一、实验准备
雄性BALB / c裸鼠10只,6 wk龄,体质量20 g左右,均在SPF条件下层流架内饲料饮水自由摄入。 Du145细胞系用含100 mL /L胎牛血清(杭州四季青公司)的RPM I 1640培养液(美国Gibco公司)在37℃,50 mL /L CO2 的孵箱内培养,以1. 25 g/L胰酶和0. 2 g/L EDTA的混合液消化传代。
二、具体操作
1. 裸鼠用10 g/L戊巴比妥钠( 75 mg/kg)麻醉,仰卧位,胶带固定四肢,下腹部正中横切口1 cm,暴露膀胱和精囊腺,用棉签轻压膀胱顶壁、腹侧壁,并向下游离至膀胱颈,推开肌肉及生殖腺进一步暴露前列腺,可见其大小约1. 0 mm ×1. 5 mm ×2. 0 mm,分左右2叶,呈粉红色,有明显的腺体组织特征。
2. 用1 mL TB 针筒、29G针头轻轻挑起一侧前列腺包膜,缓慢进针,直至顶起对侧包膜,明确针尖进入包膜后,再缓慢推注Du145细胞悬液50 μL (6 ×106 个) ,以包膜向上鼓起,脱离腺体表面为满意标准。
裸鼠因其免疫缺陷特性成为建立人类肿瘤动物模型的最佳载体。以往制作前列腺癌裸鼠模型时多选择皮下作为荷瘤部位,接种方便、易于观察,但是根据Paget的“种子与土壤”( Seed and Soil)学说,肿瘤的生长和转移依赖于一个合适的微环境,因此原位种植较皮下接种具有更高的致瘤率和转移机率,且皮下移植瘤模型并不能很好地模拟前列腺癌在人体内的自然生长过程以及许多生物学行为,而原位种植不仅使肿瘤细胞获得了更接近人体内的生长微环境,而且其中丰富的内源性生长因子,能够提高移植成功率,并形成与临床相似的转移模式。