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Y2HGold酵母双杂交菌
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负20度
3个月
100
钦胜生物
2UG
产品信息:
使用说明: 收到甘油菌后,请及时在固体平板上划线培养,挑取单菌落接种到液体培养基中,震荡培养后使用并保存甘油菌。基因型:MATa,trp1-901,leu2-3,112,ura3-52,his3-200,gal4Δ,gal80Δ,LYS2::GAL1UAS–Gal1TATA–His3,GAL2UAS–Gal2TATA–Ade2URA3: :MEL1UAS–Mel1TATAAUR1-C MEL1基本信息:培养基:YPDA菌株类别:酵母菌培养条件:28℃,有氧,YPDA质粒转化:电激保存方式:30%甘油,-20℃基本应用:用于酵母双杂交备注:菌株简介:Y2HGold菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母双杂实验用菌株,MATa型,可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker为: trp1, leu2,报告基因为:AbAr, HIS3, ADE2, MEL1。Y2HGold -GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用:PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1,用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白;质粒PGADT7的筛选标志为LEU,用于表达AD(GAL4 C端768 ~881 位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4系统原理:一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域:位于N端1 ~ 174位氨基酸区段的DNA结合域(DNA-BD)和位于C端768 ~881 位氨基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS,并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录,但当二者接近时,则呈现完整的GAL4活性,使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下,BD不与AD结合,将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合,形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和 prey 融合蛋白(prey-AD),如果 bait 和 prey发生相互作用,就会促使 BD 和 AD 的相互接近,形成完整的GAL4,从而激活报告基因的转录。Y2HGold有四个报告基因:AbAr, HIS3, ADE2, MEL1,分别由三种不同的启动子(G1,G2,M1)启动,这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同,其余部分均不同,大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。此外新报告基因AbAr与以前的营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点,也可以降低酵母双杂假阳性发生的概率。注意事项:1、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。本产品仅可用于实验室研究,不能用于动物,人体以及作为食品添加剂等用途。2、使用甘油菌时可不完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可,也可完全融解后使用,但随着冻融次数的增加,菌株的活力会逐渐下降。
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