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- 上海
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- 2026年03月24日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_001145102.1;LDS3; LDS1C; MADH3; J
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pECMV-3×FLAG-SMAD3人源基因质粒
别称: NM_001145102.1;LDS3; LDS1C; MADH3; J
启动子：CMV
复制子: pUC
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列
OCUS Exported 6415 bp ds-DNA circular SYN 28-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6415)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 28, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6415
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 235..614
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
primer_bind 863..882
/label=T7
promoter 863..881
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 922..987
/codon_start=1
/product="three tandem FLAG epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
/label=3xFLAG
/translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
CDS 1009..1971
/codon_start=1
/label=Smad3
/translation="MELCEFAFNMKKDEVCVNPYHYQRVETPVLPPVLVPRHTEIPAEF
PPLDDYSHSIPENTNFPAGIEPQSNIPETPPPGYLSEDGETSDHQMNHSMDAGSPNLSP
NPMSPAHNNLDLQPVTYCEPAFWCSISYYELNQRVGETFHASQPSMTVDGFTDPSNSER
FCLGLLSNVNRNAAVELTRRHIGRGVRLYYIGGEVFAECLS-DSAIFVQSPNCNQRYGWH
PATVCKIPPGCNLKIFNNQEFAALLAQSVNQGFEAVYQLTRMCTIRMSFVKGWGAEYRR
QTVTS-TPCWIELHLNGPLQWLDKVLTQMGSPSIRCSSVS"
primer_bind complement(2009..2026)
/label=BGH
polyA_signal 2015..2239
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 2285..2713
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2727..3056
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2907..3042
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3123..3917
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin)"
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VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
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LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4091..4212
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
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/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5419..6279)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(6280..6384)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccgagc tcggatccat ggagctgtgt
1021 gagttcgcct tcaatatgaa gaaggacgag gtctgcgtga atccctacca ctaccagaga
1081 gtagagacac cagttctacc tcctgtgttg gtgccacgcc acacagagat cccggccgag
1141 ttccccccac tggacgacta cagccattcc atccccgaaa acactaactt ccccgcaggc
1201 atcgagcccc agagcaatat tccagagacc ccaccccctg gctacctgag tgaagatgga
1261 gaaaccagtg accaccagat gaaccacagc atggacgcag gttctccaaa cctatccccg
1321 aatccgatgt ccccagcaca taataacttg gacctgcagc cagttaccta ctgcgagccg
1381 gccttctggt gctccatctc ctactacgag ctgaaccagc gcgtcgggga gacattccac
1441 gcctcgcagc catccatgac tgtggatggc ttcaccgacc cctccaattc ggagcgcttc
1501 tgcctagggc tgctctccaa tgtcaacagg aatgcagcag tggagctgac acggagacac
1561 atcggaagag gcgtgcggct ctactacatc ggaggggagg tcttcgcaga gtgcctcagt
1621 gacagcgcta tttttgtcca gtctcccaac tgtaaccagc gctatggctg gcacccggcc
1681 accgtctgca agatcccacc aggatgcaac ctgaagatct tcaacaacca ggagttcgct
1741 gccctcctgg cccagtcggt caaccagggc tttgaggctg tctaccagtt gacccgaatg
1801 tgcaccatcc gcatgagctt cgtcaaaggc tggggagcgg agtacaggag acagactgtg
1861 accagtaccc cctgctggat tgagctgcac ctgaatgggc ctttgcagtg gcttgacaag
1921 gtcctcaccc agatgggctc cccaagcatc cgctgttcca gtgtgtctta gctcgagtct
1981 agagggcccg tttaaacccg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct
2041 gttgtttgcc cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt
2101 tcctaataaa atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg
2161 ggtggggtgg ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg
2221 gatgcggtgg gctctatggc ttctgaggcg gaaagaacca gctggggctc tagggggtat
2281 ccccacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg
2341 accgctacac ttgccagcgc cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc
2401 gccacgttcg ccggctttcc ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga
2461 tttagtgctt tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt
2521 gggccatcgc cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat
2581 agtggactct tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat
2641 ttataaggga ttttgccgat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa
2701 tttaacgcga attaattctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct
2761 ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa
2821 agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa
2881 ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt
2941 ctccgcccca tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctctgcct
3001 ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc
3061 tcccgggagc ttgtatatcc attttcggat ctgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc
3121 gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat
3181 tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt
3241 cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac
3301 tgcaggacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg
3361 tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc
3421 aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa
3481 tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc
