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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_000297.3
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCR4-PKD2人源基因质粒
别称: NM_000297.3
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
Homo sapiens polycystin 2, transient receptor potential cation channel (PKD2), mRNA。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6824 bp ds-DNA circular SYN 21-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6824
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
primer_bind 205..221
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 242..260
/label=T3 promoter
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
CDS complement(268..3174)
/codon_start=1
/label=pKD2
/translation="MVNSSRVQPQQPGDAKRPPAPRAPDPGRLMAGCAAVGASLAAPGG
LCEQRGLEIEMQRIRQAAARDPPAGAAASPSPPLSSCSRQAWSRDNPGFEAEEEEEEVE
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IKECYDVYSVSSEDRAPFGPRNGTAWIYTSEKDLNGSSHWGIIATYSGAGYYLDLSRTR
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promoter complement(3197..3215)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
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/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS 4027..4821
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Kan
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
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CDS complement(5071..5931)
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/gene="bla"
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/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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LIKHW"
rep_origin 6055..6643
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 agcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc
61 acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc
121 tcactcatta ggcaccccag gctttacact ttatgcttcc ggctcgtatg ttgtgtggaa
181 ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa acagctatga ccatgattac gccaagctca
241 gaattaaccc tcactaaagg gactagttca tacgtggaca ttagaactcc catttccacc
301 tgcaccttcc atgccttctg tagattggga ggaagatggg cgggagcttc tggggcgagg
361 ttgaccattt agtcccactg gcgtgcctaa accatgactg atctgggaag ctgcatcatc
421 ggattcccag cgttccaact cttcacgtac tagccgttcc atctgttccc tatggatttc
481 actgtcacga cccagccttt catcctcggc caccccatcc aacagccttc ccagcacctc
541 cctcctcttc agtttggctc gctccataat ctctagcttc acgatcacgg cgtcaatctt
601 ggacactatg ctgccgatgg aatgctccat ccggtccact cgtctcacca ggacttgaaa
661 ctcttcgtaa gaaacgccac tagaaatgct tcccctcctt ctggagctat gtccgctatc
721 ttcatcgtca tcctcctcag agtcatccag gcttcgaggg aaacttcggc tgctcatggg
781 acgtggtaaa gaactgtgat ccaaatccag gtcctccctc tctttctcca agtcgtctct
841 catctgctga tgttcatgtt cggtcagttc ttggtctcca tcttggtcgt actttgtgaa
901 tattgcctca atctctgcat cagtatggcc cttccctttg agatcttgtc gaagttcgtc
961 aaagtttaac ttgcctcctc cttgccgcag actctctgaa atgtcatcca cggtattttt
1021 tttcagtttt agtttgacca aagctttatg gtagcccttt ctgataagat ctgagagttc
1081 catttcagct ttctgctgtg ccaagtcaga tttcacttca gagtaagtat cattgatgat
1141 agccaaaaac atattcaaaa gaatgaagaa cataaagaac acaaatgtag tgaaataaat
1201 tggtcccaaa actcgattag cttcctcaat ctctgcaaag ttgatatcgc ccaaaatgat
1261 acggaattga gtgaagatac actcttggaa agtactgaag tcatcgacct gagtgccaaa
1321 gacaaggtat gccaactgag catacgctag gaaaataatg aagaacataa tagcaaagcc
1381 aaacaggtct ttggcacatc gagacatggt tgtcgagagc tggctcatgg tcctgttaaa
1441 attgatgaat ttgaagagct taatccagac aaaaaatact gtgacagcag ctatattgtt
1501 gaactgtatc tgccaatatg ccagatgctc aaagttgggg aaagtatttt gatcttccag
1561 aaactgtagt agcacctcca catttgatgt tctgtatatg ttaattccta tagctaccac
1621 tgacagcaca acgatcacaa catccagaca attccagaaa ctcctgaaat agtgtagttt
1681 gtgaatgcga atttccaata tctcttccac cacatagtaa aagataaaga aacaaaagat
1741 aatctcacag gctgccagga agaaatcaaa agttgtgaca tatcggatca gctttaaagg
1801 ctgaaattgc caagatggaa tcacaccacc tgttgctggg aattcaacca ataacctgac
1861 cacacagaac aggttaatgt tggcgttgta cactgagaag tcaataaaag ttgccctggt
1921 tcctcggtcc agccagacat ttttcttgag gctagcaact tgtgcagctg tttcctctct
1981 tgttcttgac aaatccagat aatagccagc tccactataa gttgcaatga ttccccagtg
2041 gctactacca ttcaagtctt tttcacttgt gtagatccaa gcggttccat ttcggggccc
2101 aaagggagcc ctatcttcac tactgacaga gtagacatca tagcactctt taatttcatc
2161 tctcaagtcc tgggggatag agcaggatcc atttctgact cggagttgcc gtattcgtgg
2221 aacccctaac agcaggttct catagaagat gaaacttcgg ttgtcagctt cagtctggtt
