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- 2025年07月16日
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10
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地塞米松
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支
在细胞培养的过程，有些细胞需要添加各种细胞因子，细胞添加物等，还有些需要马血清，小牛血清等等添加血清，在细胞复苏培养冻存也会用到各种试剂比如胰蛋白酶细胞冻存液等等，这些我们公司都可以提供，客户可以随时咨询我们。有的时候在培养细胞的过程中也会碰到各种问题，比如说支原体污染，黑胶虫污染等等，在培养过程我们需要保持无菌培养状态，而遇到麻烦问题的时候我们又需要解决这些问题。所以在这里我们拣举一些比较常见的培养试剂和细胞培养会遇到的污染举例讲解一下，
L-谷氨酰胺部分相关产品如下，客户如有需要可以向我司咨询购买。
1）、胰蛋白酶（Trypin）是一种丝氨酸水解酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切段，水解细胞间的蛋白质，破坏细胞间的连接，从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关，在PH 8.0和37℃时，胰酶的作用能力最强，因此使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。一般常用胰酶的工作浓度为0.25%，而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度（0.05%）的胰酶进行细胞消化。由于EDTA能够螯合Ca2+和Mg2+，从而破坏细胞连接促进细胞的解离，因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用，以增强解离效果。
2）、平衡盐溶液（Balanced Salt Solution, BSS）也叫生理溶液（Physiological Solution），是集缓冲液的缓冲力、生理盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体的，具有维持渗透压、保持PH稳定以及提供简单的营养的作用，可满足体外实验中组织、器官或细胞的生存和代谢的基本需要。一些平衡盐溶液中还添加了少量酚红，用以指示溶液的酸碱度变化。DPBS全称Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline，中文名称杜氏磷酸缓冲盐溶液，是生物化学研究中常用的平衡盐溶液之一，主要成分包括NaCl、KCl、KH2PO4、Na2HPO4等。根据是否含有钙镁离子将DPBS分为两种，与常规PBS不同的是DPBS磷酸盐的含量稍低。DPBS主要用于胚胎学方面的研究，多用于胚胎的漂洗液，冻存液和培养液。此外，还可以在DPBS中加入葡萄糖等，以更利于培养物的生长。
3）、黑胶虫污染的细胞常见的特性有以下几点：
（1）培养基不浑浊，但在显微镜下观察细胞时，细胞周围和培养液中有很多“小黑点”，且随着培养时间的延长“小黑点”逐渐增多，更换培养液或洗涤细
胞不能将其去除；
（2）“小黑点”污染的细胞，营养消耗快，需要频繁更换培养液；
（3）“黑胶虫”污染的细胞生长缓慢，细胞状态差，空泡化严重，甚至还可能导致细胞形态的改变。
“黑胶虫”清除试剂是本公司开发的新一代产品，含有清除“黑胶虫”的特殊成分。该产品经过了上百种细胞的测试和长期的实验验证，对细胞无害，对清除“黑胶虫”污染效果显著，能够很好的杀灭和抑制“黑胶虫”。
4）支原体（Mycoplasma），又称霉形体，直径在0.1~0.3μm，是目前发现的最小的最简单的原核生物，可以轻松地通过滤膜，混入培养系统中，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分支状等多种形态。通常依附在细胞膜表面，支原体没有刚性的细胞壁，因此普通的抗生素对它根本不起作用。
支原体污染已经成为在细胞培养时的一个严重的问题；在细胞培养中，支原体污染是很广泛的，并且常常被低估（世界各国细胞系支原体污染的平均比例为30-60%，有些国家甚至高达80-90%），导致各种各样问题的产生，包括以下几个方面：细胞生长速率的改变；诱导细胞形态改变；染色体畸变；细胞膜抗原性改变；细胞新陈代谢改变；细胞复苏后存活率降低。支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数，导致实验结果的不准确、甚至完全错误。因此，常规的“支原体”清除培养基是每个细胞培养实验室所必备的。
细胞培养的支原体污染来源主要有：
⒈细胞之间交叉污染；
⒉细胞培养操作人员的口腔、皮肤等；
⒊工作环境或实验器材的污染；
⒋实验者无菌操作不佳；
⒌细胞培养用的组分，如血清、培养液等；
⒍制备细胞的原始组织或器官的污染
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文献和实验年，来自 Jackson Laboratory 的 C.Ostermeier 等人对脱脂牛奶 / 棉子糖冷冻小鼠精子方法的修改，方法是在 CPA（3％脱脂奶和 18％棉子糖组合）中添加单硫代甘油（MTG），这种方法能让 C57BL/6J 品系受精率提高到 60%。近交系 B6 冷冻的方案得到了质的提升，也能满足冷冻需求。 2010 年，Takeo 和 Nakagata 又改良了冷冻方案，即在原来的组合基础上添加了 L-谷氨酰胺，L-谷氨酰胺是血浆和组织中含量最丰富的游离氨基酸，L-谷氨酰胺具有
性，一般与激素或其它物质起相互协同或加成作用。另一种常见的添加物就是血清替代物，目前已有许多可完全或部分替代传统培养液中血清成分的商业产品，其稳定性较好，但批次间仍有差别，产品的成分也不很确定。2、细胞培养基配制 2.1 干粉培养基原倍液的配制 1）配制过滤除菌的细胞培养基 1）阅读培养基使用说明，确定需要添加何种添加剂（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等）。 2）根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水至总体
细胞。在进行免疫学 研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 3.L-谷氨酰胺在细胞培养 中重要吗?它在溶液中不稳定吗? L-谷氨酰胺在细胞培养 时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。 4.GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX
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