产品介绍
pCMV-HA-Ub人源基因质粒
基本信息
启动子: CMV promoter
复制子: ori
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒分类: 基因文库质粒;人源质粒;泛素化系列质粒
质粒大小: 3997bp
质粒标签: N-HA
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
筛选标记: 无
克隆菌株: DH5α
培养条件: LB,37℃
表达宿主: 哺乳细胞
诱导方式: 无需诱导
5'测序引物: CMV-F:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物: Sv40-polyA-R:GAAATTTGTGATGCTATTGC
质粒简介
人类Ubiquiitin基因有四个,编码同一个蛋白,称为Ubiquitin分子,这四个基因的mRNA水平存在些许差异,但是蛋白序列是一样的。其中最常见的是Ubiquitin C(UBC)、Ubiquitin B(UBB)基因,UBC mRNA编码六个重复的Ubiquitin分子,UBB编码四个重复的Ubquitin分子,所以外源克隆的HA-UB一般只克隆了一个ub分子,也就只有76个氨基酸,如果您需要连续几个Ub的那种,可以委托我们做亚克隆,HA-ub(n),n=1.2.3.4.5.6.....
Homo sapiens ubiquitin C (UBC), mRNA,NCBI Reference Sequence: NM_021009.6
质粒图谱
pCMV-HA-Ub人源基因质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pCMV-HA-Ub人源基因质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。