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- Xybio
- 上海
- P2671
- 2026年01月21日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_001098209.1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCDEF-FLAG-β-catenin-S675A人源基因质粒
别称: NM_001098209.1
启动子：EF1a
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3427/pECMV-3×FLAG-SERPINF1（2同义突变）人源基因质粒 |
| P3428/pECMV-3×FLAG-RILPL2人源基因质粒 |
| P3430/pECMV-3×FLAG-PSMC4人源基因质粒 |
| P3431/pECMV-3×FLAG-KLHDC3人源基因质粒 |
| P3432/pECMV-3×FLAG-MRPS22（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3433/pECMV-3×FLAG-NSDHL（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3434/pECMV-3×FLAG-PELI2人源基因质粒 |
| P3435/pECMV-3×FLAG-PHKG2人源基因质粒 |
| P3436/pECMV-3×FLAG-PPME1人源基因质粒 |
| P3470/pECMV-3×FLAG-CD46人源基因质粒 |
| P3471/pECMV-3×FLAG-COMMD10人源基因质粒 |
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文献和实验浅析染色质免疫沉淀（ChIP）技术在 DNA 与蛋白质相互作用研究中的重要性
等人 [20] 于近期首先发现转录因子 Tcf-4 和 β-catenin 共同上调 c-Myc 基因调控因子 enhance E 的表达，然而 luciferase reporter 实验结果仅能证明 β-catenin 和转录因子 Tcf-4与enhance E 的相关性，无法提供证据表明这两种细胞因子如何作用于 enhance E 基因上。因此，他们采用了 ChIP 技术，证明前列腺癌 LnCAP 细胞中是 Tcf-4 而不是 β-catenin 直接结合到 enhance E 基因上，这就表明
起始位点。 2、抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ 3、多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 4、P/E 启动子/增强子 5、Terms 终止信号 6、 加 poly（A）信号 可以起到稳定 mRNA 作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看 Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除
（3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA
