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晶莱生物
特殊包埋(细胞、材料、眼球等)
样本
将取出的肌肉置于含 5% 戊er醛的 0.1mol/l 二甲SHEN酸Na缓冲液内,PH 值为 7.2, 原位固定 5 min(戊er醛常由 25% 溶液稀释而成。因其易聚合,所以使用之前应保存于 4℃ 以下)。
将肌纤维切成 10 mm 长,以确保至少含有一个肌梭,用上述相同固定液再固定 4~14d(总固定时间因实验室而异,固定时间的差异一般不会明显影响固定效果)。
缓冲液清洗 30 min。
脱水和包埋
室温下将标本用 70%、95% 和 100%(两次)的梯度乙醇脱水,每次 10 min。
用 1:1 的乙醇与环Y丙烷(1,2-环Y丙烷)混合液处理 15 min[环Y丙烷常用作中间溶媒,在石蜡包埋法中发挥类似「透明剂」的作用。大多数透明剂的折射指数与脱水蛋白及其他细胞内成分相似。该名称的由来是因为最初它们被用来固定透明的组织,虽然现在知道它们几乎没有这样的功能,但这个名称一直沿用至今。其他脱水方法见 Glauert(1975)]。
环氧丙烧处理 15 min。
用 1:1 的环氧丙烧与 Epon 的混合物(除了加速剂以外的成分)浸透,置入敞口的容器内,通风橱内过夜(挥发的环Y丙烷能帮助硬化剂更好地向组织块渗透)。
倒掉瓶内剩余的渗透媒质,移入新鲜的纯 Epori 中。
切片和染色
借助常规玻璃刀用超薄切片机手动切片,片厚 1/um,每 10 张切片收集为 1 组 (如需要,可用带氯仿蒸气的刷子靠近切片或通过电热丝的辐射热使切片平铺于水面上。玻璃刀应该经常更换,更换时应注意玻璃刀的准确复位,使用机械开关控制刀的运动以确保连续切割时能得到相同的切片。由于刀与组织块表面间的距离仅有几个微米,为了在更换新刀后仍能准确定位,可将刀背照亮,此时刀刃与组织块表面的缝隙看起来呈一条亮线)。
用钻石刀将盖玻片(标准尺寸为 50 mmX20 mm) 切割成 3 mm 宽的窄条,将窄条的一端浸入液面下直接从水槽内收集切片(图 1-1A)(这些切片有的排列成串,有的单独存在。用一根粘有睫毛的牙签可以很容易地将切片导入窄条的表面,窄条需用钟表镊夹持,. 将窄条的一面靠近切片呈舌尖样伸出的一端,再使切片干燥,这个方法既简便又能使切片很好地粘附在窄条玻片上)。
用软的织物将窄条的背面擦干,任切片漂浮在窄条前端的水滴中。
用一块温度约为 70”C 的热板使切片干燥并贴附于窄条表面 [最好将一块玻璃载玻片永久性地固定于热板上,而将窄条置于载玻片上烘干(图 I-IB)]。
用甲苯胺蓝(toluidineblue)(图 1-2A) 和派罗宁(pyronine)(图 1-2B) 在尚 pH 值条件下染色,将一滴染液滴于切片表面,加热直到染液滴从边缘处开始干燥为止。水洗后用 95% 乙醇分色 [染料配制:将 0.1 g 甲苯胺蓝、0.05 g 派罗宁和 0.1 g 硼砂 (四硼酸钠)溶于 60 ml 蒸馏水即可,配好的染液应定期过滤]。
晶莱生物服务流程
晶莱生物实验服务项目
动物实验 | 细胞生物学 | 病理实验 |
消化系统模型 | 细胞培养 | 病理染色 |
胃酸分泌模型 | 普通细胞株 | HE染色 |
脓毒症模型 | 细胞缺氧培养 | 油红O染色 |
胃溃疡模型 | 细胞培养+支架 | 番红固绿染色 |
胰腺炎模型 | 干细胞培养 | Masson染色 |
肝纤维化模型 | 原代细胞分离/提取/培养 | 天狼猩红染色 |
DIO肥胖模型 | 细胞转染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
胆结石模型 | Trans well共培养 | 阿利新蓝染色 |
结肠炎(UC)模型 | 细胞增殖 | 甲苯胺蓝染色 |
脂肪肝模型 | 细胞计数 | 尼氏染色 |
急性肝损伤模型 | 生长曲线测定 | LFB髓鞘染色 |
免疫、代谢系统疾病模型 | 存活曲线测定 | 普鲁士蓝染色 |
骨质疏松模型 | ccK-8增殖检测 | VG染色 |
糖尿病模型 | MTT增殖检测 | EVG染色 |
高尿酸血症模型 | CFSE检测增殖-流式检测 | VonKossa染色 |
呼吸系统模型 | BrDU检测-免疫荧光法 | 刚果红染色 |
肺纤维化模型 | 细胞凋亡 | 苏丹黑B染色 |
慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式检测细胞凋亡 | Trap染色 |
急性肺损伤模型 | WB检测凋亡相关蛋白 | 抗酸染色 |
哮喘模型 | 透射电镜观察凋亡小体 | 革兰氏染色 |
肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB显色) | AB-PAS染色 |
支气管炎模型 | Tunel(荧光法,含试剂盒) | 亚甲基蓝染色 |
泌尿生殖系统模型 | DNA ladder法 | 苯胺蓝染色 |
慢性肾衰模型 | 细胞周期 | 荧光 DAPI染色 |
急性肾衰模型 | 细胞显微计数 | 普鲁士蓝染色 |
肾间质纤维化模型 | PI染色 | 间苯二酚碱性品红染色 |
