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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
FRCP2;irisin
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pT7-His-FNDC5人源基因质粒
别称: FRCP2;irisin
复制子: pBR322
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pT7-His-FNDC5是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5743 bp ds-DNA circular SYN 28-九月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5743
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 141..159
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 160..184
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 240..257
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS 276..737
/codon_start=1
/note="FNDC5"
/translation="MLRFIQEVNTTTRSCALWDLEEDTEYIVHVQAISIQGQSPASEPV
LFKTPREAEKMASKNKDEVTMKEMGRNQQLRTGEVLIIVVVLFMWAGVIALFCRQYDII
KDNEPNNNKEKTKSASETST-PEHQGGGLLRSKVRARPGPGWATLCLMLW"
CDS 744..761
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 828..875
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
rep_origin 912..1367
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(1460..2275)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin 2397..2985
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3415..3606)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(4415..5497)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(5498..5575)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccatgct gcgcttcatc caggaggtga
301 acaccaccac ccgctcatgt gccctctggg acctggagga ggatacggag tacatagtcc
361 acgtgcaggc catctccatt cagggccaga gcccagccag cgagcctgtg ctcttcaaga
421 ccccgcgtga ggctgagaag atggcctcca agaacaaaga tgaggtaacc atgaaagaga
481 tggggaggaa ccaacagctg cggacaggcg aggtgctgat catcgtcgtg gtcctgttca
541 tgtgggcagg tgtcattgcc ctcttctgcc gccagtatga catcatcaag gacaatgaac
601 ccaataacaa caaggaaaaa accaagagtg catcagaaac cagcacacca gagcaccagg
661 gcggggggct tctccgcagc aaggtgaggg caagacctgg gcctgggtgg gccaccctgt
721 gcctcatgct ctggtaactc gagcaccacc accaccacca ctgagatccg gctgctaaca
781 aagcccgaaa ggaagctgag ttggctgctg ccaccgctga gcaataacta gcataacccc
841 ttggggcctc taaacgggtc ttgaggggtt ttttgctgaa aggaggaact atatccggat
901 tggcgaatgg gacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg
961 cagcgtgacc gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc
1021 ctttctcgcc acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg
1081 gttccgattt agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc
1141 acgtagtggg ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt
1201 ctttaatagt ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc aaccctatct cggtctattc
1261 ttttgattta taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta
1321 acaaaaattt aacgcgaatt ttaacaaaat attaacgttt acaatttcag gtggcacttt
1381 tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta
1441 tccgctcatg aattaattct tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat
1501 tcatatcagg attatcaata ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa
1561 actcaccgag gcagttccat aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc
1621 gtccaacatc aatacaacct attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga
1681 aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg agaatggcaa aagtttatgc atttctttcc
1741 agacttgttc aacaggccag ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac
1801 cgttattcat tcgtgattgc gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac
1861 aattacaaac aggaatcgaa tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat
1921 tttcacctga atcaggatat tcttctaata cctggaatgc tgttttcccg gggatcgcag
1981 tggtgagtaa ccatgcatca tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc ggaagaggca
2041 taaattccgt cagccagttt agtctgacca tctcatctgt aacatcattg gcaacgctac
2101 ctttgccatg tttcagaaac aactctggcg catcgggctt cccatacaat cgatagattg
2161 tcgcacctga ttgcccgaca ttatcgcgag cccatttata cccatataaa tcagcatcca
2221 tgttggaatt taatcgcggc ctagagcaag acgtttcccg ttgaatatgg ctcataacac
2281 cccttgtatt actgtttatg taagcagaca gttttattgt tcatgaccaa aatcccttaa
2341 cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga
2401 gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg
2461 gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc
