pT7-His-IL6人源基因质粒

基本信息
名称：pT7-His-IL6人源基因质粒
别称: HGF;HSF;BSF2;IL-6;IFNB2

启动子:	T7

复制子: pBR322
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pT7-His-IL6是一个人源基因大肠表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5710 bp ds-DNA     circular SYN 29-九月-2017
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5710
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        141..159
                     /note="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     protein_bind    160..184
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     RBS             199..221
                     /note="efficient ribosome binding site from bacteriophage 
                     T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
     CDS             240..257
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /note="6xHis"
                     /translation="HHHHHH"
     misc_feature    276..911
                     /note="IL6"
     CDS             921..938
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /note="6xHis"
                     /translation="HHHHHH"
     terminator      1005..1052
                     /note="T7 terminator"
                     /note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA 
                     polymerase"
     rep_origin      1089..1544
                     /direction=RIGHT
                     /note="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     CDS             complement(1637..2452)
                     /codon_start=1
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase"
                     /note="KanR"
                     /note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418 
                     (Geneticin(R)) in eukaryotes"
                     /translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
                     KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
                     TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
                     SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
                     ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
     rep_origin      2574..3162
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     misc_feature    3348..3490
                     /note="bom"
                     /note="basis of mobility region from pBR322"
     CDS             complement(3592..3783)
                     /codon_start=1
                     /gene="rop"
                     /product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
                     number"
                     /note="rop"
                     /translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
                     DELYRSCLARFGDDGENL"
     CDS             complement(4592..5674)
                     /codon_start=1
                     /gene="lacI"
                     /product="lac repressor"
                     /note="lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
                     /translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
                     NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
                     EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
                     EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
                     MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
                     YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
                     ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
ORIGIN
        1 tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt gatgtcggcg atataggcgc
       61 cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat gcgtccggcg tagaggatcg
      121 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa
      181 ttcccctcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atataccatg ggcagcagcc
