关键词: 分子 信标技术 应用 进展
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荧光猝灭依赖的是能量共振转移,而转移的效率与荧光基团发射光谱同猝灭基团激发光谱的完全重叠有关。为了荧光能有效猝灭,荧光基团的发射光谱应完全覆盖猝灭基团激发光谱。符合此要求且较常用的荧光剂-淬灭剂有:EDANS(5′- (2′-氨乙基氨基奈-1-磺酸)和DABCYL(4′-(4′-二甲基氨基叠氮苯) 苯甲酸 6-荧光素和DABCYL 、 荧光素和罗丹明、 荧光素和芘丁酸 、 香豆素和乙锭 荧光素和伊红 、 一些铽螯合物和四甲罗丹明等等。 新型的分子信标波长转移分子信标
优点: 如果对不同分子信标探针修饰以具有不同特征发射波长的荧光发射基团,就可在同一激发光下,通过检测这些特征波长的荧光强度, 实现在同一体系中的多基因分析。
分子信标的应用
核酸的检测分析 实时定量PCR测定靶标浓度 活体内核酸的动态检测 同时检测多个靶核苷酸 研究DNA—蛋白质的相互作用 用于核酸酶的研究 用于研究DNA——蛋白质的相互作用
应用1、实时定量PCR测定靶标浓度
将分子信标简单地密封在PCR 管中,在每个循环的退火阶段分子信标与扩增产物结合产生荧光,未结合的分子信标不发荧光,这样荧光信号随着反应循环的增加而增强,从而反映出PCR 过程中扩增产物浓度的增加。
由于加有分子信标的PCR 管在整个反应中是密封的,因此可避免传统PCR后扩增产物凝胶电泳过程带来的污染,简化检测手段,检测灵敏度高。
应用2、活体内核酸的动态检测
目前尚缺乏对生物活体内核酸直接研究的有效方法,分子信标为活体内核酸的代谢运转等动态过程研究提供了可能并已用实验证明。
Perlette 利用微注射法在袋鼠肾细胞质中引入分子信标,对单个活细胞中的RNA 进行了检测,并利用ICCD 成像系统得到了一系列反应分子信标与RNA 结合的荧光图像。结果表明,利用分子信标可以有效地实时检测活细胞中的RNA 及研究RNA/ DNA 的杂交过程。
Perlette J , Tan W H. A nal . Chem. , 2001 , 73 :5544~5550
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