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- 详细信息
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_001042771.2LSK;YT16;p56lck;pp58lc
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pECMV-3×FLAG-LCK人源基因质粒
别称: NM_001042771.2LSK;YT16;p56lck;pp58lc
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pECMV-3×FLAG-LCK(NM_001042771.2)是一个人源基因哺乳细胞过表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7009 bp ds-DNA circular SYN 23-NOV-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7009
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 235..614
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
regulatory 913..922
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 922..987
/codon_start=1
/product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
/label=3xFLAG
/translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
CDS 997..2526
/codon_start=1
/product="Homo sapiens LCK proto-oncogene, Src family
tyrosine kinase (LCK), transcript variant 1, mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_001042771.2"
/label=LCK
/translation="MGCGCSSHPEDDWMENIDVCENCHYPIVPLDGKGTLLIRNGSEVR
DPLVTYEGSNPPASPLQDNLVIALHSYEPSHDGDLGFEKGEQLRILEQSGEWWKAQSLT
TGQEGFIPFNFVAKANSLEPEPWFFKNLSRKDAERQLLAPGNTHGSFLIRESESTAGSF
SLSVRDFDQNQGEVVKHYKIRNLDNGGFYISPRITFPGLHELVRHYTNASDGLCTRLSR
PCQTQKPQKPWWEDEWEVPRETLKLVERLGAGQFGEVWMGYYNGHTKVAVKSLKQGSMS
PDAFLAEANLMKQLQHQRLVRLYAVVTQEPIYIITEYMENGSLVDFLKTPSGIKLTINK
LLDM-AAQIAEGMAFIEERNYIHRDLRAANILVSDTLSCKIADFGLARLIEDNEYTAREG
AKFPIKWTAPEAINYGTFTIKSDVWSFGILLTEIVTHGRIPYPGMTNPEVIQNLERGYR
MVRPDNCPEELYQLMRLCWKERPEDRPTFDYLRSVLEDFFTATEGQYQPQP"
polyA_signal 2609..2833
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 2879..3307
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3321..3650
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3501..3636
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3717..4511
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4685..4806
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(5257..5842)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6013..6873)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(6874..6978)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccatgg gctgtggctg cagctcacac
1021 ccggaagatg actggatgga aaacatcgat gtgtgtgaga actgccatta tcccatagtc
1081 ccactggatg gcaagggcac gctgctcatc cgaaatggct ctgaggtgcg ggacccactg
1141 gttacctacg aaggctccaa tccgccggct tccccactgc aagacaacct ggttatcgct
1201 ctgcacagct atgagccctc tcacgacgga gatctgggct ttgagaaggg ggaacagctc
1261 cgcatcctgg agcagagcgg cgagtggtgg aaggcgcagt ccctgaccac gggccaggaa
1321 ggcttcatcc ccttcaattt tgtggccaaa gcgaacagcc tggagcccga accctggttc
1381 ttcaagaacc tgagccgcaa ggacgcggag cggcagctcc tggcgcccgg gaacactcac
1441 ggctccttcc tcatccggga gagcgagagc accgcgggat cgttttcact gtcggtccgg
1501 gacttcgacc agaaccaggg agaggtggtg aaacattaca agatccgtaa tctggacaac
1561 ggtggcttct acatctcccc tcgaatcact tttcccggcc tgcatgaact ggtccgccat
1621 tacaccaatg cttcagatgg gctgtgcaca cggttgagcc gcccctgcca gacccagaag
1681 ccccagaagc cgtggtggga ggacgagtgg gaggttccca gggagacgct gaagctggtg
1741 gagcggctgg gggctggaca gttcggggag gtgtggatgg ggtactacaa cgggcacacg
1801 aaggtggcgg tgaagagcct gaagcagggc agcatgtccc cggacgcctt cctggccgag
1861 gccaacctca tgaagcagct gcaacaccag cggctggttc ggctctacgc tgtggtcacc
1921 caggagccca tctacatcat cactgaatac atggagaatg ggagtctagt ggattttctc
1981 aagacccctt caggcatcaa gttgaccatc aacaaactcc tggacatggc agcccaaatt
2041 gcagaaggca tggcattcat tgaagagcgg aattatattc atcgtgacct tcgggctgcc
2101 aacattctgg tgtctgacac cctgagctgc aagattgcag actttggcct agcacgcctc
2161 attgaggaca acgagtacac agccagggag ggggccaagt ttcccattaa gtggacagcg
2221 ccagaagcca ttaactacgg gacattcacc atcaagtcag atgtgtggtc ttttgggatc
2281 ctgctgacgg aaattgtcac ccacggccgc atcccttacc cagggatgac caacccggag
2341 gtgattcaga acctggagcg aggctaccgc atggtgcgcc ctgacaactg tccagaggag
2401 ctgtaccaac tcatgaggct gtgctggaag gagcgcccag aggaccggcc cacctttgac
2461 tacctgcgca gtgtgctgga ggacttcttc acggccacag agggccagta ccagcctcag
2521 ccttgatttt ttgaattctg cagatatcca gcacagtggc ggccgctcga gtctagaggg
2581 cccgtttaaa cccgctgatc agcctcgact gtgccttcta gttgccagcc atctgttgtt
2641 tgcccctccc ccgtgccttc cttgaccctg gaaggtgcca ctcccactgt cctttcctaa
2701 taaaatgagg aaattgcatc gcattgtctg agtaggtgtc attctattct ggggggtggg
2761 gtggggcagg acagcaaggg ggaggattgg gaagacaata gcaggcatgc tggggatgcg
2821 gtgggctcta tggcttctga ggcggaaaga accagctggg gctctagggg gtatccccac
2881 gcgccctgta gcggcgcatt aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag cgtgaccgct
2941 acacttgcca gcgccctagc gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt tctcgccacg
3001 ttcgccggct ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt ccgatttagt
3061 gctttacggc acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg tagtgggcca
3121 tcgccctgat agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt taatagtgga
3181 ctcttgttcc aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt tgatttataa
3241 gggattttgc cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaac
3301 gcgaattaat tctgtggaat gtgtgtcagt tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag
3361 caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc
3421 caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccatag
3481 tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc cattctccgc
3541 cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga ggccgcctct gcctctgagc
3601 tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa aagctcccgg
