250mL/500mL大容量锥形离心管

人外周血PBMC的制备及注意事项

到离心机，500 g 离心 25 min。 小心取出离心管，吸取中间层的白色薄膜层，即为单个核细胞。 用 10 mL PBS 洗涤获得的单个核细胞，250g 离心 10 min，弃上清。 重复洗涤一次。 用细胞染色缓冲液重悬细胞备用。 注意事项： Ficoll 使用时的温度很重要，温度太高或者太低都会影响分离效果。 血液样本最好为新鲜抗凝血（采血 2 h 以内），为保持细胞活力，应避免冷冻和冷藏。 3.50 mL 离心管离心效率比 15 mL 离心管差，为了获得最大量的单核细胞，最好用15

质粒提取

另一瓶中，弃去残留在离心管内的粘稠状液体。未能形成致密沉淀块的原因通常是由于溶液Ⅲ与细菌裂解物混合不充分[步骤4)]。 6)上清过滤至一250ml离心瓶中，加0.6体积的异丙醇，充分混匀，于室温放置10分钟。 7)用合适转头于室温以500转/分离心15分钟，回收核酸。如于4℃离心，盐也会了生沉淀。 8)小心倒掉上清，敞开瓶口倒置离心瓶使残余上清液流尽，于室温用70%乙醇洗涤沉积管壁。倒出乙醇，用与真空装置相联的巴期德吸出附于瓶壁的所有液滴，于室温将瓶倒置放在纸巾上，使最后残余的痕量乙醇挥殆尽

GUS报告基因的定性和定量检测

一、GUS报告基因的定性检测GUS能与显色底物X-gluc 反应，显现蓝色，因而可以通过组织化学染色定性研究GUS的表达水平和表达模式。GUS 染色的稳定性好，组织定位精确，成为在植物中运用很广的报道基因。1. GUS染色底物的配制试剂名称母液浓度母液配制方法工作液浓度工作液配制方法磷酸缓冲液（pH7.2）0.5 M将0.5 M Na2HPO4 和0.5 M NaH2PO4 混合50 mM1 mlTriton X-10010%取10 ml Triton X-100溶于水，定容至100 ml