250mL/500mL大容量锥形离心管

人外周血PBMC的制备及注意事项

到离心机，500 g 离心 25 min。 小心取出离心管，吸取中间层的白色薄膜层，即为单个核细胞。 用 10 mL PBS 洗涤获得的单个核细胞，250g 离心 10 min，弃上清。 重复洗涤一次。 用细胞染色缓冲液重悬细胞备用。 注意事项： Ficoll 使用时的温度很重要，温度太高或者太低都会影响分离效果。 血液样本最好为新鲜抗凝血（采血 2 h 以内），为保持细胞活力，应避免冷冻和冷藏。 3.50 mL 离心管离心效率比 15 mL 离心管差，为了获得最大量的单核细胞，最好用15

人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南

细胞。小心不要吸入任何气泡。 5. 将解离的细胞收集在 15 mL 锥形管中。将 1 mL 的单细胞传代培养基添加到孔中，并将收集的所有剩余细胞转移到含有细胞悬液的 15 mL 锥形管中。140 x g 离心试管5分钟并吸出上清液。 6. 将细胞沉淀重悬于 1 mL 单细胞传代培养基中。使用自动细胞计数器或Trypan blue (T8154) 和血细胞计数器计算活细胞总数。 7. 将每孔 1x106个细胞加入ECM Gel (CC131) 涂布后的6孔板中。使用单细胞传代培养基（来自步骤 1 ）。总体

类器官培养与应用——卵巢癌类器官

Y27632 - - 10μM -   DMSO - - - 10%     组织处理 1、将取样培养基中的组织转移到培养皿中，用 PBS 多次冲洗至液体变澄清。然后用无菌手术刀剔除脂肪及坏死组织。 2、将组织切割为 1–2 mm3 的小块，此步骤可以留存适量组织用于测序、免疫组化分析等。 3、将所有剩余的组织碎片收集到 30 ml 锥形管中，加入 8 ml 解离培养基，并在 37°C条件下解离 1-2h。每隔 20min，利用移液器机械吹打