pECMV-CCNL2-3×FLAG人源基因质粒

基本信息
名称：pECMV-CCNL2-3×FLAG人源基因质粒
别称: CCNM;PCEE;SB138;ANIA-6B;HLA-ISO;HCLA
启动子：CMV
复制子: pUC
终止子:  bGH poly(A) signal
质粒大小：7043bp
质粒标签：C-3×FLAG
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
备注:      NM_030937.5

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
 pECMV-CCNL2-3×FLAG质粒是一个哺乳细胞过表达质粒，CMV启动子驱动CCNL2人源基因和3×FLAG标签融合表达。
质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                7043 bp ds-DNA     circular SYN 24-OCT-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pECMV-CCNL2-3×FLAG
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 7043)
  TITLE     Direct Submission
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7043
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     regulatory      935..944
                     /regulatory_class="other"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     misc_feature    941..2500
                     /label=CCNL2
     CDS             2540..2605
                     /codon_start=1
                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
                     enterokinase cleavage site"
                     /label=3xFLAG
                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
     polyA_signal    2643..2867
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      2913..3341
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        3355..3684
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      3535..3670
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             3751..4545
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=NeoR/KanR
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    4719..4840
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(5291..5876)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(6047..6907)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(6908..7012)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
      901 gtttaaactt aagcttggta ccgagctcgg atccgccacc atggcggcgg cggcggcggc
      961 ggctggtgct gcagggtcgg cagctcccgc ggcagcggcc ggcgccccgg gatctggggg
     1021 cgcaccctca gggtcgcagg gggtgctgat cggggacagg ctgtactccg gggtgctcat
     1081 caccttggag aactgcctcc tgcctgacga caagctccgt ttcacgccgt ccatgtcgag
     1141 cggcctcgac accgacacag agaccgacct ccgcgtggtg ggctgcgagc tcatccaggc
     1201 ggccggtatc ctgctccgcc tgccgcaggt ggccatggct accgggcagg tgttgttcca
     1261 gcggttcttt tataccaagt ccttcgtgaa gcactccatg gagcatgtgt caatggcctg
     1321 tgtccacctg gcttccaaga tagaagaggc cccaagacgc atacgggacg tcatcaatgt
     1381 gtttcaccgc cttcgacagc tgagagacaa aaagaagccc gtgcctctac tactggatca
     1441 agattatgtt aatttaaaga accaaattat aaaggcggaa agacgagttc tcaaagagtt
     1501 gggtttctgc gtccatgtga agcatcctca taagataatc gttatgtacc ttcaggtgtt
     1561 agagtgtgag cgtaaccaac acctggtcca gacctcatgg aattacatga acgacagcct
     1621 tcgcaccgac gtcttcgtgc ggttccagcc agagagcatc gcctgtgcct gcatttatct
     1681 tgctgcccgg acgctggaga tccctttgcc caatcgtccc cattggtttc ttttgtttgg
     1741 agcaactgaa gaagaaattc aggaaatctg cttaaagatc ttgcagcttt atgctcggaa
     1801 aaaggttgat ctcacacacc tggagggtga agtggaaaaa agaaagcacg ctatcgaaga
     1861 ggcaaaggcc caagcccggg gcctgttgcc tgggggcaca caggtgctgg atggtacctc
     1921 ggggttctct cctgccccca agctggtgga atcccccaaa gaaggtaaag ggagcaagcc
     1981 ttccccactg tctgtgaaga acaccaagag gaggctggag ggcgccaaga aagccaaggc
     2041 ggacagcccc gtgaacggct tgccaaaggg gcgagagagt cggagtcgga gccggagccg
     2101 tgagcagagc tactcgaggt ccccatcccg atcagcgtct cctaagagga ggaaaagtga
     2161 cagcggctcc acatctggtg ggtccaagtc gcagagccgc tcccggagca ggagtgactc
     2221 cccaccgaga caggcccccc gcagcgctcc ctacaaaggc tctgagattc ggggctcccg
     2281 gaagtccaag gactgcaagt acccccagaa gccacacaag tctcggagcc ggagttcttc
     2341 ccgttctcga agcaggtcac gggagcgggc ggataatccg ggaaaataca agaagaaaag
     2401 tcattactac agagatcagc gacgagagcg ctcgaggtcg tatgaacgca caggccgtcg
     2461 ctatgagcgg gaccaccctg ggcacagcag gcatcggagg gaattctgca gatatccagc
     2521 acagtggcgg ccgctcgagg actacaaaga ccatgacggt gattataaag atcatgacat
     2581 cgactacaag gatgacgatg acaagtagtg agggcccgtt taaacccgct gatcagcctc
     2641 gactgtgcct tctagttgcc agccatctgt tgtttgcccc tcccccgtgc cttccttgac
     2701 cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc ctaataaaat gaggaaattg catcgcattg
     2761 tctgagtagg tgtcattcta ttctgggggg tggggtgggg caggacagca agggggagga
     2821 ttgggaagac aatagcaggc atgctgggga tgcggtgggc tctatggctt ctgaggcgga
     2881 aagaaccagc tggggctcta gggggtatcc ccacgcgccc tgtagcggcg cattaagcgc
     2941 ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt gccagcgccc tagcgcccgc
     3001 tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc ggctttcccc gtcaagctct
     3061 aaatcggggg ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta cggcacctcg accccaaaaa
     3121 acttgattag ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc tgatagacgg tttttcgccc
     3181 tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag tggactcttg ttccaaactg gaacaacact