2521 agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag
2581 aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc
2641 agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg
2701 cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac
2761 accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga
2821 aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt
2881 ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag
2941 cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg
3001 gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt tcctgcgtta
3061 tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac cgctcgccgc
3121 agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag cggaagagcg cctgatgcgg
3181 tattttctcc ttacgcatct gtgcggtatt tcacaccgca tatatggtgc actctcagta
3241 caatctgctc tgatgccgca tagttaagcc agtatacact ccgctatcgc tacgtgactg
3301 ggtcatggct gcgccccgac acccgccaac acccgctgac gcgccctgac gggcttgtct
3361 gctcccggca tccgcttaca gacaagctgt gaccgtctcc gggagctgca tgtgtcagag
3421 gttttcaccg tcatcaccga aacgcgcgag gcagctgcgg taaagctcat cagcgtggtc
3481 gtgaagcgat tcacagatgt ctgcctgttc atccgcgtcc agctcgttga gtttctccag
3541 aagcgttaat gtctggcttc tgataaagcg ggccatgtta agggcggttt tttcctgttt
3601 ggtcactgat gcctccgtgt aagggggatt tctgttcatg ggggtaatga taccgatgaa
3661 acgagagagg atgctcacga tacgggttac tgatgatgaa catgcccggt tactggaacg
3721 ttgtgagggt aaacaactgg cggtatggat gcggcgggac cagagaaaaa tcactcaggg
3781 tcaatgccag cgcttcgtta atacagatgt aggtgttcca cagggtagcc agcagcatcc
3841 tgcgatgcag atccggaaca taatggtgca gggcgctgac ttccgcgttt ccagacttta
3901 cgaaacacgg aaaccgaaga ccattcatgt tgttgctcag gtcgcagacg ttttgcagca
3961 gcagtcgctt cacgttcgct cgcgtatcgg tgattcattc tgctaaccag taaggcaacc
4021 ccgccagcct agccgggtcc tcaacgacag gagcacgatc atgcgcaccc gtggggccgc
4081 catgccggcg ataatggcct gcttctcgcc gaaacgtttg gtggcgggac cagtgacgaa
4141 ggcttgagcg agggcgtgca agattccgaa taccgcaagc gacaggccga tcatcgtcgc
4201 gctccagcga aagcggtcct cgccgaaaat gacccagagc gctgccggca cctgtcctac
4261 gagttgcatg ataaagaaga cagtcataag tgcggcgacg atagtcatgc cccgcgccca
4321 ccggaaggag ctgactgggt tgaaggctct caagggcatc ggtcgagatc ccggtgccta
4381 atgagtgagc taacttacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa
4441 cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat
4501 tgggcgccag ggtggttttt cttttcacca gtgagacggg caacagctga ttgcccttca
4561 ccgcctggcc ctgagagagt tgcagcaagc ggtccacgct ggtttgcccc agcaggcgaa
4621 aatcctgttt gatggtggtt aacggcggga tataacatga gctgtcttcg gtatcgtcgt
4681 atcccactac cgagatatcc gcaccaacgc gcagcccgga ctcggtaatg gcgcgcattg
4741 cgcccagcgc catctgatcg ttggcaacca gcatcgcagt gggaacgatg ccctcattca
4801 gcatttgcat ggtttgttga aaaccggaca tggcactcca gtcgccttcc cgttccgcta
4861 tcggctgaat ttgattgcga gtgagatatt tatgccagcc agccagacgc agacgcgccg
4921 agacagaact taatgggccc gctaacagcg cgatttgctg gtgacccaat gcgaccagat
4981 gctccacgcc cagtcgcgta ccgtcttcat gggagaaaat aatactgttg atgggtgtct
5041 ggtcagagac atcaagaaat aacgccggaa cattagtgca ggcagcttcc acagcaatgg
5101 catcctggtc atccagcgga tagttaatga tcagcccact gacgcgttgc gcgagaagat
5161 tgtgcaccgc cgctttacag gcttcgacgc cgcttcgttc taccatcgac accaccacgc
5221 tggcacccag ttgatcggcg cgagatttaa tcgccgcgac aatttgcgac ggcgcgtgca
5281 gggccagact ggaggtggca acgccaatca gcaacgactg tttgcccgcc agttgttgtg
5341 ccacgcggtt gggaatgtaa ttcagctccg ccatcgccgc ttccactttt tcccgcgttt
5401 tcgcagaaac gtggctggcc tggttcacca cgcgggaaac ggtctgataa gagacaccgg
5461 catactctgc gacatcgtat aacgttactg gtttcacatt caccaccctg aattgactct
5521 cttccgggcg ctatcatgcc ataccgcgaa aggttttgcg ccattcgatg gtgtccggga
5581 tctcgacgct ctcccttatg cgactcctgc attaggaagc agcccagtag taggttgagg
5641 ccgttgagca ccgccgccgc aaggaatggt gcatgcaagg agatggcgcc caacagtccc
5701 ccggccacgg ggcctgccac catacccacg ccgaaacaag cgc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pT7-His-FNDC5人源基因质粒
别称: FRCP2;irisin
| 启动子: | T7 |
|---|
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pT7-His-FNDC5是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5743 bp ds-DNA circular SYN 28-九月-2017
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5743
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 141..159
