关键词: 基因敲除 分类方法
来源: 互联网
26971 阅读
一、常规基因敲除鼠( Conventional Knockout )
常规基因敲除是通过基因打靶,把需要敲除的基因的几个重要的外显子或者功能区域用 Neo Cassette 替换掉。这样的小鼠其全身所有的组织和细胞中都不表达该基因产物。此类基因敲除鼠一般用于研究某个基因在对小鼠全身生理病理的影响,而且这个基因没有胚胎致死性。
二、条件性基因敲除小鼠( Conditional Knockout )
条件性基因敲除小鼠是通过基因打靶,把两个 loxP 位点放到目的基因一个或几个重要的外显子的两边。该小鼠和表达 Cre 酶小鼠杂交之前,其目的基因表达完全正常。当和组织特异性表达 Cre 酶的小鼠进行杂交后,可以在特定的组织或细胞中敲除该基因,而该基因在其他组织或细胞表达正常。
条件性基因敲除鼠适用范围为:( 1 )该基因有胚胎致死性;( 2 )用于研究该基因在特定的组织或细胞中的生理病理功能。
三、基因敲入小鼠( Knockin )
基因敲入小鼠是通过基因打靶,把目的基因序列敲入到小鼠的相应基因位点,使用小鼠的表达调控元件指导目的基因表达。
此类基因敲入鼠一般用于药物的筛选,信号通路的研究等。
获得嵌合体及之后品系纯化详细流程:
基因敲除其他方法:
一、 ZFN 技术制作基因敲除鼠
ZFN 能够识别并结合指定的基因序列位点,并高效精确地切断。随后细胞利用天然的 DNA 修复过程来实现 DNA 的插入、删除和修改,这样研究人员就能够随心所欲地进行基因组编辑。这在过去是无法想象的,传统的基因敲除技术依赖细胞内自然发生的同源重组,其效率只有百万分之一,而 ZFN 的基因敲除效率能达到 10% 。利用这些技术进行小鼠基因的定点敲除和敲入,可以把时间从一年缩短到几个月。
这项技术中设计特异性的 ZFN 是最关键的环节,目前研究者采用计算生物学方法设计高特异性的 ZFN ,但 ZFN 的脱靶( off target ),也就是把不该切的地方切了的问题仍是一个挑战。也正因为这个原因,利用 ZFN 技术进行小鼠的基因修饰还无法完全取代传统技术。
二、 TALEN 技术制作基因敲除鼠
TALEN 技术是一种崭新的分子生物学工具。科学家发现,来自一种植物细菌的 TAL 蛋白的核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有恒定的对应关系。利用 TAL 的序列模块,可组装成特异结合任意 DNA 序列的模块化蛋白,从而达到靶向操作内源性基因的目的,它克服了 ZFN 方法不能识别任意目标基因序列,以及识别序列经常受上下游序列影响等问题,而具有 ZFN 相等或更好的灵活性,使基因操作变得更加简单方便。然而同样因为脱靶的问题,利用 TALEN 技术进行小鼠的基因修饰仍然无法取代传统技术。
更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!
这个模型可否用于检测肿瘤免疫细胞及免疫因子?
6 评论
具体定位
定位的距离是什么~是尾壳核,深度为6mm,小鼠深度1.5cm?应该不太像吧~还有注苏血体积大鼠2ul,小鼠2ml?不是吧~求解!因为本人目前在做大鼠脑出血,也要做小鼠的,但是看到此方法,有些疑问~求解
4 评论
转基因小鼠和野生型的繁育?
我们实验室要从日本买一种转基因小鼠回来繁育,不确定要不要一起买野生型的。请问各位老师前辈,野生型能不能像转基因小鼠一样繁育?买回来少量有没有价值?
3 评论
本网站所有注明“来源:丁香园”的文字、图片和音视频资料,版权均属于丁香园所有,非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,且明确注明来源和作者,不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。
常见蛋白等电点测定方法
北京百泰派克生物科技有限公司
钻石会员 入驻 8 年
细胞生物学实验手册3.成像技术、电子显微技术、扫描探针和扫描电子显微技术、显微解剖、组织矩阵、细胞遗传学和原位杂交、基因组学、转基因、基因敲除和基因消减等方法
上海康朗生物科技有限公司
钻石会员 入驻 10 年
上海钰博生物科技有限公司
金牌会员 入驻 10 年
我的询价
询价列表
暂时没有已询价产品
手机验证
科研好物关注研选号