2281 gctgggctgc atcttccagt acagcccatc caataaggag ccttctgtga acttccagaa
2341 gtcttccatg gaagacagag ttttaaagtt agttttctcc gttttggaca cgggggtgtc
2401 taggaagagc tgtgacatca tccgggtgta gtagtacaca ttggagctca tcatgccgta
2461 ggtcaagatg cacaagacta tgagaaaaag gaggtatgtg accagttccc gtaaaacact
2521 tttaaggtat ttctctcggt tagtgctgct ttcctccatg agtcttgttc cccagagacc
2581 tcgcagcccg cgaaccagcc tctccgccca ggccactcgg ggcggctgcc cttccagggg
2641 gaggtggcga tgcagcgggt ccccgccgcc gactgggctg gggcacggcg ggccctggtc
2701 ctctcgccgg cgccgcctcc cgctcgggtg gcccgcgccg tggtagcccc caagcccccg
2761 gctccgcgcg cccacggagc tcacggccga ggaggcggcc gacctccggc tgcccgggcg
2821 ccactctacg tccatctcca ccaccattcc gccttcttcc ccttccacct cctcctcctc
2881 ctcctcggcc tcgaagccgg ggttatcgcg gctccacgcc tgccgggagc acgacgagag
2941 cggaggagaa ggggaggccg cggctccggc cggggggtcc cgcgcggccg cctgccggat
3001 gcgctgcatc tcgatctcca ggccccgctg ctcgcagagg ccgcccgggg cggcgaggct
3061 ggcgcccacg gccgcgcagc cagccatcag ccggcccggg tccggcgcgc ggggcgcggg
3121 cggccgcttg gcgtccccgg gctgctgagg ctgcacgcga ctggagttca ccatgcggcc
3181 gctaaattca attcgcccta tagtgagtcg tattacaatt cactggccgt cgttttacaa
3241 cgtcgtgact gggaaaaccc tggcgttacc caacttaatc gccttgcagc acatccccct
3301 ttcgccagct ggcgtaatag cgaagaggcc cgcaccgatc gcccttccca acagttgcgc
3361 agcctatacg tacggcagtt taaggtttac acctataaaa gagagagccg ttatcgtctg
3421 tttgtggatg tacagagtga tattattgac acgccggggc gacggatggt gatccccctg
3481 gccagtgcac gtctgctgtc agataaagtc tcccgtgaac tttacccggt ggtgcatatc
3541 ggggatgaaa gctggcgcat gatgaccacc gatatggcca gtgtgccggt ctccgttatc
3601 ggggaagaag tggctgatct cagccaccgc gaaaatgaca tcaaaaacgc cattaacctg
3661 atgttctggg gaatataaat gtcaggcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc
3721 cttttcacgt agaaagccag tccgcagaaa cggtgctgac cccggatgaa tgtcagctac
3781 tgggctatct ggacaaggga aaacgcaagc gcaaagagaa agcaggtagc ttgcagtggg
3841 cttacatggc gatagctaga ctgggcggtt ttatggacag caagcgaacc ggaattgcca
3901 gctggggcgc cctctggtaa ggttgggaag ccctgcaaag taaactggat ggctttcttg
3961 ccgccaagga tctgatggcg caggggatca agctctgatc aagagacagg atgaggatcg
4021 tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg
4081 ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg
4141 ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat
4201 gaactgcaag acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca
4261 gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc tgctattggg cgaagtgccg
4321 gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat catggctgat
4381 gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa
4441 catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg
4501 gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa ggcgagcatg
4561 cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg
4621 gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat
4681 caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac
4741 cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc
4801 cttcttgacg agttcttctg aattattaac gcttacaatt tcctgatgcg gtattttctc
4861 cttacgcatc tgtgcggtat ttcacaccgc atcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg
4921 cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagatt
4981 atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta
5041 aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat
5101 ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac
5161 tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg
5221 ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag
5281 tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt
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6301 tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca
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6421 cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa
6481 ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc
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6721 ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag
6781 ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaag
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCR4-PKD2人源基因质粒
别称: NM_000297.3
复制子: pUC
| 质粒分类: | 基因文库质粒 |
|---|
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
Homo sapiens polycystin 2, transient receptor potential cation channel (PKD2), mRNA。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6824 bp ds-DNA circular SYN 21-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
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TPVGLNGQPRPRSSRPSSSQSTEGMEGAGGNGSSNVHV"