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 160..184
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 240..257
/codon_start=1
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/note="6xHis"
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CDS 276..737
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CDS 744..761
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/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 828..875
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
rep_origin 912..1367
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(1460..2275)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/note="KanR"
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
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replication"
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/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(4415..5497)
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/product="lac repressor"
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
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NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
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MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(5498..5575)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccatgct gcgcttcatc caggaggtga
301 acaccaccac ccgctcatgt gccctctggg acctggagga ggatacggag tacatagtcc
361 acgtgcaggc catctccatt cagggccaga gcccagccag cgagcctgtg ctcttcaaga
421 ccccgcgtga ggctgagaag atggcctcca agaacaaaga tgaggtaacc atgaaagaga
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721 gcctcatgct ctggtaactc gagcaccacc accaccacca ctgagatccg gctgctaaca
781 aagcccgaaa ggaagctgag ttggctgctg ccaccgctga gcaataacta gcataacccc
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901 tggcgaatgg gacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg
961 cagcgtgacc gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc
1021 ctttctcgcc acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg
1081 gttccgattt agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc
1141 acgtagtggg ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt
1201 ctttaatagt ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc aaccctatct cggtctattc
1261 ttttgattta taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta
1321 acaaaaattt aacgcgaatt ttaacaaaat attaacgttt acaatttcag gtggcacttt
1381 tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta
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1621 gtccaacatc aatacaacct attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga
1681 aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg agaatggcaa aagtttatgc atttctttcc
1741 agacttgttc aacaggccag ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac
1801 cgttattcat tcgtgattgc gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac
1861 aattacaaac aggaatcgaa tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat
1921 tttcacctga atcaggatat tcttctaata cctggaatgc tgttttcccg gggatcgcag
1981 tggtgagtaa ccatgcatca tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc ggaagaggca
2041 taaattccgt cagccagttt agtctgacca tctcatctgt aacatcattg gcaacgctac
2101 ctttgccatg tttcagaaac aactctggcg catcgggctt cccatacaat cgatagattg
2161 tcgcacctga ttgcccgaca ttatcgcgag cccatttata cccatataaa tcagcatcca
2221 tgttggaatt taatcgcggc ctagagcaag acgtttcccg ttgaatatgg ctcataacac
2281 cccttgtatt actgtttatg taagcagaca gttttattgt tcatgaccaa aatcccttaa
2341 cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga
2401 gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg
2461 gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc
2521 agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag
2581 aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc
2641 agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg
2701 cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac
2761 accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga
2821 aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt
2881 ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag
2941 cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg
3001 gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt tcctgcgtta