肾结石模型 | BrdU渗入法 | 银染 |
肾炎模型 | 免疫荧光染色 | 黑色素染色 |
子宫内膜异位症模型 | PI流式检测细胞周期 | 镀银染色 |
心血管系统模型 | 细胞运动 | PASM 六胺银染色 |
冠心病模型 | Transwell检测细胞迁移 | VG染色 |
心肌梗死模型 | Transwell检测细胞侵袭 | 富尔根染色 |
心脏骤停模型 | 细胞划痕 | 亚甲基蓝染色 |
慢性心力衰竭模型 | 细胞克隆 | 碘-碘化钾染色 |
动脉粥样硬化模型 | 集落形成法/稀释铺板方法 | Goldner三色法染色 |
白血病模型 | 软琼脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
高血压模型 | 毛细管克隆法 | 改良苯酚品红染色 |
神经系统模型 | 体外实验血管生成 | 网状纤维染色 |
脑卒中模型 | 磁珠分选细胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
栓塞性脑梗死模型 | 流式分选细胞 | 镀银染色 |
脑出血模型 | 开机费 | movat五色染色 |
脑损伤模型 | 单色 | 维多利亚蓝染色 |
脊髓损伤模型 | 双色 | 免疫组化 |
帕金森模型 | CBA多细胞因子流式检测 | 免疫组化预式 |
老年痴呆模型 | 组织/血液细胞制备 | 免疫组化正式 |
应激模型 | 组织单细胞制备 | 免疫荧光(石蜡-单标) |
骨骼疾病模型 | 中性粒细胞提取 | 免疫荧光(石蜡-双标) |
骨折模型 | 其他样本细胞制备(如血液等) | 免疫荧光(石蜡-三标) |
骨缺损模型 | 外周血PBMC分离 | 免疫荧光(冰冻-单标) |
风湿免疫性关节炎模型 | 线粒体组学 | 免疫荧光(冰冻-双标) |
骨关节炎模型 | 线粒体膜电位检测-流式法 | 制片前处理 |
五官疾病模型 | 线粒体膜电位检测-免疫荧光法 | 石蜡组织包埋 |
眼科疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--流式 | 特殊包埋(细胞、材料、眼球等) |
鼻腔疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光 | 软化(肝硬化、皮肤结痂、植物等) |
皮肤疾病模型 | 线粒体通透性转换孔(mPTP) | 骨组织脱钙(小) |
皮肤损伤模型 | 溶酶体免疫荧光法 | 骨组织脱钙(大) |
肿瘤疾病模型 | 线粒体+溶酶体共定位 | 骨组织EDTA脱钙(小) |
原位瘤模型 | 内质网 | 骨组织EDTA脱钙(大) |
转移瘤模型 | 线粒体钙瞬时变化检测-流式 | 石蜡白片 |
皮下植瘤模型 | ATP检测 | 细胞爬片 |
ADP检测 | ||
AMP检测 | ||
流式 | DNA/RNA半定量检测 | 基因编辑工具 |
组织细胞悬液处理 | pcr检测mRNA | 合成(3保1)片段/质粒/引物合成 |
细胞处理 | microRNA检测 | 质粒载体构建 |
血液标本处理 | LncRNA表达量的检测 | 过表达腺病毒载体构建包装 |
细胞刺激培养 | CirRNA表达量的检测 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
单色检测 | 凝胶电泳 | 过表达慢病毒载体构建包装 |
双色检测 | 基因合成 | shRNA慢病毒载体构建包装 |
Annexin V/PI凋亡 | <300 | 过表达腺相关病毒载体构建包装 |
细胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
1500 - 5000 | 稳转细胞株 | |
>5000 | ||
特殊序列 | ||
ELISA | WB | qPCR |
组织匀浆处理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
ELISA(不含试剂盒)48T/kit | WB检测一(10孔膜/指标) | mRNA引物设计及合成 |
ELISA(不含试剂盒)96T/kit | 灰度值分析及作图一(10孔膜/指标) | miRNA引物设计及合成 |
ELISA(含国产试剂盒)48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物设计及合成 |
ELISA(含国产试剂盒)96T/kit | WB检测二(15孔膜/指标) | CircRNA引物设计及合成 |
灰度值分析及作图二(15孔膜/指标) | mRNA RT-qPCR | |
miRNA RT-qPCR | ||
LncRNA RT-qPCR | ||
CircRNA RT-qPCR |
收费标准/服务周期/提供结果:
欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
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