标签: 纤维素 活化 酶学实验手册第三章
这种方法适用于具有临位二醇结构的材料,如纤维素、琼脂糖、葡聚糖。高碘酸盐氧化可形成乙醛基团,与氨基基团反应形成希夫碱,并通过硼氢化还原而稳定。来源:《酶学实验手册》
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实验所需「试剂」具体见「其他」
将 2 g 纤维素悬浮于 40 ml 0.1 mol/L NaHCO3-0.06 mol/L NaIO4 中,黑暗条件下放置 2 h,然后在玻璃料上用 0.1 mol/L pH 9.0 碳酸钠缓冲液冲洗。在 40 ml 缓冲液中加入待固定的蛋白质(约 1 mg/ml),室温振荡过夜。为去除希夫碱,在溶液中加入 2 ml NaBH4,室温振荡 30 min。之后再次加入 2 ml NaBH4,室温振荡 30 min。用 0.1 mol/L pH 4.0 乙酸盐-乙酸、PBS 和 0.05% 的吐温 20 冲洗固体材料。
试剂:
0.1 mol/L NaHCO3-0.06 mol/L NaIO4(NaHCO3,Mr=84.0;NaIO4,Mr=213.9;8.4 g NaHCO3 ,12.8 g NaHCO3 溶于 100 ml H2O)
0.1 mol/L 碳酸钠缓冲液(NaHCO3-Na2C03),pH 9.0
NaBH4 溶液(0.1 g NaBH4 溶于 10 ml 0.1 mol/L NaOH,现配)
0.1 mol/L 乙酸钠-乙酸,pH 4.0
PBS(磷酸缓冲液:10 mmol/L 磷酸二氢钾-钠,pH 7.2,0.8% NaCl,0.02% KCl)
0.05% 吐温 20 溶于 PBS
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