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- Xybio
- 上海
- P3882
- 2025年12月08日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_001184876.2;GASP2
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCMV-SPORT6-PSMD3（1点突变1同义突变）人源基因质粒
别称: NM_001184876.2;GASP2
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pCMV-SPORT6-GPRASP2人源基因质粒。
质粒图谱
质粒序列：祥询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3596/pCMV-SPORT6-HIST1H2BK人源基因质粒 |
| P3597/pCMV-SPORT6-GNB4（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3598/pCMV-SPORT6-IFRD1人源基因质粒 |
| P3599/pCMV-SPORT6-TTC4-T139A人源基因质粒 |
| P3600/pCMV-SPORT6-ASB9人源基因质粒 |
| P3601/pCMV-SPORT6-VWA5A人源基因质粒 |
| P3602/pCMV-SPORT6-FADS2人源基因质粒 |
| P3603/pCMV-SPORT6-PIGG人源基因质粒 |
| P3604/pCMV-SPORT6-KIAA1429人源基因质粒 |
| P3605/pCMV-SPORT6-FANCA（点突变）人源基因质粒 |
| P4211/pCMV-SPORT6-ODF2人源基因质粒 |
| P4212/pCMV-SPORT6-GFM2人源基因质粒 |
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文献和实验的克隆方法将目的基因克隆进入门载体。 （2）混合包含目的基因的入门克隆和合适的目的载体以及Gateway LR Clonase酶，构建表达克隆。（表达克隆用来在合适的宿主中进行蛋白的表达和分析。） 有几种方法可以构建Gateway入门克隆。无论您选择何种方法，创建的入门克隆都是准备用来与各种目的载体进行重组。 （1）PCR克隆（定向TOPO克隆至入门载体或与供载体B×P重组） （2）限制性内切酶消化和连接进入入门载体 （3）使用pCMV•SPORT6或pEXP-AD502*构建
为多顺反子。 5、 顺式作用元件：是指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的特异DNA序列。包括启动子、上游启动子元件、增强子、加尾信号和一些反应元件等。 6、 反式作用因子：是指真核细胞内含有的大量可以通过直接或间接结合顺式作用元件而调节基因转录活性的蛋白质因子。 7、 启动子：是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列。 8、 增强子：位于真核基因中远离转录起始点，能明显增强启动子转录效率的特殊DNA序列。它可位于被增强的转录基因的上游或下游，也可相距靶基因较远
siRNA和转染试剂的用量。具体优化方法可以在Entranster-R的说明书上看到。经过优化后，据我们和客户的经验，对NIH3T3，沉默效率应该可以达到80％以上。 （2）在沉默的峰值点观察结果，如在mRNA水平，可在24-48小时观察，在蛋白水平，可在更长时间如48-72小时观察。具体时间根据具体基因的表达情况确定。 （3）优化转染时的细胞数量。转染时较少的细胞数量，可延长观察时间，同时避免由于细胞密集造成的抑制。 3、问：21nt,22nt,24nt的siRNA如何进行电泳分辨
