标签: 等电点聚焦 蛋白质分离 精编分子生物学实验指南第五版第十章
蛋白质可以在包被或非包被的毛细管柱分离,分离方案的选择取决于靶蛋白的特异属性。最重要的属性就是pl,这由一般的凝胶电泳或CE决定。等电点聚焦分离是CE分离的一种。内容来源于《精编分子生物学实验指南(第五版)》
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1. 将两性电解质混合物加入 0.5 ml 蛋白质样品中以达到两性电解质终浓度 2.5%(V/V)。如果需要,加入 IEF 标记达到终浓度 0.1 mg/ml 以校准柱子。
2. 加入样品池。以增压池子(0.5 lb/in2) 的方式注满毛细管。
3. 在阳极池(负极)内放置 10 mmol/L 磷酸,在阴极池(正极)放置 20 mmol/L NaOH。
4. 在 8~10 kV 恒定电压下聚焦样品 4~6 min。检测电流直至其达到稳定状态。
5. 通过放置 20 mmol/L NaOH 在阳极的方式迁移样品,调电压至 10 kV。检测蛋白质通过探测器迁移 15~20 min。
6. 每次运行后以 0.5 lb/in2 用 10 mmol/L 磷酸洗涤柱子达 1 min。室温下将柱子存储于运行缓冲液(短期)或水(长期)中。
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