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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
FABP3;MDGI;FABP11;H-FABP;M-FABP;O-FA
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pET28a-H-FABP人源基因质粒
别称: FABP3;MDGI;FABP11;H-FABP;M-FABP;O-FA
复制子: pBR322
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pET28a-H-FABP是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5749 bp ds-DNA circular SYN 27-JAN-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5749
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
terminator 26..73
/label=T7 terminator
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(140..157)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
misc_feature complement(179..577)
/label=H-FABP
CDS complement(587..619)
/codon_start=1
/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/label=T7 tag (gene 10 leader)
/note="promotes efficient translation in E. coli"
/translation="MASMTGGQQMG"
CDS complement(623..640)
/codon_start=1
/product="thrombin recognition and cleavage site"
/label=thrombin site
/translation="LVPRGS"
CDS complement(650..667)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
RBS 686..708
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
protein_bind 723..747
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(748..766)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter 1075..1152
/gene="lacI"
/label=lacI promoter
CDS 1153..2235
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
CDS 3044..3235
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
misc_feature 3337..3479
/label=bom
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(3665..4253)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 4375..5190
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/label=KanR
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
rep_origin complement(5283..5738)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgg
181 cctctttctc ataggtgcgg gtacacacgg cggtgccgtg tgtcagtgtc aggatcagct
241 tgccgtcgat cagctcgcgc actaaggtgg tctcctggcc gtcccatttt tgcaggtgca
301 ccagcttacc gccgtccagg gtcacgatgc tcttcacctt gcggtcgtcg gcggtggtct
361 cgtcgaactc cacgcccagc ttgaagctga tctcggtgtt cttgaaggtg ctgtgggtct
421 tcagggtcag aatgtcgccg tttttctcga tgatggtggt cggcttggtc atactggcca
481 cctggcgtgt ggcaaaaccc acgcccaggc tcttcatgta gtcgtcaaag ttcttggagt
541 ccactaactt ccaggtgccc aggaaagcgt ccaccatgga tccgcgaccc atttgctgtc
601 caccagtcat gctagccata tggctgccgc gcggcaccag gccgctgctg tgatgatgat
661 gatgatggct gctgcccatg gtatatctcc ttcttaaagt taaacaaaat tatttctaga
721 ggggaattgt tatccgctca caattcccct atagtgagtc gtattaattt cgcgggatcg
781 agatctcgat cctctacgcc ggacgcatcg tggccggcat caccggcgcc acaggtgcgg
841 ttgctggcgc ctatatcgcc gacatcaccg atggggaaga tcgggctcgc cacttcgggc
901 tcatgagcgc ttgtttcggc gtgggtatgg tggcaggccc cgtggccggg ggactgttgg
961 gcgccatctc cttgcatgca ccattccttg cggcggcggt gctcaacggc ctcaacctac
1021 tactgggctg cttcctaatg caggagtcgc ataagggaga gcgtcgagat cccggacacc
1081 atcgaatggc gcaaaacctt tcgcggtatg gcatgatagc gcccggaaga gagtcaattc
1141 agggtggtga atgtgaaacc agtaacgtta tacgatgtcg cagagtatgc cggtgtctct
1201 tatcagaccg tttcccgcgt ggtgaaccag gccagccacg tttctgcgaa aacgcgggaa
1261 aaagtggaag cggcgatggc ggagctgaat tacattccca accgcgtggc acaacaactg
1321 gcgggcaaac agtcgttgct gattggcgtt gccacctcca gtctggccct gcacgcgccg
1381 tcgcaaattg tcgcggcgat taaatctcgc gccgatcaac tgggtgccag cgtggtggtg
1441 tcgatggtag aacgaagcgg cgtcgaagcc tgtaaagcgg cggtgcacaa tcttctcgcg
1501 caacgcgtca gtgggctgat cattaactat ccgctggatg accaggatgc cattgctgtg
1561 gaagctgcct gcactaatgt tccggcgtta tttcttgatg tctctgacca gacacccatc