     3241 caaccctatc tcggtctatt cttttgattt ataagggatt ttgccgattt cggcctattg
     3301 gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat taattctgtg gaatgtgtgt
     3361 cagttagggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat
     3421 ctcaattagt cagcaaccag gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg
     3481 caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc atagtcccgc ccctaactcc gcccatcccg
     3541 cccctaactc cgcccagttc cgcccattct ccgccccatg gctgactaat tttttttatt
     3601 tatgcagagg ccgaggccgc ctctgcctct gagctattcc agaagtagtg aggaggcttt
     3661 tttggaggcc taggcttttg caaaaagctc ccgggagctt gtatatccat tttcggatct
     3721 gatcaagaga caggatgagg atcgtttcgc atgattgaac aagatggatt gcacgcaggt
     3781 tctccggccg cttgggtgga gaggctattc ggctatgact gggcacaaca gacaatcggc
     3841 tgctctgatg ccgccgtgtt ccggctgtca gcgcaggggc gcccggttct ttttgtcaag
     3901 accgacctgt ccggtgccct gaatgaactg caggacgagg cagcgcggct atcgtggctg
     3961 gccacgacgg gcgttccttg cgcagctgtg ctcgacgttg tcactgaagc gggaagggac
     4021 tggctgctat tgggcgaagt gccggggcag gatctcctgt catctcacct tgctcctgcc
     4081 gagaaagtat ccatcatggc tgatgcaatg cggcggctgc atacgcttga tccggctacc
     4141 tgcccattcg accaccaagc gaaacatcgc atcgagcgag cacgtactcg gatggaagcc
     4201 ggtcttgtcg atcaggatga tctggacgaa gagcatcagg ggctcgcgcc agccgaactg
     4261 ttcgccaggc tcaaggcgcg catgcccgac ggcgaggatc tcgtcgtgac ccatggcgat
     4321 gcctgcttgc cgaatatcat ggtggaaaat ggccgctttt ctggattcat cgactgtggc
     4381 cggctgggtg tggcggaccg ctatcaggac atagcgttgg ctacccgtga tattgctgaa
     4441 gagcttggcg gcgaatgggc tgaccgcttc ctcgtgcttt acggtatcgc cgctcccgat
     4501 tcgcagcgca tcgccttcta tcgccttctt gacgagttct tctgagcggg actctggggt
     4561 tcgaaatgac cgaccaagcg acgcccaacc tgccatcacg agatttcgat tccaccgccg
     4621 ccttctatga aaggttgggc ttcggaatcg ttttccggga cgccggctgg atgatcctcc
     4681 agcgcgggga tctcatgctg gagttcttcg cccaccccaa cttgtttatt gcagcttata
     4741 atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc
     4801 attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta tcatgtctgt ataccgtcga
     4861 cctctagcta gagcttggcg taatcatggt catagctgtt tcctgtgtga aattgttatc
     4921 cgctcacaat tccacacaac atacgagccg gaagcataaa gtgtaaagcc tggggtgcct
     4981 aatgagtgag ctaactcaca ttaattgcgt tgcgctcact gcccgctttc cagtcgggaa
     5041 acctgtcgtg ccagctgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta
     5101 ttgggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc
     5161 gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca ggggataacg
     5221 caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt
     5281 tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa
     5341 gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct
     5401 ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc
     5461 cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg
     5521 tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct
     5581 tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag
     5641 cagccactgg taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga
     5701 agtggtggcc taactacggc tacactagaa gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga
     5761 agccagttac cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg
     5821 gtagcggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag
     5881 atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga
     5941 ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa
     6001 gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa
     6061 tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc
     6121 ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga
     6181 taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa
     6241 gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt
     6301 gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg
     6361 ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc
     6421 aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg
     6481 gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag
     6541 cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt
     6601 actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt
     6661 caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac
     6721 gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac
     6781 ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag
     6841 caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa
     6901 tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga
     6961 gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc
     7021 cccgaaaagt gccacctgac gtc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0052/pCDFDuet-1大肠双表达质粒

P0430/pCOLADuet-1大肠双表达质粒

P0367/pBV220大肠表达质粒

P0867/pBV221大肠表达质粒

P0484/pG-KJE8大肠伴侣质粒

P0485/pG-Tf2大肠伴侣质粒

P0486/pGro7大肠伴侣质粒

P0487/pKJE7大肠伴侣质粒

P0488/pTf16大肠伴侣质粒

P1111/pDawn光遗传学质粒

P0085/pTXB1大肠表达质粒

P0348/pTYB1大肠表达质粒