(3)此时培养上清内含巨噬细胞分泌的高水平IL-1,收集培养上清,12000 r/min 离心15分钟,将上清移入新的1.5 ml 试管中,-20℃冻存。
2. IL-1的生物学活性测定
(1)胸腺细胞的制备:颈椎脱位处死小鼠,无菌取胸腺至于平皿中,加入5 ml 10%FCS-IMDM培养液,200目不锈钢网制成单个细胞悬液;1500 r/min 离心10分钟,再用5%Hank’s液洗涤细胞2次后,重悬于10%FCS-IMDM培养液中,调细胞浓度为1.0×107/ml。
(2)加样:取胸腺细胞加入96孔细胞培养板,0.1 ml/well。再加入IL-1待测样品或IL-1标准品,50 ul/well,实验孔再加入50 ul ConA(终浓度0.625 ug/ml),同时设培养液对照孔(0.1 m l细胞+0.1 ml 培养液)、ConA对照(0.1 ml 细胞+50 ul 培养液+50 ul ConA),均设3复孔。37度,5%CO2孵育36~60小时。