关键词: SDS-PAGE 蛋白转印 western Blot试剂 配制
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1.5 mol/L Tris (PH8.8)
1.称量181.7g Tris置于1L烧杯中。
2.加入约800 ml去离子水,充分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调节pH值至8.8。
4.定容至1L.
5.高压灭菌后,室温保存
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1oC,溶液的pH值大约降低0.03个单位。(参照kara公司Catalog-N1)
1 mol/L Tris (PH6.8)
1.称量121.1g Tris置于1L烧杯中。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需的pH值。
pH值 浓HCl6.8 7.4 约70 ml7.6 约60 ml8.0 约42 ml
5.高压灭菌后,室温保存。
注意:1.溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1oC,溶液的pH值大约降低0.03个单位。2. 如1 mol/L溶液呈现黄色,应予丢弃,并置备质量更好的Tris。(参照kara公司Catalog-N1)
30%丙稀酰胺(100ml)
1.称量下列试剂置于烧杯中。丙烯酰胺(Acrylamide) 29 g双丙烯酰胺 (BIS) 1 g
2.加入约60 ml去离子水,充分搅拌溶解。
3.定容至100 ml, 用0.45 µm滤膜滤去杂质。
4.于棕色瓶中4 oC保存。注意:1. 丙烯酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成分。
(参照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924)
30% SDS
1.称量10 g 高纯度(电泳级)的SDS置于100~200 ml烧杯中。
2.加入约800 ml去离子水,68oC加热溶解。
3.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
4.定容至100 ml,室温保存。
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