3541 gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg
3601 aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg cgcatgcccg
3661 acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa
3721 atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg
3781 acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct
3841 tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc
3901 ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa
3961 cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat
4021 cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt
4081 cgcccacccc aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac
4141 aaatttcaca aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat
4201 caatgtatct tatcatgtct gtataccgtc gacctctagc tagagcttgg cgtaatcatg
4261 gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc
4321 cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc
4381 gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat
4441 cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac
4501 tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt
4561 aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca
4621 gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc
4681 ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact
4741 ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct
4801 gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag
4861 ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca
4921 cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa
4981 cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc
5041 gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag
5101 aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg
5161 tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ttttttgttt gcaagcagca
5221 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
5281 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
5341 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
5401 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
5461 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga
5521 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
5581 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac
5641 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
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5881 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
5941 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
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6121 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc
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6301 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
6361 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pECMV-3×FLAG-SMAD3人源基因质粒
别称: NM_001145102.1;LDS3; LDS1C; MADH3; J
启动子：CMV
复制子: pUC
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列
OCUS Exported 6415 bp ds-DNA circular SYN 28-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6415)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 28, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6415
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CDS 3123..3917
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ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
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301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
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661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccgagc tcggatccat ggagctgtgt
1021 gagttcgcct tcaatatgaa gaaggacgag gtctgcgtga atccctacca ctaccagaga
1081 gtagagacac cagttctacc tcctgtgttg gtgccacgcc acacagagat cccggccgag
1141 ttccccccac tggacgacta cagccattcc atccccgaaa acactaactt ccccgcaggc
1201 atcgagcccc agagcaatat tccagagacc ccaccccctg gctacctgag tgaagatgga
1261 gaaaccagtg accaccagat gaaccacagc atggacgcag gttctccaaa cctatccccg
1321 aatccgatgt ccccagcaca taataacttg gacctgcagc cagttaccta ctgcgagccg
1381 gccttctggt gctccatctc ctactacgag ctgaaccagc gcgtcgggga gacattccac
1441 gcctcgcagc catccatgac tgtggatggc ttcaccgacc cctccaattc ggagcgcttc
1501 tgcctagggc tgctctccaa tgtcaacagg aatgcagcag tggagctgac acggagacac
1561 atcggaagag gcgtgcggct ctactacatc ggaggggagg tcttcgcaga gtgcctcagt
1621 gacagcgcta tttttgtcca gtctcccaac tgtaaccagc gctatggctg gcacccggcc
1681 accgtctgca agatcccacc aggatgcaac ctgaagatct tcaacaacca ggagttcgct
1741 gccctcctgg cccagtcggt caaccagggc tttgaggctg tctaccagtt gacccgaatg
1801 tgcaccatcc gcatgagctt cgtcaaaggc tggggagcgg agtacaggag acagactgtg
1861 accagtaccc cctgctggat tgagctgcac ctgaatgggc ctttgcagtg gcttgacaag
1921 gtcctcaccc agatgggctc cccaagcatc cgctgttcca gtgtgtctta gctcgagtct
1981 agagggcccg tttaaacccg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct
2041 gttgtttgcc cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt
2101 tcctaataaa atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg
2161 ggtggggtgg ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg
2221 gatgcggtgg gctctatggc ttctgaggcg gaaagaacca gctggggctc tagggggtat
2281 ccccacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg
2341 accgctacac ttgccagcgc cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc
2401 gccacgttcg ccggctttcc ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga
2461 tttagtgctt tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt
2521 gggccatcgc cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat
