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pET30a-EcoRV大肠表
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负20度
3个月
100
钦胜生物
2UG
pET30a-EcoRV大肠表达质粒
基本信息
启动子: T7/laco promoter
复制子: ColE1 ori,F1 ori
终止子: T7 terminator
质粒分类: 大肠杆菌载体;PET系列表达质粒
质粒大小: 5248bp
质粒标签: C-6×His
原核抗性: 卡那霉素Kan
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 37℃,有氧,LB
表达宿主: 大肠杆菌BL21(DE3)
诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物: T7:TAATACGACTCACTATAGGG
3'测序引物: T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG
质粒简介
pET30a-EcoRV质粒是根据pET-30a改造过来,用于制备表达型T载体,具体为通过EcoRV单酶切将载体切成线性平末端DNA,然后通过Taq酶加T制备成T载体。
质粒图谱
pET30a-EcoRV大肠表达质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pET30a-EcoRV大肠表达质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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