1621 aacagtatta ttttctccca tgaagacggt acgcgactgg gcgtggagca tctggtcgca
1681 ttgggtcacc agcaaatcgc gctgttagcg ggcccattaa gttctgtctc ggcgcgtctg
1741 cgtctggctg gctggcataa atatctcact cgcaatcaaa ttcagccgat agcggaacgg
1801 gaaggcgact ggagtgccat gtccggtttt caacaaacca tgcaaatgct gaatgagggc
1861 atcgttccca ctgcgatgct ggttgccaac gatcagatgg cgctgggcgc aatgcgcgcc
1921 attaccgagt ccgggctgcg cgttggtgcg gatatctcgg tagtgggata cgacgatacc
1981 gaagacagct catgttatat cccgccgtta accaccatca aacaggattt tcgcctgctg
2041 gggcaaacca gcgtggaccg cttgctgcaa ctctctcagg gccaggcggt gaagggcaat
2101 cagctgttgc ccgtctcact ggtgaaaaga aaaaccaccc tggcgcccaa tacgcaaacc
2161 gcctctcccc gcgcgttggc cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg
2221 gaaagcgggc agtgagcgca acgcaattaa tgtaagttag ctcactcatt aggcaccggg
2281 atctcgaccg atgcccttga gagccttcaa cccagtcagc tccttccggt gggcgcgggg
2341 catgactatc gtcgccgcac ttatgactgt cttctttatc atgcaactcg taggacaggt
2401 gccggcagcg ctctgggtca ttttcggcga ggaccgcttt cgctggagcg cgacgatgat
2461 cggcctgtcg cttgcggtat tcggaatctt gcacgccctc gctcaagcct tcgtcactgg
2521 tcccgccacc aaacgtttcg gcgagaagca ggccattatc gccggcatgg cggccccacg
2581 ggtgcgcatg atcgtgctcc tgtcgttgag gacccggcta ggctggcggg gttgccttac
2641 tggttagcag aatgaatcac cgatacgcga gcgaacgtga agcgactgct gctgcaaaac
2701 gtctgcgacc tgagcaacaa catgaatggt cttcggtttc cgtgtttcgt aaagtctgga
2761 aacgcggaag tcagcgccct gcaccattat gttccggatc tgcatcgcag gatgctgctg
2821 gctaccctgt ggaacaccta catctgtatt aacgaagcgc tggcattgac cctgagtgat
2881 ttttctctgg tcccgccgca tccataccgc cagttgttta ccctcacaac gttccagtaa
2941 ccgggcatgt tcatcatcag taacccgtat cgtgagcatc ctctctcgtt tcatcggtat
3001 cattaccccc atgaacagaa atccccctta cacggaggca tcagtgacca aacaggaaaa
3061 aaccgccctt aacatggccc gctttatcag aagccagaca ttaacgcttc tggagaaact
3121 caacgagctg gacgcggatg aacaggcaga catctgtgaa tcgcttcacg accacgctga
3181 tgagctttac cgcagctgcc tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat
3241 gcagctcccg gagacggtca cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg
3301 tcagggcgcg tcagcgggtg ttggcgggtg tcggggcgca gccatgaccc agtcacgtag
3361 cgatagcgga gtgtatactg gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg
3421 caccatatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc
3481 gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg
3541 tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa
3601 agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg
3661 cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga
3721 ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg
3781 tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg
3841 gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc
3901 gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg
3961 gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca
4021 ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt
4081 ggcctaacta cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag
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4321 tggtcatgaa caataaaact gtctgcttac ataaacagta atacaagggg tgttatgagc
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4501 ttgtatggga agcccgatgc gccagagttg tttctgaaac atggcaaagg tagcgttgcc
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4741 gcgctggcag tgttcctgcg ccggttgcat tcgattcctg tttgtaattg tccttttaac
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//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pET28a-H-FABP人源基因质粒
别称: FABP3;MDGI;FABP11;H-FABP;M-FABP;O-FA
复制子: pBR322
| 质粒分类: | 基因文库质粒 |
|---|
