcagaa cacccccatc ggcgacggcc ccgtgctgct
2521 gcccgacaac cactacctga gcacccagtc cgccctgagc aaagacccca acgagaagcg
2581 cgatcacatg gtcctgctgg agttcgtgac cgccgccggg atcactctcg gcatggacga
2641 gctgtacaag taaagcggcc gcgactctag atcataatca gccataccac atttgtagag
2701 gttttacttg ctttaaaaaa cctcccacac ctccccctga acctgaaaca taaaatgaat
2761 gcaattgttg ttgttaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc
2821 atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa
2881 ctcatcaatg tatcttaagg cgtaaattgt aagcgttaat attttgttaa aattcgcgtt
2941 aaatttttgt taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca aaatccctta
3001 taaatcaaaa gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga acaagagtcc
3061 actattaaag aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc agggcgatgg
3121 cccactacgt gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcact
3181 aaatcggaac cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt
3241 ggcgagaaag gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg caagtgtagc
3301 ggtcacgctg cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac agggcgcgtc
3361 aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca
3421 ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa
3481 aaggaagagt cctgaggcgg aaagaaccag ctgtggaatg tgtgtcagtt agggtgtgga
3541 aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca
3601 accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc
3661 aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct aactccgccc
3721 agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag
3781 gccgcctcgg cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc
3841 ttttgcaaag atcgatcaag agacaggatg aggatcgttt cgcatgattg aacaagatgg
3901 attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg actgggcaca
3961 acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg ggcgcccggt
4021 tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaagacg aggcagcgcg
4081 gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg ttgtcactga
4141 agcgggaagg gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc tgtcatctca
4201 ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc tgcatacgct
4261 tgatccggct acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc gagcacgtac
4321 tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc aggggctcgc
4381 gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc gagcatgccc gacggcgagg atctcgtcgt
4441 gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct tttctggatt
4501 catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt tggctacccg
4561 tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc tttacggtat
4621 cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt tcttctgagc
4681 gggactctgg ggttcgaaat gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc acgagatttc
4741 gattccaccg ccgccttcta tgaaaggttg ggcttcggaa tcgttttccg ggacgccggc
4801 tggatgatcc tccagcgcgg ggatctcatg ctggagttct tcgcccaccc tagggggagg
4861 ctaactgaaa cacggaagga gacaataccg gaaggaaccc gcgctatgac ggcaataaaa
4921 agacagaata aaacgcacgg tgttgggtcg tttgttcata aacgcggggt tcggtcccag
4981 ggctggcact ctgtcgatac cccaccgaga ccccattggg gccaatacgc ccgcgtttct
5041 tccttttccc caccccaccc cccaagttcg ggtgaaggcc cagggctcgc agccaacgtc
5101 ggggcggcag gccctgccat agcctcaggt tactcatata tactttagat tgatttaaaa
5161 cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa
5221 atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga
5281 tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg
5341 ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact
5401 ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac
5461 cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg
5521 gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg
5581 gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga
5641 acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc
5701 gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg
5761 agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc
5821 tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc
5881 agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt
5941 cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtattaccg ccatgcat
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4833/pECMV-3×FLAG-SDC1人源基因质粒 |
| P1154/pCMV-FLAG-SIRT4人源基因质粒 |
| P1166/pECMV-3×FLAG-LGALS13人源基因质粒 |
| P1167/pECMV-3×FLAG-IL4人源基因质粒 |
| P1168/pECMV-3×FLAG-IL6人源基因质粒 |
| P3802/pECMV-3×FLAG-MED10人源基因质粒 |
| P4927/pECMV-3×FLAG-YTHDF3人源基因质粒 |
| P4928/pECMV-3×FLAG-EIF4G2(1同义突变）人源基因质粒 |
| P4892/pCDNA3.1-3×HA-HDAC4人源基因质粒 |
| P4933/pCDNA3.0-HA-KPNA1人源基因质粒 |
| P4941/pCDNA3.1-PINK1-Myc人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
，并且 EST12-RACK1 诱导的细胞焦亡在 M.tb 诱导的免疫中起关键作用。 研究内容： 1、RD 区编码蛋白筛选：对 40 种 RD 区（RD1-3、11-14）重组蛋白进行筛选（巨噬细胞焦磷酸相关蛋白），通过 LDH 释放实验细胞毒性分析，发现 EST12 对巨噬细胞有显著焦解作用。 2、菌株构建：构建 M. tb H37Rv ΔEST12（Rv1579c 敲除菌株）、BCG-EST12（Rv1579c 过表达菌株）、M. smeg–EST12（Rv1579c 过表达菌株）。 3、小鼠基因
，Chl pTALEN_v2 (NN) 基因敲除质粒 Amp，Chl pTALEN_v2 (ND) 基因敲除质粒 Amp，Chl pEGFP-1 哺乳细胞质粒 Kan 真核表达载体,表达
工作设计的一套台式工作站。一次处理10张芯片，采用接触式点样技术，使用标准的CHipMaker或Stealth点样针，可放置1块96/384孔样品板，并配有一套载片真空固定系统和一套针头清洗真空干燥系统。价格低廉，非常适合经费紧缺的研究部门做芯片应用的中小型研究项目使用。 对于中型到大型的用户则可以选择美国Cartesian Technology公司PA系列、SQ系列生物芯片点样制作系统。这家公司在芯片技术刚出现时就致力于开发能将生物芯片变为现实的点样制作系统，并得到生物芯片技术的开创者M
pEGFP-IRF3-m（1同义突变）小鼠基因质粒
￥100 - 1000
