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- 上海
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- 2025年06月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
CLMF;NKSF;CLMF2;NKSF2;IL-12B
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pEGFP-IL12B人源基因质粒
别称: CLMF;NKSF;CLMF2;NKSF2;IL-12B
启动子: CMV
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒
原核抗性: Kan
筛选标记: G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pEGFP-IL12B(NM_002187.2) 是一个人ORF基因哺乳细胞表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5782 bp ds-DNA circular SYN 18-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5782
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 642..1622
/label=IL12B
CDS 1728..2447
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
polyA_signal 2570..2691
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2698..3153)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3180..3284
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 3286..3643
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3494..3629
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3678..4472
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4704..4751
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 5080..5668
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctccaact ttgtgccaaa aagttggcat gtgtcaccag cagttggtca
661 tctcttggtt ttccctggtt tttctggcat ctcccctcgt ggccatatgg gaactgaaga
721 aagatgttta tgtcgtagaa ttggattggt atccggatgc ccctggagaa atggtggtcc
781 tcacctgtga cacccctgaa gaagatggta tcacctggac cttggaccag agcagtgagg
841 tcttaggctc tggcaaaacc ctgaccatcc aagtcaaaga gtttggagat gctggccagt
901 acacctgtca caaaggaggc gaggttctaa gccattcgct cctgctgctt cacaaaaagg
961 aagatggaat ttggtccact gatattttaa aggaccagaa agaacccaaa aataagacct
1021 ttctaagatg cgaggccaag aattattctg gacgtttcac ctgctggtgg ctgacgacaa
1081 tcagtactga tttgacattc agtgtcaaaa gcagcagagg ctcttctgac ccccaagggg
1141 tgacgtgcgg agctgctaca ctctctgcag agagagtcag aggggacaac aaggagtatg
1201 agtactcagt ggagtgccag gaggacagtg cctgcccagc tgctgaggag agtctgccca
1261 ttgaggtcat ggtggatgcc gttcacaagc tcaagtatga aaactacacc agcagcttct
1321 tcatcaggga catcatcaaa cctgacccac ccaagaactt gcagctgaag ccattaaaga
1381 attctcggca ggtggaggtc agctgggagt accctgacac ctggagtact ccacattcct
1441 acttctccct gacattctgc gttcaggtcc agggcaagag caagagagaa aagaaagata
1501 gagtcttcac ggacaagacc tcagccacgg tcatctgccg caaaaatgcc agcattagcg
1561 tgcgggccca ggaccgctac tatagctcat cttggagcga atgggcatct gtgccctgca
1621 gttaccccac tttcttggac agagttggca ttggcggtgg cggcagcggc ggaggcggaa
1681 gcggaggcgg aggaagcccg cgggcccggg atccaccggt cgccaccatg gtgagcaagg
1741 gcgaggagct gttcaccggg gtggtgccca tcctggtcga gctggacggc gacgtaaacg
1801 gccacaagtt cagcgtgtcc ggcgagggcg agggcgatgc cacctacggc aagctgaccc
1861 tgaagttcat ctgcaccacc ggcaagctgc ccgtgccctg gcccaccctc gtgaccaccc
1921 tgacctacgg cgtgcagtgc ttcagccgct accccgacca catgaagcag cacgacttct
1981 tcaagtccgc catgcccgaa ggctacgtcc aggagcgcac catcttcttc aaggacgacg
2041 gcaactacaa gacccgcgcc gaggtgaagt tcgagggcga caccctggtg aaccgcatcg
2101 agctgaaggg catcgacttc aaggaggacg gcaacatcct ggggcacaag ctggagtaca
2161 actacaacag ccacaacgtc tatatcatgg ccgacaagca gaagaacggc atcaaggtga
2221 acttcaagat ccgccacaac atcgaggacg gcagcgtgca gctcgccgac cactaccagc
2281 agaacacccc catcggcgac ggccccgtgc tgctgcccga caaccactac ctgagcaccc
2341 agtccgccct gagcaaagac cccaacgaga agcgcgatca catggtcctg ctggagttcg
2401 tgaccgccgc cgggatcact ctcggcatgg acgagctgta caagtaaagc ggccgcgact
2461 ctagatcata atcagccata ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa aaaacctccc
2521 acacctcccc ctgaacctga aacataaaat gaatgcaatt gttgttgtta acttgtttat
2581 tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt
2641 tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt aaggcgtaaa
2701 ttgtaagcgt taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt
2761 ttaaccaata ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag accgagatag
2821 ggttgagtgt tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg
2881 tcaaagggcg aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact acgtgaacca tcaccctaat
2941 caagtttttt ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc
3001 gatttagagc ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga
3061 aaggagcggg cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac
3121 ccgccgcgct taatgcgccg ctacagggcg cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc
3181 gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac
3241 aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtcctgag gcggaaagaa
3301 ccagctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag
3361 aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc
3421 cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc
3481 cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg
3541 ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca
3601 gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaagatcgat caagagacag
3661 gatgaggatc gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt
3721 gggtggagag gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg
3781 ccgtgttccg gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg
3841 gtgccctgaa tgaactgcaa gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg
3901 ttccttgcgc agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg
3961 gcgaagtgcc ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca
4021 tcatggctga tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc
4081 accaagcgaa acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc
4141 aggatgatct ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca
4201 aggcgagcat gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga
4261 atatcatggt ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg
4321 cggaccgcta tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg
4381 aatgggctga ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg
4441 ccttctatcg ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga
4501 ccaagcgacg cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag
4561 gttgggcttc ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct
4621 catgctggag ttcttcgccc accctagggg gaggctaact gaaacacgga aggagacaat
4681 accggaagga acccgcgcta tgacggcaat aaaaagacag aataaaacgc acggtgttgg
4741 gtcgtttgtt cataaacgcg gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc
4801 gagaccccat tggggccaat acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc accccccaag
4861 ttcgggtgaa ggcccagggc tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg ccatagcctc
4921 aggttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta
4981 ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca
5041 ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg
5101 cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga
