产品介绍
pHDE-35s-Cas9-mCherry植物编辑质粒
基本信息
启动子: CaMV 35S promoter
复制子: pUC ori,pVS1 oriV
终止子: 3A terminator
质粒分类: 植物系列质粒;植物编辑质粒;植物Cas9质粒
质粒标签: C-SV40 NLS
原核抗性: 壮观霉素Spe
筛选标记: 潮霉素Hygro,红色荧光蛋白mCherry
克隆菌株: DH5a等大肠杆菌
培养条件: 37℃,有氧,LB
表达宿主: 拟南芥等植物
诱导方式: 无需诱导,组成型表达
5'测序引物: 35S:GACGCACAATCCCACTATCC
3'测序引物: 3A-R:CCATTTGCATTTTGATGTCC
质粒简介
pHDE-35S-Cas9-mCherry质粒可以在植物中表达Cas9酶和mCherry红色荧光蛋白,可视化基因编辑操作。For CRISPR/Cas9 mediated gene editing in Arabidopsis; provides a visual screen for Cas9-free plants.
质粒图谱
pHDE-35s-Cas9-mCherry植物编辑质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pHDE-35s-Cas9-mCherry植物编辑质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。