3661 gagcttgtat atccattttc ggatctgatc aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga
3721 ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct
3781 atgactgggc acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc
3841 aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat gaactgcagg
3901 acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg
3961 acgttgtcac tgaagcggga agggactggc tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc
4021 tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat catggctgat gcaatgcggc
4081 ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg
4141 agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc
4201 atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa ggcgcgcatg cccgacggcg
4261 aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc
4321 gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag
4381 cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg
4441 tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg
4501 agttcttctg agcgggactc tggggttcga aatgaccgac caagcgacgc ccaacctgcc
4561 atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt
4621 ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg cggggatctc atgctggagt tcttcgccca
4681 ccccaacttg tttattgcag cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt
4741 cacaaataaa gcattttttt cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt
4801 atcttatcat gtctgtatac cgtcgacctc tagctagagc ttggcgtaat catggtcata
4861 gctgtttcct gtgtgaaatt gttatccgct cacaattcca cacaacatac gagccggaag
4921 cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg
4981 ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca
5041 acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc
5101 gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg
5161 gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa
5221 ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga
5281 cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag
5341 ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct
5401 taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg
5461 ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc
5521 ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt
5581 aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta
5641 tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac
5701 agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc
5761 ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag cggttttttt gtttgcaagc agcagattac
5821 gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca
5881 gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac
5941 ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac
6001 ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt
6061 tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt
6121 accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt
6181 atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc
6241 cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa
6301 tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg
6361 tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt
6421 gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc
6481 agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt
6541 aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg
6601 gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac
6661 tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc
6721 gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt
6781 tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg
6841 aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc ctttttcaat attattgaag
6901 catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa
6961 acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgacgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pECMV-3×FLAG-LCK人源基因质粒
别称: NM_001042771.2LSK;YT16;p56lck;pp58lc
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pECMV-3×FLAG-LCK(NM_001042771.2)是一个人源基因哺乳细胞过表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7009 bp ds-DNA circular SYN 23-NOV-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7009
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enhancer 235..614
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/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
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/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
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/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
regulatory 913..922
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of translation (Kozak, 1987)"
CDS 922..987
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/product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
/label=3xFLAG
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CDS 997..2526
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/product="Homo sapiens LCK proto-oncogene, Src family
tyrosine kinase (LCK), transcript variant 1, mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_001042771.2"
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indicates direction of (+) strand synthesis"
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replication"
CDS complement(6013..6873)
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related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
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ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccatgg gctgtggctg cagctcacac