      241 atcatcatca tcatcacagc agcggccgcg gatccatgaa ctccttctcc acaagcgcct
      301 tcggtccagt tgccttctcc ctggggctgc tcctggtgtt gcctgctgcc ttccctgccc
      361 cagtaccccc aggagaagat tccaaagatg tagccgcccc acacagacag ccactcacct
      421 cttcagaacg aattgacaaa caaattcggt acatcctcga cggcatctca gccctgagaa
      481 aggagacatg taacaagagt aacatgtgtg aaagcagcaa agaggcactg gcagaaaaca
      541 acctgaacct tccaaagatg gctgaaaaag atggatgctt ccaatctgga ttcaatgagg
      601 agacttgcct ggtgaaaatc atcactggtc ttttggagtt tgaggtatac ctagagtacc
      661 tccagaacag atttgagagt agtgaggaac aagccagagc tgtgcagatg agtacaaaag
      721 tcctgatcca gttcctgcag aaaaaggcaa agaatctaga tgcaataacc acccctgacc
      781 caaccacaaa tgccagcctg ctgacgaagc tgcaggcaca gaaccagtgg ctgcaggaca
      841 tgacaactca tctcattctg cgcagcttta aggagttcct gcagtccagc ctgagggctc
      901 ttcggcaaat gtgactcgag caccaccacc accaccactg agatccggct gctaacaaag
      961 cccgaaagga agctgagttg gctgctgcca ccgctgagca ataactagca taaccccttg
     1021 gggcctctaa acgggtcttg aggggttttt tgctgaaagg aggaactata tccggattgg
     1081 cgaatgggac gcgccctgta gcggcgcatt aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag
     1141 cgtgaccgct acacttgcca gcgccctagc gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt
     1201 tctcgccacg ttcgccggct ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt
     1261 ccgatttagt gctttacggc acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg
     1321 tagtgggcca tcgccctgat agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt
     1381 taatagtgga ctcttgttcc aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt
     1441 tgatttataa gggattttgc cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca
     1501 aaaatttaac gcgaatttta acaaaatatt aacgtttaca atttcaggtg gcacttttcg
     1561 gggaaatgtg cgcggaaccc ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc
     1621 gctcatgaat taattcttag aaaaactcat cgagcatcaa atgaaactgc aatttattca
     1681 tatcaggatt atcaatacca tatttttgaa aaagccgttt ctgtaatgaa ggagaaaact
     1741 caccgaggca gttccatagg atggcaagat cctggtatcg gtctgcgatt ccgactcgtc
     1801 caacatcaat acaacctatt aatttcccct cgtcaaaaat aaggttatca agtgagaaat
     1861 caccatgagt gacgactgaa tccggtgaga atggcaaaag tttatgcatt tctttccaga
     1921 cttgttcaac aggccagcca ttacgctcgt catcaaaatc actcgcatca accaaaccgt
     1981 tattcattcg tgattgcgcc tgagcgagac gaaatacgcg atcgctgtta aaaggacaat
     2041 tacaaacagg aatcgaatgc aaccggcgca ggaacactgc cagcgcatca acaatatttt
     2101 cacctgaatc aggatattct tctaatacct ggaatgctgt tttcccgggg atcgcagtgg
     2161 tgagtaacca tgcatcatca ggagtacgga taaaatgctt gatggtcgga agaggcataa
     2221 attccgtcag ccagtttagt ctgaccatct catctgtaac atcattggca acgctacctt
     2281 tgccatgttt cagaaacaac tctggcgcat cgggcttccc atacaatcga tagattgtcg
     2341 cacctgattg cccgacatta tcgcgagccc atttataccc atataaatca gcatccatgt
     2401 tggaatttaa tcgcggccta gagcaagacg tttcccgttg aatatggctc ataacacccc
     2461 ttgtattact gtttatgtaa gcagacagtt ttattgttca tgaccaaaat cccttaacgt
     2521 gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat
     2581 cctttttttc tgcgcgtaat ctgctgcttg caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg
     2641 gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga
     2701 gcgcagatac caaatactgt ccttctagtg tagccgtagt taggccacca cttcaagaac
     2761 tctgtagcac cgcctacata cctcgctctg ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt
     2821 ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag
     2881 cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca cagcccagct tggagcgaac gacctacacc
     2941 gaactgagat acctacagcg tgagctatga gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag
     3001 gcggacaggt atccggtaag cggcagggtc ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca
     3061 gggggaaacg cctggtatct ttatagtcct gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt