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pET28a-H-FABP是一个人源基因大肠表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5749 bp ds-DNA circular SYN 27-JAN-2018
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
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EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
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CDS 4375..5190
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/label=KanR
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(Geneticin(R)) in eukaryotes"
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KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
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ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
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ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
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721 ggggaattgt tatccgctca caattcccct atagtgagtc gtattaattt cgcgggatcg
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1021 tactgggctg cttcctaatg caggagtcgc ataagggaga gcgtcgagat cccggacacc
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1381 tcgcaaattg tcgcggcgat taaatctcgc gccgatcaac tgggtgccag cgtggtggtg
1441 tcgatggtag aacgaagcgg cgtcgaagcc tgtaaagcgg cggtgcacaa tcttctcgcg
1501 caacgcgtca gtgggctgat cattaactat ccgctggatg accaggatgc cattgctgtg
1561 gaagctgcct gcactaatgt tccggcgtta tttcttgatg tctctgacca gacacccatc
1621 aacagtatta ttttctccca tgaagacggt acgcgactgg gcgtggagca tctggtcgca
1681 ttgggtcacc agcaaatcgc gctgttagcg ggcccattaa gttctgtctc ggcgcgtctg
1741 cgtctggctg gctggcataa atatctcact cgcaatcaaa ttcagccgat agcggaacgg
1801 gaaggcgact ggagtgccat gtccggtttt caacaaacca tgcaaatgct gaatgagggc
1861 atcgttccca ctgcgatgct ggttgccaac gatcagatgg cgctgggcgc aatgcgcgcc
1921 attaccgagt ccgggctgcg cgttggtgcg gatatctcgg tagtgggata cgacgatacc
1981 gaagacagct catgttatat cccgccgtta accaccatca aacaggattt tcgcctgctg
2041 gggcaaacca gcgtggaccg cttgctgcaa ctctctcagg gccaggcggt gaagggcaat
2101 cagctgttgc ccgtctcact ggtgaaaaga aaaaccaccc tggcgcccaa tacgcaaacc
2161 gcctctcccc gcgcgttggc cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg
2221 gaaagcgggc agtgagcgca acgcaattaa tgtaagttag ctcactcatt aggcaccggg
2281 atctcgaccg atgcccttga gagccttcaa cccagtcagc tccttccggt gggcgcgggg
2341 catgactatc gtcgccgcac ttatgactgt cttctttatc atgcaactcg taggacaggt
2401 gccggcagcg ctctgggtca ttttcggcga ggaccgcttt cgctggagcg cgacgatgat
2461 cggcctgtcg cttgcggtat tcggaatctt gcacgccctc gctcaagcct tcgtcactgg
2521 tcccgccacc aaacgtttcg gcgagaagca ggccattatc gccggcatgg cggccccacg
2581 ggtgcgcatg atcgtgctcc tgtcgttgag gacccggcta ggctggcggg gttgccttac
2641 tggttagcag aatgaatcac cgatacgcga gcgaacgtga agcgactgct gctgcaaaac
2701 gtctgcgacc tgagcaacaa catgaatggt cttcggtttc cgtgtttcgt aaagtctgga
2761 aacgcggaag tcagcgccct gcaccattat gttccggatc tgcatcgcag gatgctgctg
2821 gctaccctgt ggaacaccta catctgtatt aacgaagcgc tggcattgac cctgagtgat
2881 ttttctctgg tcccgccgca tccataccgc cagttgttta ccctcacaac gttccagtaa
2941 ccgggcatgt tcatcatcag taacccgtat cgtgagcatc ctctctcgtt tcatcggtat
3001 cattaccccc atgaacagaa atccccctta cacggaggca tcagtgacca aacaggaaaa
3061 aaccgccctt aacatggccc gctttatcag aagccagaca ttaacgcttc tggagaaact
3121 caacgagctg gacgcggatg aacaggcaga catctgtgaa tcgcttcacg accacgctga
3181 tgagctttac cgcagctgcc tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat
3241 gcagctcccg gagacggtca cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg
3301 tcagggcgcg tcagcgggtg ttggcgggtg tcggggcgca gccatgaccc agtcacgtag
3361 cgatagcgga gtgtatactg gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg
3421 caccatatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc
