关键词: 质粒 DNA 电泳
来源: 丁香园
9931 阅读
[ 实验目的 ] 通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 的方法和技术。 [ 实验原理 ] DNA 分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。 DNA 分子在高于等电点的 pH 溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖 - 磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链 DNA 几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极移动。
在一定的电场强度下, DAN 的迁移速度取决于分子筛效应,即 DNA 分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量的 DNA 片段泳动速度不一样,可进行分离。 DNA 分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。
凝胶电泳不仅可以分离不同相对分子质量的 DNA ,也可以分离相对分子质量相同,但构型不同的 DNA 分子。不同构型的 DNA 分子迁移率不同。 凝胶中的 DNA 可与荧光染料溴化乙锭 (EB) 结合,在紫外灯下可看到荧光条带,籍此可分析实验结果。 [ 仪器、材料与试剂 ] (一)仪器 1. 水平电泳槽 2 .电泳仪 3 .紫外灯或凝胶成像仪 (二)材料 1. 冰醋酸 2. 三羟甲基氨基甲烷( Tris ) 3. 乙二胺四乙酸( EDTA ) 4. 溴酚兰 5. 琼脂糖 7. 甘油 8. DNA 染料 9. 吸头、小离心管 (三)试剂 6×DNA 电泳加样缓冲液: 甘油 30% 溴酚蓝 0. 25% Tris-Cl(pH8. 0) 70% 4℃ 保存。 室温保存,用时稀释 5 倍。 DNA 分子量标准: 200bp Ladder λDNA 分子量标准: 5ng/ul , 10ng/ul 50×TAE 电泳缓冲液贮存液配方: (50×) 每升 242g Tris 57. 1ml 冰醋酸 100ml 0. 5mol/L EDTA(pH8. 0) 室温保存,用时稀释 50 倍。 10mg/ml EB : 1. 0g 溴乙锭溶于 100ml 超纯水中。 [ 实验步骤 ] (一)制备琼脂糖凝胶 1 .称 1. 2g 琼脂糖,加 100ml 电泳缓冲液( 1×TAE )加热熔化,取出摇匀,即为 1. 2% 的凝胶。 2. 当胶液冷至 60℃ 时,加 EB10μl ,小心混匀,缓慢倒入制胶模具中,在胶一端插上梳子。 3 .待胶凝固后,拨出梳子,将模具置于电泳槽中,加入 1×TAE ,让液面高于胶面 2 -3mm 。 4 .取 4ul 质粒,加 2ul lodaing buffer , 6ulddH 2 O ,混匀,用加样器吸取样品。加入点样孔中,注意加样器吸头应恰好置于凝胶点样孔中,不可刺穿凝胶,也要防止将样品溢出孔外。 5 .接通电源, 1-5V/cm 电压,开始电泳。 6 .当溴酚兰染料移动到距离胶前沿 1 -2cm 处,停止电泳。 7. 切断电源后,取出凝胶,在紫外灯( 360nm 、 312nm 或 254nm )下或经凝胶成像系统观察或拍照。 附注: 影响 DNA 片段琼脂糖电泳的几个因素: 1. DNA 分子的大小:线性 DNA 分子的迁移率与其分子量的对数值成反比。 2. 琼脂糖浓度:一定大小的 DNA 片段在不同浓度的琼脂糖凝胶中的迁移率是不相同的。相反,在一定浓度的琼脂糖凝胶中,不同大小的 DNA 片段的迁移率也是不同的。若要有效地分离不同大小的 DNA ,应采用适当浓度的琼脂糖凝胶。 3. DNA 分子的形态:在同一浓度的琼脂糖凝胶中,超螺旋 DNA 分子迁移率比线性 DNA 分子快,线性 DNA 分子比开环 DNA 分子快。 4. 电流强度:每厘米凝胶电压不超过 5V ,若电压过高分辨率会降低,只有在低电压时,线性 DNA 分子的电泳迁移率与所用电压成正比。
更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!
小树洞:你们工作后第一个月都得了多少工资呢?
妇产专硕18年刚毕业,四证合一。找了个市级三甲医院,合同的。工作一个月,当时发工资,968元。之前应聘的时候说前三月试用期1300 元。试用期过后加奖金,没想到,呵呵,租房一月1000元。今天直接崩溃。打算明天打电话问财务扣的都是什么钱,了解清楚后闪人。回家继承祖业—烤地瓜,烤玉米走起。你们工作后第一个月都得多少工资呢?
16 评论
抗体保存
用奶粉或者BSA配好的一抗/二抗可以在—20度保存多久?大约几个星期还是一两个月?
7 评论
DNA提取有杂带
PCR产物用试剂盒回收的时候,发现有杂带?有哪些办法可以提取得更干净?
5 评论
本网站所有注明“来源:丁香园”的文字、图片和音视频资料,版权均属于丁香园所有,非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,且明确注明来源和作者,不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。
质粒DNA制备服务-科研级别
北京义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)
金牌会员 入驻 16 年
LTxFECT 质粒DNA转染试剂盒
上海中乔新舟生物科技有限公司
钻石会员 入驻 15 年
N96 快速质粒DNA小提试剂盒(DP115)
天根生化科技(北京)有限公司
钻石会员 入驻 17 年
Phi29 MAX DNA Polymerase (用于质粒和基因组的等温扩增的DNA聚合酶) (N106)
南京诺唯赞生物科技股份有限公司
金牌会员 入驻 13 年
琼脂糖凝胶电泳检测质粒dna
北京百泰派克生物科技有限公司
钻石会员 入驻 8 年
pLUS质粒DNA
江苏天净沙基因诊断技术有限公司
钻石会员 入驻 3 年
我的询价
询价列表
暂时没有已询价产品
手机验证
科研好物关注研选号