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LIKHW"
rep_origin 6055..6643
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
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1 agcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc
61 acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc
121 tcactcatta ggcaccccag gctttacact ttatgcttcc ggctcgtatg ttgtgtggaa
181 ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa acagctatga ccatgattac gccaagctca
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541 cctcctcttc agtttggctc gctccataat ctctagcttc acgatcacgg cgtcaatctt
601 ggacactatg ctgccgatgg aatgctccat ccggtccact cgtctcacca ggacttgaaa
661 ctcttcgtaa gaaacgccac tagaaatgct tcccctcctt ctggagctat gtccgctatc
721 ttcatcgtca tcctcctcag agtcatccag gcttcgaggg aaacttcggc tgctcatggg
781 acgtggtaaa gaactgtgat ccaaatccag gtcctccctc tctttctcca agtcgtctct
841 catctgctga tgttcatgtt cggtcagttc ttggtctcca tcttggtcgt actttgtgaa
901 tattgcctca atctctgcat cagtatggcc cttccctttg agatcttgtc gaagttcgtc
961 aaagtttaac ttgcctcctc cttgccgcag actctctgaa atgtcatcca cggtattttt
1021 tttcagtttt agtttgacca aagctttatg gtagcccttt ctgataagat ctgagagttc
1081 catttcagct ttctgctgtg ccaagtcaga tttcacttca gagtaagtat cattgatgat
1141 agccaaaaac atattcaaaa gaatgaagaa cataaagaac acaaatgtag tgaaataaat
1201 tggtcccaaa actcgattag cttcctcaat ctctgcaaag ttgatatcgc ccaaaatgat
1261 acggaattga gtgaagatac actcttggaa agtactgaag tcatcgacct gagtgccaaa
1321 gacaaggtat gccaactgag catacgctag gaaaataatg aagaacataa tagcaaagcc
1381 aaacaggtct ttggcacatc gagacatggt tgtcgagagc tggctcatgg tcctgttaaa
1441 attgatgaat ttgaagagct taatccagac aaaaaatact gtgacagcag ctatattgtt
1501 gaactgtatc tgccaatatg ccagatgctc aaagttgggg aaagtatttt gatcttccag
1561 aaactgtagt agcacctcca catttgatgt tctgtatatg ttaattccta tagctaccac
1621 tgacagcaca acgatcacaa catccagaca attccagaaa ctcctgaaat agtgtagttt
1681 gtgaatgcga atttccaata tctcttccac cacatagtaa aagataaaga aacaaaagat
1741 aatctcacag gctgccagga agaaatcaaa agttgtgaca tatcggatca gctttaaagg
1801 ctgaaattgc caagatggaa tcacaccacc tgttgctggg aattcaacca ataacctgac
1861 cacacagaac aggttaatgt tggcgttgta cactgagaag tcaataaaag ttgccctggt
1921 tcctcggtcc agccagacat ttttcttgag gctagcaact tgtgcagctg tttcctctct
1981 tgttcttgac aaatccagat aatagccagc tccactataa gttgcaatga ttccccagtg
2041 gctactacca ttcaagtctt tttcacttgt gtagatccaa gcggttccat ttcggggccc
2101 aaagggagcc ctatcttcac tactgacaga gtagacatca tagcactctt taatttcatc
2161 tctcaagtcc tgggggatag agcaggatcc atttctgact cggagttgcc gtattcgtgg
2221 aacccctaac agcaggttct catagaagat gaaacttcgg ttgtcagctt cagtctggtt
2281 gctgggctgc atcttccagt acagcccatc caataaggag ccttctgtga acttccagaa
2341 gtcttccatg gaagacagag ttttaaagtt agttttctcc gttttggaca cgggggtgtc
2401 taggaagagc tgtgacatca tccgggtgta gtagtacaca ttggagctca tcatgccgta
2461 ggtcaagatg cacaagacta tgagaaaaag gaggtatgtg accagttccc gtaaaacact
2521 tttaaggtat ttctctcggt tagtgctgct ttcctccatg agtcttgttc cccagagacc
2581 tcgcagcccg cgaaccagcc tctccgccca ggccactcgg ggcggctgcc cttccagggg
2641 gaggtggcga tgcagcgggt ccccgccgcc gactgggctg gggcacggcg ggccctggtc
2701 ctctcgccgg cgccgcctcc cgctcgggtg gcccgcgccg tggtagcccc caagcccccg
2761 gctccgcgcg cccacggagc tcacggccga ggaggcggcc gacctccggc tgcccgggcg
2821 ccactctacg tccatctcca ccaccattcc gccttcttcc ccttccacct cctcctcctc
2881 ctcctcggcc tcgaagccgg ggttatcgcg gctccacgcc tgccgggagc acgacgagag
2941 cggaggagaa ggggaggccg cggctccggc cggggggtcc cgcgcggccg cctgccggat
3001 gcgctgcatc tcgatctcca ggccccgctg ctcgcagagg ccgcccgggg cggcgaggct
3061 ggcgcccacg gccgcgcagc cagccatcag ccggcccggg tccggcgcgc ggggcgcggg
3121 cggccgcttg gcgtccccgg gctgctgagg ctgcacgcga ctggagttca ccatgcggcc
3181 gctaaattca attcgcccta tagtgagtcg tattacaatt cactggccgt cgttttacaa
3241 cgtcgtgact gggaaaaccc tggcgttacc caacttaatc gccttgcagc acatccccct
3301 ttcgccagct ggcgtaatag cgaagaggcc cgcaccgatc gcccttccca acagttgcgc
3361 agcctatacg tacggcagtt taaggtttac acctataaaa gagagagccg ttatcgtctg
3421 tttgtggatg tacagagtga tattattgac acgccggggc gacggatggt gatccccctg
3481 gccagtgcac gtctgctgtc agataaagtc tcccgtgaac tttacccggt ggtgcatatc
3541 ggggatgaaa gctggcgcat gatgaccacc gatatggcca gtgtgccggt ctccgttatc
3601 ggggaagaag tggctgatct cagccaccgc gaaaatgaca tcaaaaacgc cattaacctg
3661 atgttctggg gaatataaat gtcaggcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc
3721 cttttcacgt agaaagccag tccgcagaaa cggtgctgac cccggatgaa tgtcagctac
3781 tgggctatct ggacaaggga aaacgcaagc gcaaagagaa agcaggtagc ttgcagtggg
