标签： 激酶分析 细胞裂解 精编分子生物学实验指南第五版第十七章
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1. 用预冷的 PBS 洗细胞 2 次，将最后的洗液尽可能吸尽。
2. 加入 0.75 ml 裂解缓冲液重悬 2 × 107 个细胞，若是贴壁细胞必须完全覆盖。加入蛋白酶抑制剂储存液，使其终浓度为 1 mmol/L PMSF，100 μmol/L 苯甲脒，5 μg/ml 亮抑蛋白酶肽，5 μg/ml抑胃酶肽 A，5 μg/ml抗蛋白酶。
3. 4°C 冰浴细胞 10 min，刮离细胞并将裂解液移至标记的微量离心管中。
4. 4°C，最大速度离心 10 min，小心地将上清移至新微量离心管中，迅速进行后续实验。
若用于免疫沉淀（先使用 25%～50% 的裂解物进行初试验，再依据结果进行裂解物量的调整）和简单纯化，0.75 μl 的裂解物就足够了。如果纯化过程需经超过一次以上的层析步骤。可适当扩大裂解液的量，因为每一层析步骤仅能回收 10%～20% 的激酶活性。
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