pFUPI-UbC-TRIM5-CypA人源基因质粒

基本信息
名称：pFUPI-UbC-TRIM5-CypA人源基因质粒
别称: Plasmid #80282;pFUPI-UbC-TRIM5-CypA;
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光蛋白：

质粒简介：详询
 

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                6630 bp ds-DNA     circular SYN 10-OCT-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6630)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6630
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     CDS             904..930
                     /codon_start=1
                     /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                     /label=HA
                     /translation="YPYDVPDYA"
     misc_feature    943..2121
                     /label=P53
                     /note="NM_000546.5"
     promoter        complement(2182..2200)
                     /label=SP6 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
     polyA_signal    2226..2450
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      2496..2924
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2938..3268
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      3119..3254
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             3335..4129
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    4303..4424
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(4875..5463)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(5634..6494)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(6495..6599)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtcgactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gcttaccatg
      901 gcctacccct acgacgtgcc cgactacgcc tccctcggat ccgaggagcc gcagtcagat
      961 cctagcgtcg agccccctct gagtcaggaa acattttcag acctatggaa actacttcct
     1021 gaaaacaacg ttctgtcccc cttgccgtcc caagcaatgg atgatttgat gctgtccccg
     1081 gacgatattg aacaatggtt cactgaagac ccaggtccag atgaagctcc cagaatgcca
     1141 gaggctgctc cccccgtggc ccctgcacca gcagctccta caccggcggc ccctgcacca
     1201 gccccctcct ggcccctgtc atcttctgtc ccttcccaga aaacctacca gggcagctac
     1261 ggtttccgtc tgggcttctt gcattctggg acagccaagt ctgtgacttg cacgtactcc
     1321 cctgccctca acaagatgtt ttgccaactg gccaagacct gccctgtgca gctgtgggtt
     1381 gattccacac ccccgcccgg cacccgcgtc cgcgccatgg ccatctacaa gcagtcacag
     1441 cacatgacgg aggttgtgag gcgctgcccc caccatgagc gctgctcaga tagcgatggt
     1501 ctggcccctc ctcagcatct tatccgagtg gaaggaaatt tgcgtgtgga gtatttggat
     1561 gacagaaaca cttttcgaca tagtgtggtg gtgccctatg agccgcctga ggttggctct
     1621 gactgtacca ccatccacta caactacatg tgtaacagtt cctgcatggg cggcatgaac
     1681 cggaggccca tcctcaccat catcacactg gaagactcca gtggtaatct actgggacgg
     1741 aacagctttg aggtgcgtgt ttgtgcctgt cctgggagag accggcgcac agaggaagag
     1801 aatctccgca agaaagggga gcctcaccac gagctgcccc cagggagcac taagcgagca
     1861 ctgcccaaca acaccagctc ctctccccag ccaaagaaga aaccactgga tggagaatat
     1921 ttcacccttc agatccgtgg gcgtgagcgc ttcgagatgt tccgagagct gaatgaggcc
     1981 ttggaactca aggatgccca ggctgggaag gagccagggg ggagcagggc tcactccagc
     2041 cacctgaagt ccaaaaaggg tcagtctacc tcccgccata aaaaactcat gttcaagaca
     2101 gaagggcctg actcagactg agaattctgc agatatccat cacactggcg gccgctcgag
     2161 catgcatcta gagggcccta ttctatagtg tcacctaaat gctagagctc gctgatcagc
     2221 ctcgactgtg ccttctagtt gccagccatc tgttgtttgc ccctcccccg tgccttcctt
     2281 gaccctggaa ggtgccactc ccactgtcct ttcctaataa aatgaggaaa ttgcatcgca
     2341 ttgtctgagt aggtgtcatt ctattctggg gggtggggtg gggcaggaca gcaaggggga
     2401 ggattgggaa gacaatagca ggcatgctgg ggatgcggtg ggctctatgg cttctgaggc
     2461 ggaaagaacc agctggggct ctagggggta tccccacgcg ccctgtagcg gcgcattaag
     2521 cgcggcgggt gtggtggtta cgcgcagcgt gaccgctaca cttgccagcg ccctagcgcc
     2581 cgctcctttc gctttcttcc cttcctttct cgccacgttc gccggctttc cccgtcaagc
     2641 tctaaatcgg ggcatccctt tagggttccg atttagtgct ttacggcacc tcgaccccaa
     2701 aaaacttgat tagggtgatg gttcacgtag tgggccatcg ccctgataga cggtttttcg
     2761 ccctttgacg ttggagtcca cgttctttaa tagtggactc ttgttccaaa ctggaacaac
     2821 actcaaccct atctcggtct attcttttga tttataaggg attttgggga tttcggccta
     2881 ttggttaaaa aatgagctga tttaacaaaa atttaacgcg aattaattct gtggaatgtg
     2941 tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc tccccaggca ggcagaagta tgcaaagcat
     3001 gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag
     3061 tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat
     3121 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt
     3181 tatttatgca gaggccgagg ccgcctctgc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg
     3241 cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa gctcccggga gcttgtatat ccattttcgg
     3301 atctgatcaa gagacaggat gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc
     3361 aggttctccg gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat
     3421 cggctgctct gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt
     3481 caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg
     3541 gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag
     3601 ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc
     3661 tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc
     3721 tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga
     3781 agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga
     3841 actgttcgcc aggctcaagg cgcgcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg
     3901 cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg
     3961 tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc
     4021 tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc
     4081 cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg
     4141 gggttcgaaa tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc
     4201 gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc
     4261 ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc ccaacttgtt tattgcagct
     4321 tataatggtt acaaataaag caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca
     4381 ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat cttatcatgt ctgtataccg
     4441 tcgacctcta gctagagctt ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt
     4501 tatccgctca caattccaca caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt
     4561 gcctaatgag tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg
     4621 ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg
     4681 cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg
     4741 cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat
     4801 aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc
     4861 gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc
     4921 tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga
     4981 agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt
     5041 ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcaa tgctcacgct gtaggtatct cagttcggtg
     5101 taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc
     5161 gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg
     5221 gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc
     5281 ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg
     5341 ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc
     5401 gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct
     5461 caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt
     5521 taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa
     5581 aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa
     5641 tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc
     5701 tgactccccg tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct
     5761 gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca
     5821 gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt
     5881 aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt
     5941 gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc
     6001 ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc
     6061 tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt
     6121 atggcagcac tgcataattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact
     6181 ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc
     6241 ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt
     6301 ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg
     6361 atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct
     6421 gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa
     6481 tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt
     6541 ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc
     6601 acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4930/pTurboRFP-N1哺乳红色荧光质粒

P4936/pTurboRFP-C1哺乳红色荧光质粒

P3017/mApple-N1哺乳荧光质粒

P0145/pEYFP-N1哺乳荧光质粒

P1579/pCDNA3.1 EYFP H148Q-I152L哺乳荧光质粒

P1196/pECMV-3×FLAG-VENUS哺乳荧光质粒

P1402/mAmetrine-N1哺乳荧光质粒

P1871/pZsYellow-N1哺乳荧光质粒

P1872/pmCitrine-C1哺乳荧光质粒

P1912/pmVenus-C1哺乳荧光质粒

P0474/pEBFP-N1哺乳荧光质粒