1. 抗原的制备
1.1 吸取灭菌的 0.5% 石炭酸生理盐水 5 ml,注入大肠杆菌斜面培养物上,将菌苔洗下。
1.2 用无菌毛细滴管吸取洗下的菌液,注入无菌小试管。
1.3 将此含有菌液的小试管放 60℃ 的水浴箱中 1 h,并不时摇动。
1.4 取一与比浊管同质量的小试管,加菌液 1 ml,再加石炭酸生理盐水 4 ml(或更多,视原菌液浓度而定),混匀后与各比浊管比浊。假若与第 3 管的浊度相等,则此菌液每毫升的细菌数为: 5×900 000 000=4 500 000 000(45 亿)
附 McFarland 比浊管配制法 用同质量同大小的试管 10 支按下表加入药品。
1.5 稀释
用 0.5% 石炭酸生理盐水将菌液稀释至每毫升含 9 亿个细菌。
1.6 无菌试验
将已稀释好的菌悬液接种少量于肉汤培养基内,培养 24~48 小时,观察有无细菌生长,如无细菌生长,即可放冰箱备用。
2. 免疫血清的制备
2.1 注射动物
2.1.1 用消毒注射器和 7 号针头抽取以上制备好的大肠杆菌抗原(抽取前摇匀),按下表所列剂量与日程注射家兔耳静脉。
2.1.2 第 14 日 自耳静脉采血 1 ml,分离血清,测其凝集效价,如合格即即可大量采血。
2.1.3 第 16 日 采血。
2.2 家兔心脏采血(见「动物采集血液实验」)
2.3 制备血清
2.3.1 采集的血液移入灭菌大试管(或平皿)后,尽量放成最大斜面,凝固后放人 4~6℃ 冰箱中,使其自然析出血淸。
2.3.2 用已灭菌的毛细滴管分出血清,若血清中带有红细胞,则须离心沉淀以去掉红细胞。然后将血清装入灭菌细口瓶中,并测定抗血清的效价。
2.3.3 加入防腐剂,使血清含有 0.01% 硫柳汞。
2.3.4 用蜡或胶带纸封瓶口,贴上标签,注明抗血清名称,凝集效价及日期,放冰箱备用。
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