3841 cttacatggc gatagctaga ctgggcggtt ttatggacag caagcgaacc ggaattgcca
3901 gctggggcgc cctctggtaa ggttgggaag ccctgcaaag taaactggat ggctttcttg
3961 ccgccaagga tctgatggcg caggggatca agctctgatc aagagacagg atgaggatcg
4021 tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg
4081 ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg
4141 ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat
4201 gaactgcaag acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca
4261 gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc tgctattggg cgaagtgccg
4321 gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat catggctgat
4381 gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa
4441 catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg
4501 gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa ggcgagcatg
4561 cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg
4621 gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat
4681 caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac
4741 cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc
4801 cttcttgacg agttcttctg aattattaac gcttacaatt tcctgatgcg gtattttctc
4861 cttacgcatc tgtgcggtat ttcacaccgc atcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg
4921 cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagatt
4981 atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta
5041 aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat
5101 ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac
5161 tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg
5221 ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag
5281 tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt
5341 aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt
5401 gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt
5461 tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt
5521 cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct
5581 tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt
5641 ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac
5701 cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa
5761 actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa
5821 ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca
5881 aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct
5941 ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgaccaaaa tcccttaacg
6001 tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga
6061 tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt
6121 ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag
6181 agcgcagata ccaaatactg ttcttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa
6241 ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag
6301 tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca
6361 gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac
6421 cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa
6481 ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc
6541 agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg
6601 tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc
6661 ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc
6721 ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag
6781 ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaag
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3940/pCMV-SPORT6-MOCS3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3941/pCMV-SPORT6-USP18人源基因质粒 |
| P3942/pCMV-SPORT6-RGMA（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4884/pCMV-SPORT6-RAB24人源基因质粒 |
| P4885/pCMV-SPORT6-MXI1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4886/pCMV-SPORT6-ACAP1人源基因质粒 |
| P4887/pCMV-SPORT6-GEMIN4（3点突变）人源基因质粒 |
| P4888/pCMV-SPORT6-SFRS14人源基因质粒 |
| P4889/pCMV-SPORT6-SLC26A6人源基因质粒 |
| P4890/pCMV-SPORT6-FKBP10人源基因质粒 |
| P4891/pCMV-SPORT6-NCAPG2人源基因质粒 |
| P3943/pCMV-SPORT6-MFAP2人源基因质粒 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
BEST" PCR conditions for amplifying DNA from plasmids 25 ng linear template (~6.5 kb) 50 pmol each primer 100 pmol each dNTP 1X Promega Taq buffer (no Mg++) 1.5 mM MgCl2 1 U Taq DNA polymerase in 50 ul final 92°C
1、PCR reaction system: 25 ng linear template (~6.5 kb) 50 pmol each primer 100 pmol each dNTP 1X Promega Taq buffer (no Mg2+) 1.5 mM MgCl2 1 U Taq DNA polymerase in 50 ul final volume2、PCR programme: 92°C / 2' 92°C
质粒快速鉴定 试剂： Protoplasting buffer: 30mM Tris-HCl, pH8.0 0.33ml/1.0M 5mM EDTA 0.1ml/0.5M 50mM NaCl
pCR4-PKD2人源基因质粒
￥100 - 1000
