关键词: 提取 抽提 染色体
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病毒感染宿主细胞后常常存在一些非整合的线形或环状双链DNA分子,通常称为赫特(Hirt)DNA。
下面是一个试剂盒的步骤:
GENMED 赫特(HIRT)法病毒DNA 纯化试剂盒
1. 准备 个 孔细胞培养板的细胞(不同试剂盒的具体用量不一,说明书中有具体流程) 2. 抽掉 孔细胞培养板里的 孔培养液 3. 轻轻沿壁加入 毫升GENMED 清理液(Reagent A),清洗生长的细胞表面 4. 小心抽掉清理液 5. 加入 微升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,铺满整个培养平面 6. 放进 ℃培养箱孵育 分种 7. 手击振动培养瓶,使细胞脱落,然后加入 毫升用户自备的完全细胞培养液 8. 移入 毫升离心管 9. 放进微型台式离心机离心 秒,速度为 g(或 RPM,例如eppendorf 5415) 10.小心抽去上清液 11.加入 微升GENMED 赫特液(Reagent B),混匀 12.加入 微升GENMED 酶解液(Reagent C),轻轻混匀 13.放进 ℃恒温水槽孵育小时 14.加入 微升GENMED 盐析液(Reagent D) 15.放进 ℃冰箱里孵育 小时或过夜 16.放进 ℃微型台式离心机离心分钟,速度为 g(或 RPM,例如eppendorf 5415) 17.移出 微升上清液到新的毫升离心管 18.加入 微升GENMED 抑酶剂(Reagent E) 19.放进 ℃恒温水槽孵育分钟 20.移出 微升(二分之一内容物)到另一个新的毫升离心管 21.分别加入 微升GENMED 萃取液(Reagent F) 22.涡旋震荡仪上强烈震荡秒 23.放进 ℃微型台式离心机离心分钟,速度为 g(或 RPM,例如eppendorf 5415) 24.分别移出上层液相溶液到新的毫升离心管,留下 微升相位交界面的溶液 25.分别加入 微升GENMED 浓缩液(Reagent G) 26.分别加入 毫升GENMED 沉淀液(Reagent H) 27.涡旋震荡仪上强烈震荡秒 28.放进 ℃微型台式离心机离心分钟,速度为 g(或 RPM,例如eppendorf 5415) 29.小心抽掉上清液 30.分别加入 毫升GENMED 净化液(Reagent I) 31.放进 ℃微型台式离心机离心分钟,速度为 g(或 RPM,例如eppendorf 5415) 32.小心抽掉上清液 33.空气中晾干 34.分别加入 微升GENMED 溶解液(Reagent J) 35.合并 管为 管离心管
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小树洞:你们工作后第一个月都得了多少工资呢?
妇产专硕18年刚毕业,四证合一。找了个市级三甲医院,合同的。工作一个月,当时发工资,968元。之前应聘的时候说前三月试用期1300 元。试用期过后加奖金,没想到,呵呵,租房一月1000元。今天直接崩溃。打算明天打电话问财务扣的都是什么钱,了解清楚后闪人。回家继承祖业—烤地瓜,烤玉米走起。你们工作后第一个月都得多少工资呢?
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抗体保存
用奶粉或者BSA配好的一抗/二抗可以在—20度保存多久?大约几个星期还是一两个月?
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DNA提取有杂带
PCR产物用试剂盒回收的时候,发现有杂带?有哪些办法可以提取得更干净?
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