3481 gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg
3541 tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa
3601 agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg
3661 cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga
3721 ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg
3781 tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg
3841 gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc
3901 gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg
3961 gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca
4021 ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt
4081 ggcctaacta cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag
4141 ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg
4201 gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc
4261 ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt
4321 tggtcatgaa caataaaact gtctgcttac ataaacagta atacaagggg tgttatgagc
4381 catattcaac gggaaacgtc ttgctctagg ccgcgattaa attccaacat ggatgctgat
4441 ttatatgggt ataaatgggc tcgcgataat gtcgggcaat caggtgcgac aatctatcga
4501 ttgtatggga agcccgatgc gccagagttg tttctgaaac atggcaaagg tagcgttgcc
4561 aatgatgtta cagatgagat ggtcagacta aactggctga cggaatttat gcctcttccg
4621 accatcaagc attttatccg tactcctgat gatgcatggt tactcaccac tgcgatcccc
4681 gggaaaacag cattccaggt attagaagaa tatcctgatt caggtgaaaa tattgttgat
4741 gcgctggcag tgttcctgcg ccggttgcat tcgattcctg tttgtaattg tccttttaac
4801 agcgatcgcg tatttcgtct cgctcaggcg caatcacgaa tgaataacgg tttggttgat
4861 gcgagtgatt ttgatgacga gcgtaatggc tggcctgttg aacaagtctg gaaagaaatg
4921 cataaacttt tgccattctc accggattca gtcgtcactc atggtgattt ctcacttgat
4981 aaccttattt ttgacgaggg gaaattaata ggttgtattg atgttggacg agtcggaatc
5041 gcagaccgat accaggatct tgccatccta tggaactgcc tcggtgagtt ttctccttca
5101 ttacagaaac ggctttttca aaaatatggt attgataatc ctgatatgaa taaattgcag
5161 tttcatttga tgctcgatga gtttttctaa gaattaattc atgagcggat acatatttga
5221 atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc
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5341 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga
5401 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
5461 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
5521 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag
5581 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa
5641 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac
5701 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgcca
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0548/pCDEF-FLAG-IRF3人源基因质粒 |
| P0549/pCDNA3-NR3C1人源基因质粒 |
| P0550/C-Myc人源基因质粒 |
| P0551/SOX2人源基因质粒 |
| P0552/HA-p73α-pCDNA3人源基因质粒 |
| P0553/pEGFP-C3-STING人源基因质粒 |
| P0556/pCDNA3.1(+)-hIAPP人源基因质粒 |
| P0557/pCDNA3.1-adiponetin人源基因质粒 |
| P0560/pCDNA3-FLAG-DHX36人源基因质粒 |
| P0621/pCMV-SGLT1人源基因质粒 |
| P0561/pCMV-FLAG-PDK1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
查、基因筛选及图位克隆有益基因的最好材料，也是永久保存基因资源的最好方法之一。 至于作用就太多了，你自己google一下，发现的是你好多做不了，而不是不知道怎么做？ huangyuan62 楼主,请问能交换你的BAC质粒吗？pBACe3.6,pBeloBAC11等都可以。 本人有以下质粒和菌种,可全部用于交换 pET28a,pET32a,pETDsb,pETGST,pETTrx，pTrc—CKS, pGEX4T
shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图: 现有两个问题想请教各位高人 （1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？ （2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该
分，一是未稳定整合的，一是稳定整合的，所以开始时亮度要高。 2.为什么筛选后单克隆无荧光：首先，经过G418筛选，外源质粒不能整合入染色体的细胞死亡；其次，稳定整合的细胞外源质粒整合的位置存在位置效应，即整合于不利于外源基因表达的位置，从而使外源基因沉默；第三，我不知道你的质粒中是否加入了核糖体进入位点序列，如果有的话，研究显示该位点前后的基因表达水平存在不同，可以查查相关文献 3.有无好的办法：我认为没有，稳定转染筛选时有运气的成分，假如外源质粒恰好整合到了利于表达的染色体部位，这时筛
pET28a-H-FABP人源基因质粒
￥100 - 1000