5161 tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa
5221 tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc
5281 tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg
5341 tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac
5401 ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct
5461 acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc
5521 ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg
5581 gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg
5641 ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct
5701 ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga
5761 taaccgtatt accgccatgc at
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pEGFP-IL12B人源基因质粒
别称: CLMF;NKSF;CLMF2;NKSF2;IL-12B
启动子: CMV
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库质粒
原核抗性: Kan
筛选标记: G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pEGFP-IL12B(NM_002187.2) 是一个人ORF基因哺乳细胞表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5782 bp ds-DNA circular SYN 18-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
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replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
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1861 tgaagttcat ctgcaccacc ggcaagctgc ccgtgccctg gcccaccctc gtgaccaccc
1921 tgacctacgg cgtgcagtgc ttcagccgct accccgacca catgaagcag cacgacttct
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2041 gcaactacaa gacccgcgcc gaggtgaagt tcgagggcga caccctggtg aaccgcatcg
2101 agctgaaggg catcgacttc aaggaggacg gcaacatcct ggggcacaag ctggagtaca
2161 actacaacag ccacaacgtc tatatcatgg ccgacaagca gaagaacggc atcaaggtga
2221 acttcaagat ccgccacaac atcgaggacg gcagcgtgca gctcgccgac cactaccagc
2281 agaacacccc catcggcgac ggccccgtgc tgctgcccga caaccactac ctgagcaccc
2341 agtccgccct gagcaaagac cccaacgaga agcgcgatca catggtcctg ctggagttcg
2401 tgaccgccgc cgggatcact ctcggcatgg acgagctgta caagtaaagc ggccgcgact
2461 ctagatcata atcagccata ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa aaaacctccc
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2821 ggttgagtgt tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg
2881 tcaaagggcg aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact acgtgaacca tcaccctaat
2941 caagtttttt ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc
3001 gatttagagc ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga
3061 aaggagcggg cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac
3121 ccgccgcgct taatgcgccg ctacagggcg cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc
3181 gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac
3241 aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtcctgag gcggaaagaa
3301 ccagctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag
3361 aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc
3421 cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc
3481 cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg
3541 ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca
3601 gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaagatcgat caagagacag
3661 gatgaggatc gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt
3721 gggtggagag gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg
3781 ccgtgttccg gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg
3841 gtgccctgaa tgaactgcaa gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg
3901 ttccttgcgc agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg
3961 gcgaagtgcc ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca
4021 tcatggctga tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc
4081 accaagcgaa acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc
4141 aggatgatct ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca
4201 aggcgagcat gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga
4261 atatcatggt ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg
4321 cggaccgcta tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg
4381 aatgggctga ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg
4441 ccttctatcg ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga
4501 ccaagcgacg cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag
4561 gttgggcttc ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct
4621 catgctggag ttcttcgccc accctagggg gaggctaact gaaacacgga aggagacaat
4681 accggaagga acccgcgcta tgacggcaat aaaaagacag aataaaacgc acggtgttgg
4741 gtcgtttgtt cataaacgcg gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc
4801 gagaccccat tggggccaat acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc accccccaag
4861 ttcgggtgaa ggcccagggc tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg ccatagcctc
4921 aggttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta
4981 ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca
5041 ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg
5101 cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga
5161 tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa
5221 tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc
5281 tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg
5341 tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac
5401 ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct
5461 acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc
5521 ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg
5581 gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg
5641 ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct
5701 ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga
5761 taaccgtatt accgccatgc at
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1153/pLEGFP-WT-STAT3人源基因质粒 |
| P4833/pECMV-3×FLAG-SDC1人源基因质粒 |
| P1154/pCMV-FLAG-SIRT4人源基因质粒 |
| P1166/pECMV-3×FLAG-LGALS13人源基因质粒 |
| P1167/pECMV-3×FLAG-IL4人源基因质粒 |
| P1168/pECMV-3×FLAG-IL6人源基因质粒 |
| P3802/pECMV-3×FLAG-MED10人源基因质粒 |
| P4927/pECMV-3×FLAG-YTHDF3人源基因质粒 |
| P4928/pECMV-3×FLAG-EIF4G2(1同义突变）人源基因质粒 |
| P4892/pCDNA3.1-3×HA-HDAC4人源基因质粒 |
| P4933/pCDNA3.0-HA-KPNA1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Restriction Map and Multiple Cloning Site of pEGFP-N2. (Unique restriction sites are in color or bold.) The Not I site follows the EGFP stop codon. The Nhe I site cannot be used for fusions since it contains an in-frame stop codon
多克隆位点区 Restriction Map and Multiple Cloning Site of pEGFP-N1. (Unique restriction sites are in color or bold.) The Not I site follows the EGFP stop codon. The Xba I site (*) is methylated in the DNA provided by CLONTECH. If you wish to digest
多克隆位点区（MCS） Restriction Map and Multiple Cloning Site of pEGFP-C2. (Unique restriction sites are in color or bold.) Note that the Eag I site is not unique.) The Xba I site cannot be used for fusions
pEGFP-IL12B人源基因质粒
￥100 - 1000
