产品介绍
FU-tet-o-hOct4人源基因质粒
基本信息
启动子: minimal CMV promoter
复制子: pUC ori,F1 ori,SV40 ori
终止子: WPRE
质粒分类: 基因文库质粒;人源基因质粒;人源真核质粒
质粒大小: 9471bp
原核抗性: Amp(100μg/ml)
筛选标记: Zeo
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37℃,LB,有氧
表达宿主: 293T等哺乳细胞
培养条件: 37℃,5%CO2
诱导方式: 四环素调控
5'测序引物: miniCMV-F(GCGTGTACGGTGGGAGGCC)
3'测序引物: WPRE-R(CATAGCGTAAAAGGAGCAACA)
质粒简介
pFU-tet-o-hOct4质粒是一个人源Oct4基因的哺乳细胞慢病毒过表达质粒,minimal CMV promoter启动Oct4目的基因的表达。该质粒可作为过表达质粒直接转染哺乳细胞,也可包装成慢病毒侵染细胞。质粒本身带有Zeo筛选标记,可用博来霉素筛选转染后的细胞得到稳转细胞系。基因NCBI信息:Homo sapiens POU class 5 homeobox 1 (POU5F1), transcript variant 1, mRNA;NCBI Reference Sequence: NM_002701.5.
质粒图谱
FU-tet-o-hOct4人源基因质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
FU-tet-o-hOct4人源基因质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。