标签: 脲 酰胺水解酶 酶学实验手册第三章
脲+H2O+2H+→CO2+2NH4+含金属锌的酶。释放的NH3可以通过pH稳定计的辅助进行确定,也可以通过与谷氨酸脱氢酶相偶联的分光光度计法测定。《酶学实验手册》
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实验所需「试剂」具体见「其他」
9 ml 0.2 mol/L 脲
0.2 ml 脲酶
自动滴定管充满 0.1 mol/L HCl,通过 pH 稳定计使得 pH 保持在 6.1,大约每 10 min 记录一次通过自动滴定管每次滴定的体积。
试剂:
0.2 mol/L 脲(Mr=60.0;1.2 g 溶于 100 ml H2O 中,调节至 pH 6.1)
0.1 mol/L HCl,标准溶液
脲酶(1 mg/ml)
0.98 ml 实验混合物
0.02 ml 脲酶
25℃、340 nm 处吸收值降低,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6
2.0 mol/L 脲(Mr=60.0;12 g 溶于 100 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6)
25 mmol/L ADP(二钠盐,Mr=471.2;118 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6)
10 mmol/L NADH(二钠盐,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH7.6)
0.1 mol/L α-酮戊二酸(单钠盐,Mr=168.1;168 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6)来源于牛肝脏的谷氨酸脱氢酶(GluDH,500 U/ml 在 0.1 mol/L 磷酸钾中,pH 7.6)
脲酶(大约 1 mg/ml,使用前用 0.1 mol/L 磷酸钾、pH 7.6 溶液稀释至约 0.1 U/ml)
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