产品介绍
pET-17b大肠表达质粒
基本信息
启动子: T7
复制子: ColE1 ori
终止子: T7 terminator
质粒分类: 大肠系列质粒;大肠表达质粒;pET系列质粒
质粒大小: 3306bp
质粒标签: N-T7
原核抗性: 氨苄青霉素Amp(100μg/ml)
克隆菌株: DH5α等大肠杆菌
培养条件: 37℃,有氧,LB
表达宿主: BL21(DE3) 等大肠杆菌
培养条件: 37℃,有氧,LB
诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物: T7(TAATACGACTCACTATAGGG)
3'测序引物: T7-ter(TGCTAGTTATTGCTCAGCGG)
质粒简介
pET-17b质粒是一种原核表达载体,N端含有一个T7标签。该质粒含有多个常用的酶切位点,便于不同基因克隆。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导,目的基因被克隆到质粒载体上,受噬菌体强转录及翻译信号控制。
pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统,也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下,可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。
The pET-17b vector carries an N-terminal 11aa T7?Tag? sequence followed by a region of useful cloning sites. Included in the multiple cloning region are dual BstX I sites, which allow efficient cloning using an asymmetric linker. Unique sites (except for the two BstX I sites) are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circluar map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below.
质粒图谱
pET-17b大肠表达质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pET-17b大肠表达质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。