电泳设备置于冰箱中。 11. 盖上胶盒的盖子( 如 Bio-Rad系统)后就自动接通电源。对常规的分离要求和系统 而言,常采用5 V / c m 的电场强度, 90s的脉冲时间,电泳时间为48h (或参照设备 说明书) 。 12. 当分离电泳完毕,关掉电源,排掉缓冲液,将胶放置含O J y g A n l 的溴化乙锭溶液 中染色2〜24h, 染后拍照。 13. 将 用 P F G E 分离的D N A 转移的带正电荷的尼龙膜上。为了从P F G E 获得的大片段 D N A 的最佳转移,可采用酸去嘌呤的步骤,采用变性转移液和紫外线切割。 14. 将膜与用放射元素标记的探针杂交及放射自显影。使用没使用重复元件和载体序列 的 探 针 ( 或者与未标记的基因组D N A 预先退火,阻断它们的杂交)。 支持方案1 制备包埋有高分子质量的哺乳动物细胞基因组 DNA的琼脂糖块 此方案适用于大部分来源于哺乳动物细胞的活细胞,因为这些细胞能制成单细胞悬 液 ,也可用于将组织解离而得到活细胞。尽量不要使用冻存的细胞,除非没有其他的 D N A 来源,因为冻融的过程会影响样品的质量。 材 料 ( 标V 的条目参见附录1) 1.0% (m /V ) 低熔点胶,置 于 H B S S 中 哺乳动物细胞 V H B S S , 37〇C V 细胞裂解液 V T E 缓冲液 V P M S F /T E 洗 涤缓冲液( 新鲜配制) 50°C和 42°C水浴 阻 隔 模 子 ( 如 Bio-R a d 的阻隔模子,许 多 P F G E 系统都能提供) Beckman G P R 离 心 机 ( 带 有 GH-3. 7 的转子) 1•将装有适量的1 . 0 % 的低熔点琼脂糖胶的管子放到装有一半水的烧杯中,加热烧杯刚 好达到溶解低熔点琼脂糖胶的温度,注意要确保琼脂糖中的水不丢失,溶 卜 将其置于50°C的水中降温。 2 . 用 7 0 % 的乙醇清洗阻隔模子,组装好后,然 后 将其置于碎冰中预冷( 也可见产品手册)。 Bio-R a d 的 阻 隔 模 子 能 形 成 容 量 为 225jlJ 的 股 孔 ,按 基 本 方 案 中 介 绍 的 方 法 切 成 l m m X 4m m X 6m m 的 胶 块 。每 一 胶 块 约 含 3j L t g D N A 。对 于 四 倍 体 或 多 倍 体 的 细 胞 , 就 要 根 据 实 际 情 况 调 整 到 SjUg D N A , 而 不 能 过 量 。" src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2016/07/B1469604188313jdpy8k4sdjpng_small.jpg" style="width: 436px; height: 633px;" />