2581 agtggactct tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat
2641 ttataaggga ttttgccgat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa
2701 tttaacgcga attaattctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct
2761 ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa
2821 agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa
2881 ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt
2941 ctccgcccca tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctctgcct
3001 ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc
3061 tcccgggagc ttgtatatcc attttcggat ctgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc
3121 gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat
3181 tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt
3241 cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac
3301 tgcaggacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg
3361 tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc
3421 aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa
3481 tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc
3541 gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg
3601 aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg cgcatgcccg
3661 acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa
3721 atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg
3781 acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct
3841 tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc
3901 ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa
3961 cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat
4021 cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt
4081 cgcccacccc aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac
4141 aaatttcaca aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat
4201 caatgtatct tatcatgtct gtataccgtc gacctctagc tagagcttgg cgtaatcatg
4261 gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc
4321 cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc
4381 gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat
4441 cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac
4501 tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt
4561 aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca
4621 gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc
4681 ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact
4741 ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct
4801 gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag
4861 ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca
4921 cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa
4981 cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc
5041 gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag
5101 aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg
5161 tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ttttttgttt gcaagcagca
5221 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
5281 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
5341 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
5401 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
5461 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga
5521 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
5581 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac
5641 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
5701 agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc
5761 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc
5821 catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt
5881 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
5941 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
6001 tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag
6061 cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat
6121 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc
6181 atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa
6241 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta
6301 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
6361 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4534/pWM91质粒菌种 |
| P0102/pJQ200SK大肠自杀质粒菌种 |
| P4535/pJQ200SK质粒菌种 |
| P0103/pDM4大肠自杀质粒菌种 |
| P3830/pDM4质粒菌种 |
| P0391/pSUP202大肠自杀质粒 |
| P3832/pSUP202质粒菌种 |
| P1702/pRE112大肠自杀质粒 |
| P3221/pRE112/SM10 λpir质粒菌种 |
| P1908/pEX18TC大肠自杀质粒 |
| P0663/pEX18GM大肠自杀质粒菌种 |
| P4536/pEX18GM质粒菌种 |
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文献和实验相关实验
入 DMSO 或 2-巯基乙醇，混合后加入 L 连接反应液 (含重组质粒)，温和混匀，置冰上 30 min；2. 42 ℃ 水浴 45 秒，然后迅速放回冰中 1～2 min；3. 加入 2 mL LB 培养液，37 ℃ 轻摇荡培养 1 h；4. 4,000×g 离心 10 秒钟，弃上清，用 LB 培养液重悬菌体；5. 将菌液铺于含有适当抗生素的 LB 琼脂培养板上，涂匀，室温放置 20～30 min，倒置于 37 ℃ 孵箱中培养 12～16 h。（三）转化细胞的筛选【实验原理】1、 蓝白筛选:以 TA
毒载体。 2.慢病毒包装与纯化 慢病毒包装采用三质粒或四质粒系统进行包装，收集细胞培养上清，通过超速离心浓缩纯化和收集病毒。 3.慢病毒滴度检测 检测方法：定量PCR检测干扰后细胞基因组中外源DNA拷贝数 实验原理：慢病毒介导外源基因以逆转录方式整合进目的细胞基因组 4.慢病毒载体优势 ① 表达时间长：慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上，实现基因长时间稳定的表达，不随细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选，常用于构建稳转株 ② 安全性高：未发现致病性，慢病毒载体改造T细胞用于CAR-T
良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。 慢病毒转染优点：1.外源基因表达水平较高、表达稳定；2.转染效率高，可感染分裂和不分裂的细胞，几乎可以感染所有类型的细胞，特别适合质粒载体转染效率低的细胞；3.慢病毒基因容易操作，易于制备大量病毒且滴度高；4.病毒基因组可整合到细胞基因组，易于构建稳定细胞株。 慢病毒包装技术：慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。将外源基因克隆进入表达载体，同时与包装质粒（表达病毒包装所需辅助蛋白）一起转染
pECMV-3×FLAG-SMAD3人源基因质粒
￥100 - 1000
