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- CELLIGENT
- C01-8305-8
- 2026年04月23日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
CELLIGENT
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9999
- 英文名：
Serum free, Cell Cryopreservation Medium
是一款普遍适用于多种哺乳动物细胞低温冷冻保存的即用型细胞冻存液，经验证本品适用于人间充质干细
胞（hMSC）、中国仓鼠卵巢细胞（CHO）、外周血单核细胞（PBMC）、人胚肾细胞（HEK293）、非洲
绿猴肾细胞(Vero)等类型细胞的冻存。本品化学成分明确，不含有任何蛋白成分，可排除血清或蛋白潜在
的病原体或免疫反应风险，使用更安全，并能够保持多种细胞的复苏活率在 90%以上。
产品特点
● 安全：无血清，无动物源成分，化学成分明确；
● 广谱：普遍适用于多种类型细胞系（如 hMSC、PBMC、CHO、HEK293、Vero 等）；
● 高效：细胞复苏率高，多种细胞的复苏活率在 90% 以上；
● 方便：即用型，无需额外配制；
● 简捷：可适用于细胞冻存多种简化操作，可适用非程序化冻存，亦可适用-80℃环境保存。
一、细胞冻存
以下操作以脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）的冻存为例简述细胞冻存液的操作方法，hUC-
MSCs 的培养推荐使用无血清培养基培养。
1. 将生长状态良好的 hUC-MSCs，用重组胰蛋白酶消化 2min，用胰蛋白酶抑制剂终止消
化，重悬细胞，300g 离心 5 分钟，弃上清;
提示：对于悬浮培养细胞，可直接离心收集细胞。
2. 加入适当体积的 PBS 重悬细胞，细胞计数，计算细胞总量；
3. 再次以 300g 离心 5min 收集细胞，弃上清；
4. 根据冻存密度需要，添加适量 无蛋白 细胞冻存液，反复吹吸 4-5 次使细胞分散均匀，重
悬细胞；
提示：冻存密度可根据需要调整，贴壁细胞冻存密度推荐 0.5-5×106 /mL，悬浮细胞如 CHO 等推
荐0.1-2×107 /mL。
5. 将细胞悬液转移至冻存管内，旋紧管盖，做好标记；
6. 将冻存管放入程序降温盒内，转移至-80℃冰箱过夜（或储存 6h 以上）；
7. 将细胞冻存管从-80℃冰箱内取出，迅速转移至-196℃液氮或气相罐中长期保存；
提示：对于较长期保存细胞，建议每 5-10 年复苏鉴定细胞状态。
二、细胞复苏
1. 复苏准备：开启水浴锅，调整温度，使水浴锅内水温稳定在 37℃；细胞培养基 37℃预
温；确认细胞存放的位置；
2. 取出细胞，确认标签，迅速转移至 37℃水中，不断摇动冻存管并观察其中的冰块解冻情况
（约需要 2~3min）；
3. 当冻存管中的冰块即将完全融化时，将其从水浴锅中取出，用 75%酒精充分清洁外表面
后，移入生物安全柜或超净工作台内；
提示：摇动时避免水浴浸没冻存管盖；尽量缩短解冻时间；避免冻存管内冻存液溶解后升温。
4. 用 75%酒精棉球再次清洁冻存管口、管壁；
5. 打开冻存管，用移液器轻柔混匀后，将细胞悬液转移至预温的完全培养基内，轻柔吹打悬
液，使细胞混合均匀；
提示 1：逐滴加入，或轻柔操作，每毫升冻存液推荐加入至 5-10mL 完全培养基内。
提示 2：洗涤并收集冻存管内残液，有利于提高细胞复苏回收率。
6. 300g 离心 5min，收集细胞，弃上清；
7. 加入适量培养基再次重悬细胞，进行细胞计数，计算细胞密度；
8. 按照细胞类型或研究需要，接种适当密度的细胞至合适的培养器皿内，摇匀后，转移至培
养箱中培养。
注意事项
1、冻存细胞分装至冻存管后，应减少在室温/4℃存放时间，尽快移入到-80℃超低温冰箱；
2、对于原代胚胎干细胞/iPS细胞/其它珍贵细胞样本等冻存时，我们建议您在使用前，事先对
所冻存的细胞进行至少为期 1周的细胞冻存测试实验，确认没问题后再进行正式冻存。
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文献和实验一段时间的生长后收集细胞上清液。但是这两种方法都会存在一定的不足的，去外泌体血清难以做到 100% 的去除的，因此即使 1% 的血清外泌体残留也带来大量的异源外泌体，而外泌体专用无血清培养基，也不是适合所有的细胞，常见的肿瘤细胞培养通常都可以维持生长，而那些血清培养都困难的细胞就难以通用了，所以也需要一些预实验的摸索。 还有，那些 DMEM、1640、F12 的基础培养基是否可以替代血清或者外泌体专用无血清培养基呢？这样是不行的。因为细胞在这些基础培养基的环境下，是处于饥饿状态的，细胞会将培养
培养 24 - 48 h，细胞汇合度达到 80% - 95% 左右时收取上清，该上清液即可用于提取外泌体。 使用外泌体专用无血清培养基： 待细胞汇合度~50%时，移去原有完全培养基，添加新培养基进行培养，新培养基由 50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基组成； 待细胞生长汇合度约为70-80%时，移去培养基； 使用1×PBS溶液将细胞润洗2-3次； 加入外泌体专用无血清培养基继续培养24 - 48 h，待细胞汇合度到 80% - 95% 时收取细胞培养上清液，该上清液即可用于外泌
高，湿度大，各位小伙伴们辛苦做实验的同时，一定记得按照规范操作和保存实验用品，注重实验室通风和安全哦~1 Wshtbio 蛋白电泳预制胶这是一款美国 EZBiolab 公司开发高性能超低成本聚丙烯酰胺预制凝胶，专利凝胶和缓冲液配方，分辨率高，条带清晰，电泳效果极佳。胶夹打开轻松，电泳时间短，40-50 分钟即可完成。兼容市场上主流的 mini 电泳槽， 凝胶中不含 SDS，可用于变性及非变性电泳。2 NCM Biotech 无血清细胞冻存液CELLSAVING® 是一种即用型无血清细胞冻存液，通
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