3061 tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac cgctcgccgc
3121 agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag cggaagagcg cctgatgcgg
3181 tattttctcc ttacgcatct gtgcggtatt tcacaccgca tatatggtgc actctcagta
3241 caatctgctc tgatgccgca tagttaagcc agtatacact ccgctatcgc tacgtgactg
3301 ggtcatggct gcgccccgac acccgccaac acccgctgac gcgccctgac gggcttgtct
3361 gctcccggca tccgcttaca gacaagctgt gaccgtctcc gggagctgca tgtgtcagag
3421 gttttcaccg tcatcaccga aacgcgcgag gcagctgcgg taaagctcat cagcgtggtc
3481 gtgaagcgat tcacagatgt ctgcctgttc atccgcgtcc agctcgttga gtttctccag
3541 aagcgttaat gtctggcttc tgataaagcg ggccatgtta agggcggttt tttcctgttt
3601 ggtcactgat gcctccgtgt aagggggatt tctgttcatg ggggtaatga taccgatgaa
3661 acgagagagg atgctcacga tacgggttac tgatgatgaa catgcccggt tactggaacg
3721 ttgtgagggt aaacaactgg cggtatggat gcggcgggac cagagaaaaa tcactcaggg
3781 tcaatgccag cgcttcgtta atacagatgt aggtgttcca cagggtagcc agcagcatcc
3841 tgcgatgcag atccggaaca taatggtgca gggcgctgac ttccgcgttt ccagacttta
3901 cgaaacacgg aaaccgaaga ccattcatgt tgttgctcag gtcgcagacg ttttgcagca
3961 gcagtcgctt cacgttcgct cgcgtatcgg tgattcattc tgctaaccag taaggcaacc
4021 ccgccagcct agccgggtcc tcaacgacag gagcacgatc atgcgcaccc gtggggccgc
4081 catgccggcg ataatggcct gcttctcgcc gaaacgtttg gtggcgggac cagtgacgaa
4141 ggcttgagcg agggcgtgca agattccgaa taccgcaagc gacaggccga tcatcgtcgc
4201 gctccagcga aagcggtcct cgccgaaaat gacccagagc gctgccggca cctgtcctac
4261 gagttgcatg ataaagaaga cagtcataag tgcggcgacg atagtcatgc cccgcgccca
4321 ccggaaggag ctgactgggt tgaaggctct caagggcatc ggtcgagatc ccggtgccta
4381 atgagtgagc taacttacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa
4441 cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat
4501 tgggcgccag ggtggttttt cttttcacca gtgagacggg caacagctga ttgcccttca
4561 ccgcctggcc ctgagagagt tgcagcaagc ggtccacgct ggtttgcccc agcaggcgaa
4621 aatcctgttt gatggtggtt aacggcggga tataacatga gctgtcttcg gtatcgtcgt
4681 atcccactac cgagatatcc gcaccaacgc gcagcccgga ctcggtaatg gcgcgcattg
4741 cgcccagcgc catctgatcg ttggcaacca gcatcgcagt gggaacgatg ccctcattca
4801 gcatttgcat ggtttgttga aaaccggaca tggcactcca gtcgccttcc cgttccgcta
4861 tcggctgaat ttgattgcga gtgagatatt tatgccagcc agccagacgc agacgcgccg
4921 agacagaact taatgggccc gctaacagcg cgatttgctg gtgacccaat gcgaccagat
4981 gctccacgcc cagtcgcgta ccgtcttcat gggagaaaat aatactgttg atgggtgtct
5041 ggtcagagac atcaagaaat aacgccggaa cattagtgca ggcagcttcc acagcaatgg
5101 catcctggtc atccagcgga tagttaatga tcagcccact gacgcgttgc gcgagaagat
5161 tgtgcaccgc cgctttacag gcttcgacgc cgcttcgttc taccatcgac accaccacgc
5221 tggcacccag ttgatcggcg cgagatttaa tcgccgcgac aatttgcgac ggcgcgtgca
5281 gggccagact ggaggtggca acgccaatca gcaacgactg tttgcccgcc agttgttgtg
5341 ccacgcggtt gggaatgtaa ttcagctccg ccatcgccgc ttccactttt tcccgcgttt
5401 tcgcagaaac gtggctggcc tggttcacca cgcgggaaac ggtctgataa gagacaccgg
5461 catactctgc gacatcgtat aacgttactg gtttcacatt caccaccctg aattgactct
5521 cttccgggcg ctatcatgcc ataccgcgaa aggttttgcg ccattcgatg gtgtccggga
5581 tctcgacgct ctcccttatg cgactcctgc attaggaagc agcccagtag taggttgagg
5641 ccgttgagca ccgccgccgc aaggaatggt gcatgcaagg agatggcgcc caacagtccc
5701 ccggccacgg ggcctgccac catacccacg ccgaaacaag cgc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4181/pECMV-3×FLAG-HSD17B11人源基因质粒 |
| P4182/pECMV-3×FLAG-PRDM4人源基因质粒 |
| P4183/pECMV-3×FLAG-HAND2人源基因质粒 |
| P4184/pECMV-3×FLAG-TREM2人源基因质粒 |
| P4185/pCDNA3.1-MMP9-His-Myc人源基因质粒 |
| P4186/pEGFP-Myc-6×His-FLAG-PKM2人源基因质粒 |
| P4187/pCDH-CMV-3×FLAG-TOX3-EF1-Puro人源基因质粒 |
| P4188/pLVX-AcGFP1-N1-FOXO3人源基因质粒 |
| P1262/pDEST51-LRRK2-R1441G人源基因质粒 |
| P1263/EGFR-GFP人源基因质粒 |
| P1367/pEGFP-CLCA1人源基因质粒 |
| P1368/pEGFP-FASTKD2人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图: 现有两个问题想请教各位高人 （1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？ （2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该
分，一是未稳定整合的，一是稳定整合的，所以开始时亮度要高。 2.为什么筛选后单克隆无荧光：首先，经过G418筛选，外源质粒不能整合入染色体的细胞死亡；其次，稳定整合的细胞外源质粒整合的位置存在位置效应，即整合于不利于外源基因表达的位置，从而使外源基因沉默；第三，我不知道你的质粒中是否加入了核糖体进入位点序列，如果有的话，研究显示该位点前后的基因表达水平存在不同，可以查查相关文献 3.有无好的办法：我认为没有，稳定转染筛选时有运气的成分，假如外源质粒恰好整合到了利于表达的染色体部位，这时筛
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入
pT7-His-FNDC5人源基因质粒
￥100 - 1000
