1)在冰冷的PBS里解剖胚胎或组织。置β-半乳糖苷酶固定剂,室温至合适的时间。以下是固定小鼠胚胎和组织的指导:外植体和E 6.5到E 7.5胚胎5〜10 min; E 8到E 9.5胚胎或尾巴切面 15〜30 min; E 10 到 E 12.5 胚胎 30 min〜1.5 h; E 13 到 E 14.5 胚胎 2 h; E 15.5 或更大的组织则需要解剖出来或切一半,然后固定2 h。新生幼鼠或更大的小鼠的灌注需要在解剖特定组织染色之前进行。
2)用β-半乳糖苷酶洗涤缓冲液室温洗涤3次,每次15 min (针对小胚胎或尾巴切面), 或每次30 min (针对Ell胚胎和大组织),头尾相接地轻柔转动。