1021 ccggaagatg actggatgga aaacatcgat gtgtgtgaga actgccatta tcccatagtc
1081 ccactggatg gcaagggcac gctgctcatc cgaaatggct ctgaggtgcg ggacccactg
1141 gttacctacg aaggctccaa tccgccggct tccccactgc aagacaacct ggttatcgct
1201 ctgcacagct atgagccctc tcacgacgga gatctgggct ttgagaaggg ggaacagctc
1261 cgcatcctgg agcagagcgg cgagtggtgg aaggcgcagt ccctgaccac gggccaggaa
1321 ggcttcatcc ccttcaattt tgtggccaaa gcgaacagcc tggagcccga accctggttc
1381 ttcaagaacc tgagccgcaa ggacgcggag cggcagctcc tggcgcccgg gaacactcac
1441 ggctccttcc tcatccggga gagcgagagc accgcgggat cgttttcact gtcggtccgg
1501 gacttcgacc agaaccaggg agaggtggtg aaacattaca agatccgtaa tctggacaac
1561 ggtggcttct acatctcccc tcgaatcact tttcccggcc tgcatgaact ggtccgccat
1621 tacaccaatg cttcagatgg gctgtgcaca cggttgagcc gcccctgcca gacccagaag
1681 ccccagaagc cgtggtggga ggacgagtgg gaggttccca gggagacgct gaagctggtg
1741 gagcggctgg gggctggaca gttcggggag gtgtggatgg ggtactacaa cgggcacacg
1801 aaggtggcgg tgaagagcct gaagcagggc agcatgtccc cggacgcctt cctggccgag
1861 gccaacctca tgaagcagct gcaacaccag cggctggttc ggctctacgc tgtggtcacc
1921 caggagccca tctacatcat cactgaatac atggagaatg ggagtctagt ggattttctc
1981 aagacccctt caggcatcaa gttgaccatc aacaaactcc tggacatggc agcccaaatt
2041 gcagaaggca tggcattcat tgaagagcgg aattatattc atcgtgacct tcgggctgcc
2101 aacattctgg tgtctgacac cctgagctgc aagattgcag actttggcct agcacgcctc
2161 attgaggaca acgagtacac agccagggag ggggccaagt ttcccattaa gtggacagcg
2221 ccagaagcca ttaactacgg gacattcacc atcaagtcag atgtgtggtc ttttgggatc
2281 ctgctgacgg aaattgtcac ccacggccgc atcccttacc cagggatgac caacccggag
2341 gtgattcaga acctggagcg aggctaccgc atggtgcgcc ctgacaactg tccagaggag
2401 ctgtaccaac tcatgaggct gtgctggaag gagcgcccag aggaccggcc cacctttgac
2461 tacctgcgca gtgtgctgga ggacttcttc acggccacag agggccagta ccagcctcag
2521 ccttgatttt ttgaattctg cagatatcca gcacagtggc ggccgctcga gtctagaggg
2581 cccgtttaaa cccgctgatc agcctcgact gtgccttcta gttgccagcc atctgttgtt
2641 tgcccctccc ccgtgccttc cttgaccctg gaaggtgcca ctcccactgt cctttcctaa
2701 taaaatgagg aaattgcatc gcattgtctg agtaggtgtc attctattct ggggggtggg
2761 gtggggcagg acagcaaggg ggaggattgg gaagacaata gcaggcatgc tggggatgcg
2821 gtgggctcta tggcttctga ggcggaaaga accagctggg gctctagggg gtatccccac
2881 gcgccctgta gcggcgcatt aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag cgtgaccgct
2941 acacttgcca gcgccctagc gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt tctcgccacg
3001 ttcgccggct ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt ccgatttagt
3061 gctttacggc acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg tagtgggcca
3121 tcgccctgat agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt taatagtgga
3181 ctcttgttcc aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt tgatttataa
3241 gggattttgc cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaac
3301 gcgaattaat tctgtggaat gtgtgtcagt tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag
3361 caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc
3421 caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccatag
3481 tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc cattctccgc
3541 cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga ggccgcctct gcctctgagc
3601 tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa aagctcccgg
3661 gagcttgtat atccattttc ggatctgatc aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga
3721 ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct
3781 atgactgggc acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc
3841 aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat gaactgcagg
3901 acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg
3961 acgttgtcac tgaagcggga agggactggc tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc
4021 tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat catggctgat gcaatgcggc
4081 ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg
4141 agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc
4201 atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa ggcgcgcatg cccgacggcg
4261 aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc
4321 gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag
4381 cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg
4441 tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg
4501 agttcttctg agcgggactc tggggttcga aatgaccgac caagcgacgc ccaacctgcc
4561 atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt
4621 ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg cggggatctc atgctggagt tcttcgccca
4681 ccccaacttg tttattgcag cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt
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4921 cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg
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5101 gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg
5161 gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa
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5281 cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag
5341 ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct
5401 taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg
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6301 tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg
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6421 gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc
6481 agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt
6541 aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
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