产品介绍
pCDH-ECMV-MCS-3×FLAG-EF1α-ZsGreen1-T2A-Puro慢病毒表达质粒
基本信息
启动子: ECMV promoter
复制子: pUC ori,SV40 ori
终止子: WPRE
质粒分类: 病毒系列质粒;慢病毒类质粒;病毒表达质粒
质粒大小: 8538bp
原核抗性: Amp(100μg/ml)
筛选标记: ZsGreen1,Puro
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37℃,LB,有氧
表达宿主: 293T等哺乳细胞
培养条件: 37℃,5%CO2
诱导方式: 无需诱导
5'测序引物: CMV-F(CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG)
3'测序引物: EF1-R(CTAGGCACCCGTTCAATTGC)
质粒简介
pCDH-ECMV-MCS-3×FLAG-EF1α-ZsGreen1-T2A-Puro质粒是在pCDH载体的基础上改造而成,CMV启动目的基因表达,C端的3×FLAG融合标签能很好的被FLAG抗体识别。该质粒可作为过表达质粒直接转染哺乳细胞,也可包装成慢病毒侵染细胞。质粒本身带有ZsGreen1荧光蛋白和Puro筛选标记,可利用荧光显微镜观察转染效率,也可用嘌呤霉素筛选转染后的细胞得到阳性克隆。
质粒图谱
pCDH-ECMV-MCS-3×FLAG-EF1α-ZsGreen1-T2A-Puro慢病毒表达质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pCDH-ECMV-MCS-3×FLAG-EF1α-ZsGreen1-T2A-Puro慢病毒表达质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。