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- Xybio
- 上海
- P0509
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
USP22
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pLenti-TagRFP-USP22-sgRNA1人源基因引导质粒
别称: USP22
启动子：U6
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒
原核抗性: Amp
筛选标记：Puro
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞,慢病毒
载体用途：基因敲除
基因种属：人
基因类型：CRISPR
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光蛋白：红色
质粒简介
pLenti-TagRFP-USP22-sgRNA1质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4075/pCMV-SPORT6-NLRP1人源基因质粒 |
| P4076/pCMV-SPORT6-RFK人源基因质粒 |
| P4077/pCMV-SPORT6-CXCL1人源基因质粒 |
| P4078/pCMV-SPORT6-RPL35A人源基因质粒 |
| P4079/pCMV-SPORT6-CRADD人源基因质粒 |
| P4080/pCMV-SPORT6-CCDC127人源基因质粒 |
| P4081/pCMV-SPORT6-CIDEC（5-756bp1同义突变）人源基因质粒 |
| P4082/pCMV-SPORT6-SSSCA1人源基因质粒 |
| P4083/pCMV-SPORT6-AGR2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4084/pCMV-SPORT6-TRIM31人源基因质粒 |
| P4085/pCMV-SPORT6-C12orf65人源基因质粒 |
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文献和实验。CRISPR/Cas9 属于 II 类，仅需要成熟的 crRNA(CRISPR-derivedRNA)、tracrRNA(trans-activatingRNA) 和 Cas9 蛋白就能实现对外源 DNA 的切割。经人工改造的 CRISPR/Cas9 系统主要由引导 RNA(singleguideRNA，sgRNA) 和 Cas9 蛋白结构域组成。其中，sgRNA 起精确定位作用，其 5′端前 20 个核苷酸碱基决定 Cas9 蛋白特异性切割基因组 DNA 的部位;Cas9 蛋白包含类 HNH 核酸
病，其中 1 名儿童死于化疗难治性白血病。 在另一场悲剧中，一名患有鸟氨酸转氨甲酰酶（OTC）部分缺乏症的 18 岁男性在接受治疗四小时后，对腺病毒载体产生了大规模的炎症反应而死亡，这两个悲剧都源于治疗性递送方法。所以，CRISPR/Cas 系统的递送方法的选择对于基因治疗十分重要。 CRISPR / Cas9 系统包装通常采用三种方法：（1）同时编码 Cas9 蛋白和 sgRNA 的 DNA 质粒，（2）用于 Cas9 翻译的 mRNA 和单独的 sg RNA,（3）Cas9 蛋白和 sgRNA（核糖核蛋白
2—3d)，仅需设计、合成靶点识别序列，且也只需将 sgRNA 串联就能实现多基因编辑;但 CRISPR/Cas 系统的特异性稍差，存在较明显的脱靶效应，另受 PAM 识别位点限制。目前，ZFNs 已基本被 TALENs 和 CRISPR/Cas 系统所取代，而 TALENs 在植物基因组编辑中也已逐渐失去优势。因此，在作物遗传改良上，优先推荐使用 CRISPR/Cas 系统，如 CRISPR/Cas 系统无合适的靶位点或对特异性要求极高的情况下可使用 TALENs 技术。1.2 基因敲除还是基因