     3121 cgatttttgt gatgctcgtc aggggggcgg agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc
     3181 tttttacggt tcctggcctt ttgctggcct tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc
     3241 cctgattctg tggataaccg tattaccgcc tttgagtgag ctgataccgc tcgccgcagc
     3301 cgaacgaccg agcgcagcga gtcagtgagc gaggaagcgg aagagcgcct gatgcggtat
     3361 tttctcctta cgcatctgtg cggtatttca caccgcatat atggtgcact ctcagtacaa
     3421 tctgctctga tgccgcatag ttaagccagt atacactccg ctatcgctac gtgactgggt
     3481 catggctgcg ccccgacacc cgccaacacc cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct
     3541 cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt
     3601 ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcgaggca gctgcggtaa agctcatcag cgtggtcgtg
     3661 aagcgattca cagatgtctg cctgttcatc cgcgtccagc tcgttgagtt tctccagaag
     3721 cgttaatgtc tggcttctga taaagcgggc catgttaagg gcggtttttt cctgtttggt
     3781 cactgatgcc tccgtgtaag ggggatttct gttcatgggg gtaatgatac cgatgaaacg
     3841 agagaggatg ctcacgatac gggttactga tgatgaacat gcccggttac tggaacgttg
     3901 tgagggtaaa caactggcgg tatggatgcg gcgggaccag agaaaaatca ctcagggtca
     3961 atgccagcgc ttcgttaata cagatgtagg tgttccacag ggtagccagc agcatcctgc
     4021 gatgcagatc cggaacataa tggtgcaggg cgctgacttc cgcgtttcca gactttacga
     4081 aacacggaaa ccgaagacca ttcatgttgt tgctcaggtc gcagacgttt tgcagcagca
     4141 gtcgcttcac gttcgctcgc gtatcggtga ttcattctgc taaccagtaa ggcaaccccg
     4201 ccagcctagc cgggtcctca acgacaggag cacgatcatg cgcacccgtg gggccgccat
     4261 gccggcgata atggcctgct tctcgccgaa acgtttggtg gcgggaccag tgacgaaggc
     4321 ttgagcgagg gcgtgcaaga ttccgaatac cgcaagcgac aggccgatca tcgtcgcgct
     4381 ccagcgaaag cggtcctcgc cgaaaatgac ccagagcgct gccggcacct gtcctacgag
     4441 ttgcatgata aagaagacag tcataagtgc ggcgacgata gtcatgcccc gcgcccaccg
     4501 gaaggagctg actgggttga aggctctcaa gggcatcggt cgagatcccg gtgcctaatg
     4561 agtgagctaa cttacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct
     4621 gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg
     4681 gcgccagggt ggtttttctt ttcaccagtg agacgggcaa cagctgattg cccttcaccg
     4741 cctggccctg agagagttgc agcaagcggt ccacgctggt ttgccccagc aggcgaaaat
     4801 cctgtttgat ggtggttaac ggcgggatat aacatgagct gtcttcggta tcgtcgtatc
     4861 ccactaccga gatatccgca ccaacgcgca gcccggactc ggtaatggcg cgcattgcgc
     4921 ccagcgccat ctgatcgttg gcaaccagca tcgcagtggg aacgatgccc tcattcagca
     4981 tttgcatggt ttgttgaaaa ccggacatgg cactccagtc gccttcccgt tccgctatcg
     5041 gctgaatttg attgcgagtg agatatttat gccagccagc cagacgcaga cgcgccgaga
     5101 cagaacttaa tgggcccgct aacagcgcga tttgctggtg acccaatgcg accagatgct
     5161 ccacgcccag tcgcgtaccg tcttcatggg agaaaataat actgttgatg ggtgtctggt
     5221 cagagacatc aagaaataac gccggaacat tagtgcaggc agcttccaca gcaatggcat
     5281 cctggtcatc cagcggatag ttaatgatca gcccactgac gcgttgcgcg agaagattgt
     5341 gcaccgccgc tttacaggct tcgacgccgc ttcgttctac catcgacacc accacgctgg
     5401 cacccagttg atcggcgcga gatttaatcg ccgcgacaat ttgcgacggc gcgtgcaggg
     5461 ccagactgga ggtggcaacg ccaatcagca acgactgttt gcccgccagt tgttgtgcca
     5521 cgcggttggg aatgtaattc agctccgcca tcgccgcttc cactttttcc cgcgttttcg
     5581 cagaaacgtg gctggcctgg ttcaccacgc gggaaacggt ctgataagag acaccggcat
     5641 actctgcgac atcgtataac gttactggtt tcacattcac caccctgaat tgactctctt
     5701 ccgggcgcta
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4129/pECMV-3×FLAG-FAM3A人源基因质粒

P4130/pECMV-3×FLAG-GLIPR1L1人源基因质粒

P4131/pECMV-3×FLAG-DDIT4人源基因质粒

P4132/pECMV-3×FLAG-ABHD4人源基因质粒

P4133/pECMV-3×FLAG-CD69人源基因质粒

P4134/pECMV-3×FLAG-ING5人源基因质粒

P4135/pECMV-3×FLAG-ICMT人源基因质粒

P4136/pECMV-3×FLAG-LYPLA1人源基因质粒

P4137/pECMV-3×FLAG-LYPLA2人源基因质粒

P4138/pECMV-3×FLAG-MAGEH1人源基因质粒

P4139/pECMV-3×FLAG-MOB1B人源基因质粒

P4140/pECMV-3×FLAG-ABHD14B人源基因质粒